紫芪方对IEC-6小肠上皮细胞缺氧复氧损伤后细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的:观察缺氧复氧对IEC-6肠上皮细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,探讨保护肠道屏障功能的复方中药--紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制.方法:建立IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤模型.采用血清药理学方法,在细胞培养液中加入不同给药剂量(间隔1 h,两次给药,20 g/kg)获取的紫芪方药物血清、参附药物血清及生理盐水血清(S).应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位变化.结果:IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤后细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),线粒体膜电位明显降低(P＜0.01);与损伤模型对照组比较,紫芪方药物血清能明显抑制IEC-6肠上皮细胞凋亡(P＜0.05),并具有保护IEC-6肠上皮细胞线粒体膜电位的作用(P＜0.05).结论:缺氧复氧可导致IEC-6肠上皮细胞凋亡数量明显升高和线粒体膜电位降低.紫芪方含药血清可减少细胞凋亡数量及保护细胞线粒体膜电位.紫芪方保护肠道的机制可能与抑制细胞异常凋亡有关.     

黄芪提取物对缺氧/复氧诱导神经元损伤的保护作用

目的探讨黄芪提取物在缺氧/复氧所致神经元损伤中的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,建立缺氧/复氧损伤的海马神经元凋亡模型。采用四唑盐(MTT)法和LDH释放法检测细胞活力;Hoechst染色、Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测AKT和磷酸化AKT蛋白的表达。结果经缺氧/复氧后细胞活力明显下降,出现凋亡典型的形态学特征,磷酸化AKT蛋白表达下降;黄芪提取物能明显提高损伤海马神经元细胞活力,降低细胞凋亡率,促进磷酸化AKT蛋白的表达。结论黄芪提取物对缺氧/复氧神经元具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT细胞信号通路有关。     

竹叶提取物对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的本研究旨在探讨竹叶提取物(BLE)对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其分子机制.方法采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤+ BLE(10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 g·L-1)组、缺氧/复氧损伤+ Xiangdan(2.5×10-3g·L-1)组.检测培养基质乳酸脱氢酶(LDH)的活性,细胞线粒体脱氢酶活性,超氧化物歧化酶活性(SOD),NO的含量,心肌细胞Ca2+和丙二醛(MDA)浓度.结果 BLE可显著提高缺氧/复氧心肌细胞SOD的活性及细胞线粒体脱氢酶活性,并能显著抑制LDH的活性、MDA的生成,提高NO的含量,降低Ca2+的含量.结论 BLE对缺氧/复氧心肌细胞损伤具有一定的保护作用.     

竹叶提取物对缺氧／复氧心肌细胞的保护作用

目的本研究旨在探讨竹叶提取物(BLE)对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其分子机制。方法采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤 BLE(10-1,10-2,10-3,10-4,10-5g.L-1)组、缺氧/复氧损伤 X iangdan(2.5×10-3g.L-1)组。检测培养基质乳酸脱氢酶(LDH)的活性,细胞线粒体脱氢酶活性,超氧化物歧化酶活性(SOD),NO的含量,心肌细胞Ca2 和丙二醛(MDA)浓度。结果BLE可显著提高缺氧/复氧心肌细胞SOD的活性及细胞线粒体脱氢酶活性,并能显著抑制LDH的活性、MDA的生成,提高NO的含量,降低Ca2 的含量。结论BLE对缺氧/复氧心肌细胞损伤具有一定的保护作用。     

黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为10、30、100mg·mL-1的APS,观察APS对细胞上清液中缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量、MDA含量、SOD活性。用MTT法检测APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。用流式细胞仪测定APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果 APS可明显减少缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量(P<0.05或P<0.01);降低MDA含量,提高SOD活性(P<0.05或P<0.01);明显提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,并能明显抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡。结论 APS对培养心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,作用机制与其增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。     

荭草苷对缺氧-复氧心肌细胞的保护作用

目的探讨荭草苷 (orientin)对缺氧 复氧损伤心肌细胞的保护作用及其机制。方法采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,实验分为正常细胞培养组、缺氧 复氧损伤模型组、缺氧 复氧损伤 +荭草苷 (3、10、30 μmol·L-1)组、缺氧 复氧损伤 +verapamil(5 μmol·L-1)组。用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化 ,荧光法测定细胞内钙浓度的变化。结果荭草苷可显著提高缺氧 复氧损伤心肌细胞内SOD的活性及细胞内线粒体脱氢酶活性 ,并能显著抑制LDH的活性、MDA的生成以及细胞内钙浓度。结论荭草苷具有明显的抗缺氧 复氧损伤 ,保护心肌细胞的作用     

缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用

目的观察缺氧_复氧对大鼠心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用。方法在缺氧_复氧条件下 ,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞内K /Na 浓度比及Ca2 浓度的影响。结果缺氧_复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用 ,浓度为4μmol·L -1 的川芎嗪对缺氧_复氧损伤细胞有保护作用 ,它能抑制损伤细胞挛缩 ,提高损伤细胞生存率 ,抑制心肌细胞内K /Na 浓度比的降低、增加细胞内Ca2 浓度 ,且剂量越大 ,保护作用越好 ,即川芎嗪对缺氧_复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性。结论川芎嗪对缺氧_复氧损伤的大鼠心肌细胞具有保护作用 ,它能显著地对抗缺氧_复氧对心室肌细胞的损伤作用     

黄芪甲苷通过调节线粒体稳态减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤

探讨黄芪甲苷对缺氧复氧损伤大鼠心肌细胞及线粒体形态和功能的影响及机制。大鼠心肌细胞H9c2分为正常对照组、缺氧复氧组和黄芪甲苷组。CCK-8 (cell counting kit-8)法检测细胞活力;酶标法检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DHE (dihydroethidium)和MitoSOX荧光探针法检测细胞和线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位;calcein-AM (acetoxy‐methyl ester)荧光探针法检测线粒体通透性转换孔开放性;TUNEL (terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling)法检测细胞凋亡率;Western blot法检测线粒体分裂/融合蛋白Drp1 (dynam...     

缺氧后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：通过建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型观察缺氧后处理的心肌保护机制。方法雄性SD大鼠,体质量250～350 g ,随机分为3组：正常组（NOR组）、缺氧组（H／R组）、缺氧后组（HP组）。采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential , MMP）、细胞内钙离子荧光强度以及 Western blot方法测定磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（p‐p38MAPK）表达量。结果（1）与正常组比较,H／R组和 HP组 MMP显著降低（P＜0．05）;HP组MMP明显高于 H／R组（P＞0．05）;（2）与正常组和 HP组比较,H／R组细胞内钙离子荧光强度显著升高（P＜0．01）;HP组和正常组间差异无统计学意义（P＞0．05）;（3）与正常组和 HP组比较,H／R组p‐p38MAPK表达量显著升高（P＜0．05）;HP组和正常组间表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。结论缺氧后处理可对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞产生保护作用,其机制可能与下调心肌细胞p‐p38M A PK 表达量、抑制线粒体膜电位下降以及防止钙超载进而抑制凋亡有关。     

1-磷酸鞘氨醇后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）后适应对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组,即①正常（Con）组;②缺氧/复氧（H/R）组;③S1P低浓度（L）组;④S1P中浓度（M）组;⑤S1P高浓度（H）组。测定各组H9c2心肌细胞的存活率; 收集细胞培养液测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;Fura 2-AM标记细胞内游离钙离子,检测荧光强度以反映细胞内游离钙离子浓度的变化;Western Blot法测定保护性蛋白热休克蛋白70 （HSP70）的表达情况。结果 对于H/R 损伤的H9c2心肌细胞,S1P能够提高细胞的存活率,降低细胞内MDA含量及细胞内钙离子浓度,提高细胞内SOD活力,增强抗凋亡蛋白HSP70的表达,且呈一定的浓度依赖性。结论 S1P可以减轻心肌细胞氧化应激损伤,改善心肌细胞活力并减少凋亡。S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过减少Ca2 超负荷,增加抗凋亡蛋白HSP70表达来实现的。     

HPLC-MS法分析不同提取方法黄芪三七配伍的化学成分变化

目的:研究采用两种不同提取方法时,黄芪和三七配伍前后化学成分的变化。方法:用HPLC法对单药及两药的水提醇沉法和醇提法提取液进行检测和比较分析,并结合LC-MS提供的分子量信息,推测产生变化的化学成分的结构。结果:黄芪和三七的水提醇沉法与醇提法的提取液相比,化学成分人参皂苷Rh1和Rg2的含量明显增加,且人参皂苷Rh4、三七皂苷Fe及三七皂苷T5等化学成分仅在水提醇沉提取液有检出;另有4个化学成分峰仅存在于醇提法的低极性部位,而在水提醇沉提取液中未检出。结论:单药及两药的提取液比较并没有新成分产生,仅在化学成分的含量上存在差异。而采用不同提取方法,黄芪和三七配伍的化学成分溶出种类及含量均有明显差别,尤其对三七化学成分的溶出影响较大。     

黄芩素-7-甲醚对缺氧致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究黄芩素-7-甲醚对缺氧PC12细胞的保护作用。方法 将PC12细胞分为正常对照组、缺氧模型组、芦丁组和黄芩素-7-甲醚组,培养24 h后,MTT法检测黄芩素-7-甲醚对细胞活力的影响;酶标仪法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性以及细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平;2'',7''-二氯荧光素探针法检测细胞内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的mRNA和蛋白的表达。结果 与正常对照组相比,缺氧导致PC12细胞活力显著降低,LDH、MDA和ROS水平显著升高,抗氧化酶SOD和CAT的活力显著降低。黄芩素-7-甲醚预处理能够逆转这些变化。此外,缺氧能够诱导细胞内Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达增加,而黄芩素-7-甲醚能够进一步提高Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达。结论 黄芩素-7-甲醚对缺氧致PC12细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路,抑制氧化应激损伤有关。     

铁皮石斛多糖对缺氧/复氧诱导星形胶质细胞AMPK/ULK1通路相关自噬的影响

目的 探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）/UNC-51类似自噬激活激酶1（UNC-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1）通路相关自噬的影响。方法 体外培养人星形胶质细胞,分为对照组、H/R组（H/R建模）、低浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+100 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）、中浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+200 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）和高浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+400 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞中丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平;Western blotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3） I、LC3 Ⅱ蛋白表达情况。结果 与对照组相比,H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高,星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用,可促进细胞存活并减少细胞凋亡。     

果糖二磷酸钠镁对心肌细胞缺氧复氧损伤修复作用的体外研究

目的:体外研究果糖二磷酸钠镁对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的修复作用及其机制。方法:采用原代培养4d的心肌细胞建立H/R损伤模型,分为H/R组和H/R+果糖二磷酸钠镁高、中、低浓度(4.8、2.4、1.2mg·mL-1)组,另取正常细胞设为正常对照组。加入相应药物处理后分别测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)活性及细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),并用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:与H/R组比较,果糖二磷酸钠镁组能显著降低细胞中LDH、CPK、[Ca2+]i水平(P<0.01或P<0.05),减轻细胞超微结构的损伤。结论:果糖二磷酸钠镁对H/R损伤的心肌细胞具有修复作用,其作用可能与降低钙超载有关,且具有浓度依赖性。     

7-羟乙基白杨素对低压低氧致脑组织损伤的保护作用

目的 研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对低压低氧诱导大鼠脑组织损伤的保护作用。方法 将52只健康♂ Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、乙酰唑胺组、7-HEC组,每组13只。连续灌胃给药5 d,末次给药后,除正常组,将其余3组置于低压低氧动物实验舱,升至8 000 m海拔缺氧处理24 h。HE染色观察脑组织病理改变,酶标法检测脑组织中过氧化氢（H₂O₂）和丙二醛（MDA）水平,以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和ATP酶的活力;Western blotting检测蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的表达。结果 与正常组相比,低压低氧导致大鼠脑组织出现明显损伤,H₂O₂和MDA水平显著升高,抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px以及Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase的活力显著降低。7-HEC预处理能够逆转这些变化。此外,低压低氧能够显著升高脑组织中促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,而7-HEC能够下调Bax和cleaved caspase-3表达,上调Bcl-2的表达。结论 7-HEC对低压低氧致脑组织损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其缓解氧化应激,抑制细胞凋亡,改善能量代谢有关。     

吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺、胰岛素单独及联合使用对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制

目的 研究吡那地尔(pinacidil,Pin)、美托洛尔(metoprolol,Met)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、胰岛素(insulin,Ins)四药联用对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为7组,即①正常对照(Con)组;②H/R组;③Pin组;④Met组;⑤Glu组;⑥Ins组;⑦四药联用(PMGI)组。测定各组H9c2心肌细胞的存活率;收集培养液测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western印迹法检测保护性蛋白热休克蛋白70 (heat shock protein 70,HSP70)的表达情况。结果 对于H/R损伤的H9c2心肌细胞,四药联用组与药物单用组或H/R组相比能明显提高细胞存活率,保护细胞膜,减少LDH渗漏;增加抗氧化能力,提高SOD含量;增加HSP70的表达。结论 联合用药组与药物单用组相比保护作用增强。     

瓜蒌提取物对缺血缺氧及缺血后再灌注损伤心肌的保护作用

以异丙肾上腺素致小鼠常压缺氧模型、垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血模型及大鼠心肌缺血再灌注模型 ,对瓜蒌提取物抗心肌缺氧缺血及缺血后再灌注损伤的作用进行探讨 .实验结果表明瓜蒌提取物能延长异丙肾上腺素作用的小鼠常压缺氧存活时间 ,对抗垂体后叶素所致的大鼠急性心肌缺血作用 ,并能显著保护缺血后再灌注损伤的大鼠 .     

伤肌宁胶囊含药血清对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用研究

目的:研究伤肌宁胶囊含药血清对阿霉素(ADR)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法:以SD乳鼠心肌细胞做原代培养,复制ADR损伤心肌细胞模型,测定培养上清液中多项生化指标,并运用流式细胞仪检测凋亡细胞。结果:ADR(终浓度为10-6mol·L-1)可致上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放量增加,同时细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力下降而丙二醛(MDA)含量升高;高、中、低剂量伤肌宁胶囊均可降低LDH活力,增加细胞SOD活力和降低MDA含量。流式细胞仪检测伤肌宁胶囊能降低心肌细胞凋亡率。结论:伤肌宁胶囊能够拮抗ADR引起的心肌细胞自由基脂质过氧化,抑制心肌细胞的凋亡,具有保护心肌细胞损伤的作用。