癫癎发作对幼年大鼠海马齿状回神经发生影响的研究

目的 探讨癫癎发作对幼鼠齿状回颗粒细胞神经发生的影响。方法 生后第15天Wistar大鼠80只,随机分为癫癎组50只.对照组30只。癫癎组以海藻酸致癫,对照组幼鼠以相同方法注射生理盐水,2组于注射后第5天经腹腔注射5溴脱氧尿苷(BrdU)。采用BrdU标记新生细胞,再以β微管蛋白Ⅲ(βⅢtubulin,TuJ1)、钙调蛋白D28k(CaBP)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双标免疫组织化学方法分别标记早期神经元、成熟颗粒细胞和胶质细胞,观察致癫幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生。另外,采用Timm染色对P15致惊幼鼠于致惊后1及2个月的苔藓纤维发芽情况进行观察。结果 BrdU注射后第7天和第21天,癫癎组幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数明显高于各自对照组(第7天:244±15与190±10;第21天:218±19与133±12,P均<0.05);BrdU注射后第7天,癫癎组和对照组幼鼠分别约80.2％和78.7％的BrdU阳性细胞同时表达TuJ1(p>0.05);:BrdU注射后第21天,癫癎组和对照组幼鼠分别约60.2％和58.2％的BrdU阳性细胞同时表达CaBP(P>0.05):BrdU注射后第7天和第21天,两组幼鼠均约3％-5％的BrdU阳性细胞同时表达GFAP。P15致惊幼鼠在致惊后1及2个月均未发现内分子层及CA3区苔藓纤维的发芽现象。结论 癫癎发作可增加幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生,这些新生细胞大多数从颗粒下层迁移     

营养不良对幼鼠癫癎持续状态后海马神经发生影响的研究

目的　探讨发育期营养不良伴发癫持续状态对海马神经发生的影响。方法　采用5 溴脱氧尿苷 (BrdU)标记新生细胞 ,β微管蛋白Ⅲ ( βⅢtubulin ,TuJ1)和胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)分别标记早期神经元和胶质细胞的单、双标免疫组织化学染色 ,观察幼鼠海马的神经发生。结果　营养良好 (N)组和营养不良 (M)组幼鼠癫发作的潜伏时间差异无显著性 [( 12 4± 2 6)min与 ( 11 9± 2 9)min ,P >0 0 5 ]。组织学染色示各组幼鼠海马部位均无明显的神经元丢失。各组幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数 ,营养不良 +惊厥组 (MS组 ,3 74± 18)和营养良好 +惊厥组 (NS组 ,3 12± 2 4)分别明显高于营养不良组 (M组 ,3 0 3± 2 0 )和营养良好组 (N组 ,2 69± 18) (P均 <0 0 1) ,而M组和MS组分别明显高于N组和NS组 (P均 <0 0 1)。BrdU阳性细胞中 ,约有 60 %的BrdU阳性细胞同时表达神经元特异性标记物TuJ1,5 %～ 10 %的BrdU阳性细胞同时表达神经胶质特异性标记物GFAP。结论　早期营养不良没有改变幼鼠在海藻酸致过程中惊厥的易感性和行为表现。营养不良和癫持续状态均可促进幼鼠海马齿状回新生细胞的增殖 ,营养不良伴发癫持续状态时这种增殖将进一步加强 ,而且大多数新生细胞分化为早期     

不同日龄大鼠海马神经发生的研究

目的 探讨年龄因素对大鼠海马齿状回神经发生的影响及新生神经细胞的分化.方法选择7、14、28、60、180 d 5个日龄组SD大鼠,每组8只,雌雄不限.采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记新生细胞,以β微管蛋白(TuJ1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)双标免疫组织化学方法分别标记其神经元和胶质细胞,检测不同日龄大鼠海马齿状回神经发生,了解新生细胞向神经元细胞和神经胶质细胞分化比例.结果5个日龄组大鼠均有海马齿状回颗粒细胞层神经发生现象,细胞形态多样,呈圆形、椭圆形、菱形等,胞核较大,分布于整个颗粒细胞层.日龄7、14、28、60、180 d组大鼠BrdU阳性细胞数分别为158.07±5.37、141.28±7.27、116.93±9.24、76.56±6.88、41.42±4.45,随着日龄的增长,大鼠海马齿状回新生细胞数量渐减少(P＜0.05);日龄7、14、28、60、180 d组大鼠BrdU阳性细胞同时表达TuJ1的比例分别为81.6.%、78.9%、83.9%、80.2%、82.4%,组间比较无明显差异(P＞0.05);各组新生细胞中4%～5%为GFAP阳性.还有少数齿状回的BrdU阳性细胞并不同时表达TuJ1或GFAP.结论在生理状态下不同日龄大鼠海马齿状回存在神经细胞增殖现象,而且随着日龄增加,神经元再生的能力渐减弱,新生细胞多分化为神经元细胞.     

新生期大鼠反复癎性发作对海马神经发生的影响

目的 探讨新生期大鼠反复痫性发作对海马神经发生的影响。方法64只生后1d的Wistar大鼠随机分为惊厥组40只和对照组24只。惊厥组新生鼠在生后1d（P1）、4d（P4）、7d（P7）给予腹腔注射匹罗卡品,制备新生鼠癫痫模型,对照组腹腔注射生理盐水。惊厥组分别在第3次致痫后即刻、第4、14、45天4个时间点处死,各时间点设相应对照组,处死前36h给予惊厥组和对照组大鼠腹腔注射BrdU,用BrdU标记新生细胞,再以NF200双标免疫荧光法标记神经元。结果对照组BrdU标记阳性细胞呈年龄依赖性变化,不同年龄组BrdU阳性细胞的差异有统计学意义（P〈0．01）,惊厥组3次发作后即刻和第4天齿状回BrdU阳性细胞数明显少于相应日龄对照组（P〈0．01）,而发作后14d和45dBrdU阳性细胞数高于相应日龄对照组,发作后14d差异无统计学意义。各时间点惊厥组和对照组大多数BrdU阳性细胞同时表达NF200。结论正常大鼠的神经发生有年龄依赖性,随着日龄增大,齿状回颗粒细胞增生减慢,而新生期反复痫性发作对大鼠不同时期影响不同,反复发作会导致幼鼠早期神经发生减少,而后期神经发生增加,这些新生细胞不仅存在于齿状回,还可见于CA3区及海马以外的某些区域,并可分化为神经元。     

奥卡西平对戊四氮致癫(癎)幼鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 探讨奥卡西平(OXC)对慢性癫(癎)幼鼠海马星形胶质细胞表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的影响.方法 50只21日龄SD幼年雄性大鼠,随机分为5组:A组(阴性对照组)、B组(阳性对照组)、C组(OXC低剂量组)、D组(OXC中剂量组)、E组(OXC高剂量组),每组10只.A组每日腹腔注射等量9g·L-1盐水;B组腹腔注射戊四氮(PTZ)40 mg·kg-1·d-1;C～E组腹腔注射PTZ 40 mg·kg-1·d-1后分别予OXC 100 mg·kg-1、OXC 200 mg·kg-1、OXC 300 mg·kg-1灌胃.连续用药21 d,观察幼鼠体质量、行为学表现;采用免疫组织化学方法检测幼鼠海马GFAP阳性星形胶质细胞的表达;应用实时荧光定量PCR方法检测幼鼠海马组织中GFAP mRNA表达.结果 与A组相比,其他各组幼鼠均有癫(癎)发作,海马组织中均发现GFAP阳性细胞数量增多(P＜0.01),GFAP mRNA的表达增加(P＜0.01);与B组相比,C～E组幼鼠癫(癎)发作潜伏时间延长,发作级别低,点燃率低(Pa＜0.05),GFAP阳性细胞数量逐渐减少(P＜0.05),GFAP mRNA表达降低(P＜0.05);与其他各组相比,E组幼鼠体质量增长缓慢(P＜0.05).结论 OXC对PTZ点燃的慢性癫(癎)引起的脑损伤有保护作用,其程度与剂量有关,但大剂量OXC会抑制幼鼠生长;OXC的这种神经保护作用可能是通过抑制星形胶质细胞表达GFAP实现的.     

银杏叶提取物对发育期戊四氮点燃癫癎大鼠学习记忆与海马神经干细胞增殖、分化的影响

目的 探讨银杏叶提取物( EGb)对癫癎点燃模型幼鼠神经发生的影响及与学习记忆的关系.方法 选择21日龄SD大鼠,随机分为9g·L-1盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)点燃对照组(PTZ7d组、PTZ 14 d组)以及EGb治疗组(EGb7 d组、EGb 14d组).应用PTZ制作慢性点燃癫癎模型;使用Y-型电迷宫测试模型建立前后及EGb治疗前后大鼠的行为学变化;通过免疫组织化学法观察大鼠点燃成功后EGb 7 d或EGb 14 d治疗对海马区细胞增殖情况的影响;同时通过标记5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、神经元核蛋白( NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)观察神经干细胞(NSCs)分化情况.结果 1.Y-型电迷宫测试:EGb治疗前,PTZ各点燃大鼠与NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多(P＜0.01);EGb(300mg·kg-1·d-1)治疗7d和14 d大鼠达到学会标准的次数均明显少于PIZ点燃对照组(Pa＜0.01).2.NSCs增殖情况:选择Nestin阳性细胞表达作为判断NSCs增殖的指标,PTZ点燃对照组Nestin阳性细胞表达量较NS组明显增多(P＜0.01);EGb 7 d组和EGb 14 d组Nestin阳性细胞表达量均较相对应PTZ点燃对照组表达进一步增多(Pa＜0.05),随着疗程增加,EGb 14 d组Nestin阳性细胞数量要低于EGb7 d组(P＜0.05),增殖的Nestin阳性细胞均主要分布于海马CA1 、CA3区颗粒细胞层和颗粒细胞下层.3.EGb治疗后BrdU/NeuN阳性细胞数明显多于EGb治疗前,且EGb 14 d组BrdU/NeuN阳性细胞表达百分比又高于EGb 7 d组,差异均有统计学意义(Pa＜0.05),EGb治疗组有4％～5％共表达GFAP.结论 EGb可诱导NSCs增殖、分化,且NSCs的这种改变与改善大鼠学习记忆有关.     

戊四氮反复点燃对发育鼠海马神经元发生的影响

目的探讨戊四氮(PTZ)反复点燃对发育鼠海马神经元发生的影响。方法10日龄Wistar大鼠48只,随机分为PTZ组和对照组,每组各24只。5-溴,2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记新生细胞。二组分别于模型制备完成后24 h、3 d及1个月时各处死8只大鼠;观察其惊厥行为学改变,海马区细胞形态、细胞计数,免疫组织化学法检测海马各区核因子-κB(NF-κB)表达及BrdU阳性细胞数,Timm染色法观察苔藓纤维发芽。结果1.模型制备完成后24 h,PTZ组海马CA1、CA3、DG区NF-κB表达均显著高于对照组(t=9.081,12.044,11.002 Pa<0.01);2.模型制备完成后3 d,PTZ组齿状回(DG)颗粒细胞数及BrdU阳性细胞数明显高于对照组(Pa<0.05),CA1、CA3及门区无明显神经元变性坏死现象;3.模型制备完成后1个月,PTZ组有苔藓纤维发芽,对照组无明显苔藓纤维发芽。结论PTZ反复点燃可诱发发育脑海马神经元的发生。     

银杏叶提取物对点燃模型幼鼠学习记忆及海马NMDAR1表达的影响

目的：探讨银杏叶提取物（EGb）对癫癎点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能的影响及其可能机制,为临床应用EGb治疗癫癎儿童认知功能障碍提供实验依据。方法：21,35日龄Sprague-Dawley幼鼠各40只,经初筛后随机分为生理盐水对照组(NS)、点燃对照组(PTZ)、EGb大(PTZ+EGb1)、中(PTZ+EGb2)、小(PTZ+EGb3)剂量治疗组,采用戊四氮（PTZ）致幼鼠点燃模型,以Y型电迷宫学习记忆行为训练及免疫组化检测方法,观察用药前后大鼠学习记忆功能和海马NMDAR1表达的变化。结果：①治疗前后大鼠电迷宫试验达标所需电击次数：治疗前不同日龄的各个点燃组与各自NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多 (P<0.01)。EGb治疗后不同剂量的各治疗组大鼠达到学会标准的次数均明显少于同龄PTZ组(P<0.01),而同龄EGb 大、中、小剂量治疗组相互比较, 达到学会标准所需的电击次数随治疗剂量的减少逐渐递增(P<0.01)。EGb各剂量治疗组与治疗前比较,达标次数明显减少(P<0.01或P<0.05),而NS组、PTZ组较治疗前没有明显差异(P>0.05)。②NMDAR1免疫组织化学染色: 各日龄PTZ组NMDAR1免疫反应产物COD值较各自NS组明显增强(P<0.01);不同日龄各治疗组与各自PTZ组比较,随治疗剂量的增加,NMDAR1免疫反应产物COD值逐渐降低,差异均有显著性(P<0.01)。结论：EGb可以明显改善发育期不同日龄点燃模型大鼠的学习记忆功能,而且剂量越大,改善作用越明显。这一作用与EGb下调反复癫癎发作后NMDAR1的过度表达有密切关系。     

MK-801对新生大鼠脑缺氧缺血后Caspase-3激活及其对凋亡的影响

目的：探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801对新生大鼠缺氧缺血(HI)后半胱天冬酶-3(Caspase-3)激活及凋亡的影响。方法：7日龄新生大鼠在HI后即刻给予腹腔注射MK-801 0.5 mg/kg,在HI后24 h取脑制作脑组织连续切片进行微管相关蛋白 2(MAP-2),Caspase-3免疫组化染色及发夹寡核苷酸探针(Hairpin Probe, HPP)原位杂交,计算脑损伤面积及Caspase-3,HPP阳性细胞数。结果：①MK-801干预组脑损伤面积为(23±5)%,较生理盐水对照组(52±12)%明显降低,P<0.01;②MK-801干预组Caspase-3及HPP阳性细胞数(65±8)/高倍视野,(61.6±11.5)/高倍视野,与对照组(40±6.7)/高倍视野,(12.6±5.2)/高倍视野相比均明显减少,其中HPP阳性细胞数减少比Caspase-3阳性细胞数减少更明显。结论：MK-801能明显抑制Caspase-3的激活,减少神经元的凋亡,减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的程度。     

氯化锂-匹鲁卡品诱发癫(癎)持续状态后大鼠脑组织主要穹隆蛋白的表达

目的 探讨多药转运体主要穹隆蛋白(MVP)的表达及其与癫(癎)发作的关系.方法 健康成年SD大鼠和21日龄SD大鼠各24只,随机分为4组.成年大鼠分为大鼠诱发癫(癎)持续状态(SE)后第1、3、7天组及对照组,幼年大鼠分为诱发SE后第1、3、7天组及对照组,每组各6只.应用氯化锂-匹鲁卡品诱发大鼠SE,90min后使用100g/L水合氯醛终止发作.各组大鼠于各时间点处死,取脑组织,石蜡包埋切片,通过免疫组织化学方法检测各组大鼠脑组织中MVP的表达.应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 成年实验组和幼年实验组大鼠SE全部诱发成功.在SE后第1天,成年和幼年大鼠海马齿状回、CA1和CA3区存在MVP的表达,但与对照组比较无显著性差异(Pa＞0.05).SE后第3天,成年大鼠CA1、CA3区MVP表达增强,与其对照组相比有显著性差异(P＜0.05,0.01),成年实验大鼠在CA3区达4.0±1.41.SE后第7天成年大鼠齿状回、CA1、CA3区MVP表达均达高峰,CA3区呈强表达.幼年和成年鼠MVP表达趋势相同,SE后第3、7天,CA1、CA3区,幼年鼠的表达均显著低于成年鼠(Pa＜0.05).结论 MVP可能参与多药耐药现象的产生.但幼年鼠MVP表达量低于成年鼠,推测可能是幼年鼠在SE后胶质细胞增生程度弱于成年鼠.     

Repetitive nociceptive stimuli in newborn rats do not alter the hippocampal neurogenesis

The aim of this study was to evaluate the effects of acute repetitive nociceptive stimuli to newborn rats over neurogenesis rate in the dentate gyrus of hippocampus. Newborn rats were randomly distributed in three groups, according to the type of stimulus received from d 1 to d 7 of life four times per day: acute nociceptive stimuli, tactile stimuli, and none (controls). At d 21 of life, rats received BrdU (5-bromo-2'-deoxyuridine, a marker of cell proliferation), and on d 28, they were killed. After brain sectioning, the tissue was processed for immunohistochemical identification of proliferating cells. BrdU-positive cell counts were performed in the granule cell layer of the dentate gyrus. Acute nociceptive stimulation during the first week of life was not associated to alterations in the weight gain among experimental groups. On examination 1 wk after BrdU injection, the number of BrdU-labeled cells in the dentate gyrus of the hippocampus was not significantly different between stimulated (painful and tactile stimuli) and nonstimulated animals. These results show that both types of stimuli used here, when applied very early in the development, do not affect the neurogenesis rate in the rat dentate gyrus.     

新生鼠脑缺氧缺血损伤后神经细胞再生增加(英文)

目的：许多研究已证实成年鼠脑缺血后神经细胞再生增加,但新生鼠脑缺氧缺血后神经细胞再生如何尚不太清楚。本文旨在调查新生鼠脑缺氧缺血后神经再生情况。方法：24只7日龄新生鼠分为对照组(n= 8)和缺氧缺血组(n=16),缺氧缺血组于缺氧后24h行MR扫描以证实脑梗塞灶产生。术后或缺氧后第2～6天每日腹腔注射1次BrdU标记新生的细胞,应用免疫荧光法检查缺血缺氧后1周和4周时神经再生情况。结果：缺氧缺血后1周或4周时缺血侧脑室管膜下区(SVZ)明显增宽。缺血侧SVZ的BrdU阳性细胞数在缺氧缺血后1周时显著高于对照组和非缺血侧(P<0.05),缺氧缺血后4周时较1周时下降,但仍显著高于对照组(P<0.05)。缺血侧海马齿状回颗粒细胞层下区(SGZ)的BrdU阳性细胞数在缺氧缺血后1周增高,明显高于对照组(P<0.05), 缺氧缺血后4周时较1周时减少,但仍显著高于对照组(P<0.05)。缺氧缺血后1周或4周时在皮质和纹状体梗塞坏死灶周围可见散在分布的BrdU阳性细胞。结论：新生鼠与成鼠类似,脑缺氧缺血后神经再生增强,提示不成熟脑具有一定自身修复能力。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经再生的影响

目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经再生的影响.方法 通过7日龄新生Wistar大鼠制作HIBD模型,设置假手术组、HIBD对照组、NGF治疗组,应用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记新生神经细胞,免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点(术后4、7、14、21 d)海马齿状回(DG)巢蛋白(nestin)表达、BrdU阳性细胞数的变化.结果 各时点HIBD对照组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组增加(P均＜0.05);各时点NGF治疗组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组和HIBD对照组增加(P均＜0.01).结论 早期给予外源性NGF治疗可促使新生鼠脑缺氧缺血后中枢神经系统nestin、BrdU的表达增加,NGF治疗可促进受损神经细胞的增殖再生,在神经细胞损伤的修复巾发挥一定的保护作用.     

MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的保护作用

目的观察谷氨酸(Glu)的NMDA受体拮抗剂MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的影响,探讨Glu在高氧性肺损伤中的可能作用。方法出生12h内的SD新生大鼠随机分为:空气对照组、空气 MK-801组、高氧对照组及高氧 MK-801组。观察持续高氧暴露7d后各组肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及中性粒细胞数、肺组织及BALF中一氧化氮(NO)含量的变化。结果MK-801可有效地抑制高氧所致新生大鼠肺W/D、BALF中白细胞和中性粒细胞、肺组织和BALF中NO含量的增高。结论MK-801可有效地减轻新生大鼠高氧性肺损伤,提示内源性Glu通过NMDA受体介导,促进NO的产生而加重肺损伤。     

戊四氮反复点燃致不同发育期大鼠海马损伤的病理改变

目的探讨不同发育期大鼠癫痢发病机制。方法对P10、P20、P603组大鼠,用戊四氮反复点燃5d,设生理盐水对照组;观察各组大鼠行为学改变,海马神经元形态、神经元计数、苔藓纤维发芽、NF—κB表达。结果（1）点燃后P10、P20组惊厥潜伏期、潜伏发作期较P60短,惊厥持续时间较P60长（F=103．28,132．65,P均〈0．05）;（2）P10、P20实验组海马各区无明显神经元丢失;P10DG区颗粒细胞计数较对照组增多;P60CA1、CA3区神经元较对照组明显减少,DG区无改变;（3）各组海马CA3区均可见苔藓纤维发芽,其中P60组较P10、P20组明显;（4）各实验组NF—κB阳性表达细胞较对照组均增多,且随鼠龄增加NF—κB光密度值逐渐减弱,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）不同发育期大鼠惊厥易感性存在差异;（2）发育鼠致痂后海马神经元损伤、病理性苔藓纤维发芽较轻,可能为对惊厥耐受性较好的病理学证据;（3）NF—κB在惊厥性脑损伤过程中发挥一定生物学效应。     

加巴喷丁和米诺环素对癫癎持续状态大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的研究加巴喷丁(GBP)和米诺环素对戊四氮(PTZ)致癫癎持续状态(SE)大鼠海马区N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR1)表达的影响。方法 SD大鼠84只随机分为对照组、PTZ致组(PTZ组)、GBP 600 mg组(GBP组)、GBP 600 mg干预组(干预组1)、米诺环素45 mg干预组(干预组2)、米诺环素90 mg干预组(干预组3)、米诺环素180 mg干预组(干预组4),每组12只。采用PTZ溶液60 mg.kg-1.d-1腹腔注射诱发SE大鼠,PTZ注射期间出现RacineⅣ～Ⅴ级的惊厥发作持续30 min,连续3 d未死亡者为SE点燃成功。GBP组予GBP灌胃,对照组给予9 g.L-1盐水灌胃。采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠性放电的脑电图。免疫组织化学染色检测NMDAR1表达。结果 NMDAR1表达在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组1表达低于PTZ组(P<0.05)。3个不同剂量的米诺环素组NMDAR1表达与PTZ组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论 PTZ致SE大鼠海马神经元NMDAR1表达增加,GBP能降低PTZ所致的SE大鼠NMDAR1表达增加,而米诺环素45～180 mg.kg-1不能降低PTZ所致的SE大鼠NMDAR1表达增加。