荧光原位杂交技术在检测人精子染色体异常中的应用进展

荧光原位杂交技术(FISH)以其快速、简便、高灵敏度及高特异性的优点,可一次检测成千上万精子染色体而被广泛应用,并逐渐成为检测精子染色体的首选方法.本文总结近10年来国内外相关文献,将FISH技术在检测正常人、不育者、染色体平衡易位者、有毒物接触者及肿瘤患者化疗后精子染色体异常方面的应用加以综述.     

母血中胎儿有核红细胞用于无创产前诊断的研究

目的 用分离到的胎儿有核红细胞,评价应用荧光原位杂交技术筛查染色体非整倍性的临床应用价值.方法 43例(孕周17～21+4周)拟行产前诊断的孕妇外周血20ml,用双密度梯度离心和双抗体磁性活化细胞分选(magnetic activated cell sorting,MACS)方法富集孕妇外周血中胎儿有核红细胞,其中10例患者富集的细胞进行吉姆萨-瑞氏染色,10例进行抗人CD235a和CD71免疫荧光抗体染色,行细胞鉴定和计数.23例富集后的细胞用荧光染色体原位杂交(fluorescence chromosomal in situ hybridization,FISH)探针进行非整倍体分析,并与羊水培养后核型分析结果进行比较.结果 所有标本均分离出有核红细胞,并经组织学染色、免疫荧光特异抗体和FISH鉴定.23例FISH诊断中,未发现非整倍体异常;14例男性胎儿有13例发现Y荧光信号,1例未发现,女性胎儿中均发现2个X荧光信号.结论 荧光原位杂交技术可对经富集的孕妇外周血中胎儿细胞进行非整倍体诊断.     

联合应用荧光原位杂交与核型分析在产前诊断的对比研究

目的 探讨荧光原位杂交(FISH)和核型分析技术在产前诊断中的优势和不足.方法 在B超引导下抽取150例孕妇的羊水,用特异性探针GLP13/21和CSP18/X/Y对未培养的羊水细胞进行原位杂交;同时培养羊水细胞进行核型分析,并结果对比.结果 150例羊水细胞核型分析和FISH检测结果均成功.核型分析报告时间为10～15 d,而FISH仅为2d.150例羊水细胞,染色体非整倍体46例,结构异常7例.FISH检测出非整倍体45例,敏感性97.83％;未能检测出1例X染色体部分缺失及其他结构多态性;无假阳性结果,特异性保持在100.00％.结论 FISH可以快速、准确地诊断胎儿染色体数目异常,但判断结构异常仍需核型分析.     

Fluorescence in situ hybridization in uncultured amniocytes for detection of aneuploidy in 4210 prenatal cases

Background  Almost all reported fluorescence in situ hybridization (FISH) kits for prenatal diagnosis use probes from foreign (non-Chinese) countries. The aim of this study was to analyze the reliability of domestic (Chinese) FISH probe sets to detect aneuploidies of chromosomes 13, 18, 21, X, and Y related to prenatal diagnosis in 4210 cases.

Methods  Cytogenetic karyotyping was carried out as a standard prenatal diagnostic test, and amniotic fluid cell interphase FISH analysis was performed using two sets of probes (centromeric probes for chromosomes 18, X, and Y, and locus-specific probes for chromosomes 13 and 21) provided by GP Medical Technologies, Beijing, China. Then we compared the two results and found the performance characteristics for informative FISH results of aneuploidies by the domestic kit probes.

Results  In 4210 cases, 4126 cases generated karyotype results and 133 abnormal karyotypes (including 97 aneuploidies) were found. The FISH results of 98 cases (among them, 31 cases gave normal cytogenetic results) were uninformative. The rate of abnormal cases was 3.2% (133/4126). For the abnormal karyotypes, the rate of aneuploidy was 72.9% (97/133). Among the 97 aneuploidies, there were 58 cases of trisomy 21 (58/97, 59.8%), four cases of trisomy 13, 23 cases of trisomy 18, and 12 cases of sex chromosomal aneuploidies. The total concordance of the two methods was 97.9% (95/97; two cases were mosaics that had a low percentage of abnormal cells), and the concordance of trisomy 21, 13, and 18 by the two methods was 100%.

Conclusions  The two sets of the domestic FISH kit probes are reliable for prenatal diagnosis. The results demonstrate that FISH is a rapid and accurate clinical method for prenatal identification of chromosome aneuploidies.

     

宁夏不育男性精子质量分析

精液质量是评估男性生育功能的基本项目之一,目前普遍认为,精液的状态存在一定的地区性差异.包华琼等[1]对重庆部分地区男性精液调查发现,精液质量水平随长江流向呈现地区性差异.宁夏回族自治区(宁夏)地处我国西北,属于高原和干旱地带,有着自身特色的生态特征,在人类的生殖健康方面同样也具有自身的特点.我们对宁夏不育男性精子的质量进行了研究,现报告如下.     

支气管镜刷取细胞染色体异倍性的研究

目的：探讨间期核荧光原位杂交（FISH）检测支拨管镜刷取细胞染色体异倍体和将其应用于肺癌早期诊断的可行性。方法：选取7、8、9和12号染色体特异着丝探针,用FISH技术检测14例肺癌患者支气管镜刷取细胞上述染色体异倍体。结果：在细胞诊断为癌或可疑癌细胞的7例中均发现染色体异倍体,主要特征为7、8和12号染色体增多及9号染色体丢失;而在细胞学未发现恶性证据的7例中,有3例存在7、8和9号染色体异倍体。结论：间期核FISH可以检测出支气管刷取细胞中染色体异倍体,在传统细胞学诊断标准下不能定为恶性的细胞中发现染色体异倍体,可将这种方法用于肺癌的早期诊断。     

多发性骨髓瘤染色体异常的荧光原位杂交技术检测

目的应用荧光原位杂交技术(FISH)检测多发性骨髓瘤(MM)的常见染色体异常情况及临床意义。方法运用FISH,采用5种特异性探针检测18例MM患者染色体异常。结果在18例MM患者中13例出现染色体异常,总异常检出率为72%(13/18);其中1q21异常为6%(1/18),13号染色体的D13S319和Rb-1两种异常均为17%(3/18),14号染色体的IGH异常为33%(6/18),17号染色体的p53异常率为6%(1/18)。并分析发现,染色体异常与患者的性别、年龄、DS分期、ISS分期、血红蛋白、血小板、浆细胞数、β2-微球蛋白(β2-MG)、清蛋白、肌酐、乳酸脱氢酶、C反应蛋白无相关性。13号染色体缺失的MM患者治疗效果不佳。结论 FISH技术检测遗传学异常更敏感可靠;MM患者13号和14号染色体异常多见。MM染色体异常与患者的临床特征无相关性。     

荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤染色体异常

目的:探讨荧光原位杂交(FISH) 技术检测多发性骨髓瘤患者染色体异常的临床价值。方法:运用FISH 技术, 采用5 种特异性DNA 探针检测20 例多发性骨髓瘤(MM) 患者染色体异常, 并与常规细胞遗传学分析结果比较。结果: FISH 显示20 例MM 患者中18 例出现染色体异常, 总异常检出率为90%, 其中14q32 易位65%(13/20), del(13q14) 阳性率为55% (11/20), 1q21 异常25% (5/20), p53 阳性率15% (3/20)。常规染色体分析异常检出率仅为15% (3/20)。结论:del(13q14) 和14q32 易位是MM 患者最常见的染色体异常。 FISH 比传统的染色体检查更敏感可靠, 并可作为MM 预后评估的一项指标。     

荧光原位杂交技术检测膀胱癌染色体畸变的研究

目的 用多色荧光原位杂交（M-FISH）检测膀胱移行细胞癌中常见的染色体畸变。方法50例尿液标本采用FISH技术检测9p21区带及17、7、3号染色体的畸变情况,并对结果进行相应的统计学分析。结果50例膀胱癌病人组中,4个染色体均显示较高的畸变率。9p21以及17、7和3号染色体畸变率与病理分期、分级均有显著相关性（P〈0．01）。结论用荧光原位杂交技术是检测尿路上皮肿瘤染色体畸变的有效方法,可作为早期诊断尿路上皮肿瘤的重要途径。     

Raji细胞中EB病毒染色体整合的荧光原位杂交定位

目的:对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位.方法:用Southern免疫印迹检测Raji细胞中EBV DNA,应用G显带和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位.结果:Raji细胞gDNA经BamHI酶切消化后,与同位素标记的Probe-1(EBV基因组13 232～16 189)杂交,阳性片段大小为10 kb和4 kb,与Probe-2(EBV基因组5～3271)杂交,阳性片段大小为23 kb.Raji细胞中EBV整合位点有1 P,1 q,2 q,3 P,3 q,4 q,5 q,6 q,7 P,7 q,9 q,11 P,14 q,15 q等,其中4 q,2 q,1 q,7 q为EBV DNA整合的高频位点.计数33个整合信号,分别有7,4,4,4个信号位于染色体4 q,2 q,1 q,7 q,这4个位点的信号占所有信号的构成比为64%,15号以后的染色体及2条性染色体均未见EBV整合.结论:本研究用G显带和FISH方法首次对Raji细胞中EBV整合位点进行了定位,Raji细胞中EBV整合具有一些高频位点,是一种非随机性整合.     

不育症患者精浆果糖和柠檬酸的生化检测

通过对 56名不育患者的精浆果糖及柠檬酸浓度的检测分析 ,并与正常生育组相对照 ,发现不育组果糖含量显著降低 ,果糖含量与精子密度和活力有一定关系。精子密度或活力低下者 ,柠檬酸浓度高于对照组 (P<0 .0 5) ,精液液化差或高粘度者 ,柠檬酸含量低于对照组。提示精浆果糖和柠檬酸的检测有助于了解不育患者精囊和前列腺的功能状态以及不育症的病因诊断     

手术结合中医药治疗重度精索静脉曲张不育症的疗效

目的　探讨手术结合中医药治疗重度精索静脉曲张不育症的效果。方法　将 5 8重度精索静脉曲张合并不育症患者随机分成两组 ,分别采用双侧或单侧精索内静脉高位结扎手术 (Ⅰ组 ,n =31)及手术后结合中药(Ⅱ组 ,n =2 7)的方法进行治疗 ,分别检测术前 ,术后 4～ 12个月精子参数等 ,并随访怀孕情况。结果　Ⅰ ,Ⅱ组患者精子总数显著增加 ,手术前后有显著性变化 ,活动率有升高 ,正常形态精子率略有改善 ,怀孕率升高 ,但两组之间差别无统计学意义。结论　手术及术后运用中医药治疗均能有效改善精液质量 ,提高怀孕率 ,但中医药的效果配方等仍值得进一步探讨。     

荧光原位杂交技术的应用

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH））技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术,在疾病诊断中发挥了重要作用。本文主要对FISH技术的原理特点以及临床应用作一综述。     

染色体畸变与膀胱移行细胞癌临床病理相关性研究

目的 探讨通过多色荧光原位杂交(Multicolor Fluorescence in Situ Hybridization,M-FISH)检测3、7、9、17号染色体数目畸变情况与膀胱移行细胞癌(Bladder Transition Cell Carcinoma,BTCC)临床分期与病理分级的关系.方法 采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对46例BTCC尿脱落细胞进行M-FISH检测,得出其敏感性,并分析染色体畸变与BTCC生物学特性的相关关系.结果 ①M-FISH的灵敏度为73.90％(34/46).②M-FISH在肿瘤Ta～T1、T2～T4的阳性率分别为50.00％和84.38％,其阳性率与BTCC临床分期呈正相关性(P＜o.05).③M-FISH在肿瘤G1、G2、G3的阳性率分别为42.86％、80.00％和100.00％,其阳性率与BTCC病理分级呈正相关性(P＜0.05).④M-FISH在复发性BTCC的敏感性为83.33％(10/12).结论 使用M-FISH技术检测尿脱落细胞3、7、9、17号染色体数目畸变在无创性辅助诊断BTCC,分析其浸润深度和恶性程度及对预后复发的监测具有重要的参考价值.     

FISH技术联合常规细胞遗传学检测MDS的染色体异常

目的：探讨荧光原位杂交(FISH)技术联合常规细胞遗传学检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体异常的临床价值。方法：运用FISH技术联合常规细胞遗传学检测100例经骨髓常规涂片及骨髓活检确诊的MDS患者的染色体异常情况，并对此100例患者进行随访。结果：100例MDS患者中FISH检测出48例有染色体异常，总异常检出率为48%，其中-5/5q-检出率最高，为16%，其余异常阳性检出率依次为20q-(15%)，+8(12%)，-7/7q-(11%)，-Y(5%)。而常规细胞遗传学分析异常检出率仅为11%。FISH检测MDS分子遗传学异常阳性率明显高于常规染色体分析(P<0.01)，且两者结合可将检出率提高至49%。随访结果显示FISH结果正常的患者预后明显好于FISH结果异常的患者，其中存在-7/7q-的患者预后最差，转白血病率明显高于其他染色体异常者。而存在20q-及+8的患者预后中等，存在-5/5q，-Y及正常核型的患者预后较好。结论：49%的MDS患者存在染色体异常，-5/5q-，20q-，+8及-7/7q-是MDS患者较常见的染色体异常，-Y 相对较少。FISH比传统的细胞遗传学检查更敏感可靠，两者联合应用可以提高染色体异常检出率。FISH结果可作为MDS预后评估的一项重要依据。     

16 835例中国不育男性的精液质量分析

目的：通过精液常规检查评价大样本量的不育男性的生育能力,为男性不育症的临床治疗和疗效观察提供
科学依据。方法：收集16 835例不育男性的精液标本,以1 567例精子库候选供精者精液标本作为普通人群对照组,采
用计算机辅助精液分析技术(computer assisted sperm analysis,CASA )进行精液常规检测并对结果进行统计学分析。结
果：不育患者精液异常主要表现为弱精症。不育组无精症、弱精症、少弱精症患者比例高于对照组,不育组少精症
患者比例低于对照组(P<0.001)。结论：弱精症、无精症、少弱精症与不育相关,而单纯少精症不一定与不育相关。     

荧光原位杂交技术在快速产前诊断应用的研究进展

随着分子生物学技术和医学遗传学的发展,产前诊断技术向早期、快速、准确、无创伤发展,使越来越多的出生缺陷能够在胚胎发育的较早期诊断出来.荧光原位杂交技术（FISH）是一种为遗传病诊断提供更直观、快速诊断的分子细胞遗传技术,随着DNA技术的发展与染色体特异性探针的出现,FISH技术越来越多应用于生殖医学领域的临床诊断.该文对FISH技术在快速产前诊断中的研究进展作一综述.     

精子乳酸脱氢酶同工酶-X在不育患者中的表达

目的 测定不育患者精子乳酸脱氢酶同工酶X的含量，探讨其对男性不育诊断的意义。方法 选择84例不育患者为研究对象（Ⅰ组），对照组为生殖能力正常的61例（Ⅱ组）。精液乳酸脱氧酶X测定采用定量检测试剂盒，用两点法测定。结果不育患者精子乳酸脱氢酶X较对照组均有明显下降，与对照组差异有显著性（P〈0．01），且与精子的A级＋B级具有相关性（r=0．674，P〈0．05）。结论 不育患者精子乳酸脱氢酶X含量下降，能反映精子的活力，是男性不育临床诊断的较好指标。     

应用荧光原位杂交分析移植山羊体内的人源细胞

目的 应用荧光原位杂交(flurescence in situ hybridization,FISH)分析人造血干细胞(human hematopoietic stem cell,hHSC)经宫内移植至山羊体内后人源细胞的存在、比例及其动态变化。方法 用人特异17号染色体卫星DNA探针对13头移植山羊进行间期FISH(interphase FISH,ISISH)分析,并用人男性特异Y染色体卫星DNA探针对其中2头移植人男性HSC的山羊进行IFISH分析。标本采用外周血细胞滴片、骨髓涂片和肝脏组织印片。结果 在13头移植山羊中,11头山羊体内有人源细胞存在,其中2头为人男性细胞,证实这些山羊为人／山羊异种移植嵌合体;人源细胞比例随山羊月龄递减,最长已存活21个月;所检测月龄段的移植山羊外周血、骨髓和肝脏组织中人源细胞比例小于1‰,但其中2头山羊肝脏组织中人源细胞集中一处,局部比例高达207.92‰和392．41‰。结论 FISH检测出人源细胞能在山羊体内存在并长期存活,表明山羊是经宫内移植hHSC的合适受体;人源细胞在外周血和骨髓中比例低,而在肝脏组织局部比例高,提示山羊肝脏组织局部内环境适于人源细胞存活、增殖和分化。