LEF 对肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的: 探讨来氟米特对转化生长因子－β1刺激的大鼠肾小球系膜细胞( GMCs) 增殖及细胞外基质
( ECM) 分泌的影响。方法: 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分正常对照组,TGF－β1( 5 ng /mL) 刺激组,TGF－β1 +
LEF( LEF 浓度分别为5μmol /L、25μmol /L、50μmol /L、100μmol /L) 组,培养24h、48h 和72h 后,MTT 法观察各组
肾小球系膜细胞在不同时间点的增殖情况; ELISA 法测定各组培养细胞上清液中纤连蛋白的含量。结果: ( 1) 与
对照组相比,TGF－β1可刺激系膜细胞增殖,不同浓度的LEF 均可以抑制TGF－β1刺激的系膜细胞增殖( P＜0．05) ,48h 后抑制作
用稳定。( 2) TGF－β1刺激组细胞上清液中纤连蛋白含量明显高于对照组( P＜0．05) ,不同浓度的LEF 组纤连蛋白含量明显低于TGF－β1
组( P＜0．05) 。结论: 来氟米特可以抑制TGF－β1刺激的肾小球系膜细胞的增殖,减少细胞外基质的分泌,为其治疗慢性肾脏病提供理论依据。     

糖尿病大鼠肾组织TGF-β1及细胞外基质表达

目的观察糖尿病早期大鼠肾组织TGF-β1的表达与肾功能改变的相关性.方法用AV1000全自动生化分析仪观察链脲菌素实验性大鼠肾功能变化情况;取糖尿病2、4周大鼠双肾称重后取材,常规制片HE及PAS染色观察组织学改变;免疫组化采用LSAB法分别测实验组及对照组大鼠肾组织TGF-β1、FN 、LN的表达.结果糖尿病组大鼠肾功能障碍,部分指标糖尿病4周组比糖尿病2周组显著增高(P＜0.05).组织学观察糖尿病组大鼠亦显示肾小球肥大,系膜区增宽及部分肾小球囊壁、近曲小管基底膜出现PAS阳性均质蛋白性物质.结论 DM大鼠肾小球TGF-β1表达上调,与两种ECM成分LF、FN过度聚集呈显著正相关,证实了TGF-β1对ECM的异常调节和促进肾小球硬化的作用.     

肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：观察肾炎康复片对转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组（100 mg·L^-1）、中剂量组（200 mg·L^-1）、高剂量组（500 mg·L^-1）。分别利用甲基噻唑基四唑法（metyl thiazolyl tetronzolium,MTT）观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果：TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高（P〈0.05）;TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组（P〈0.05）。结论：肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质（ECM）的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

益气化瘀法对大鼠系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的:观察益气化瘀法对大鼠系膜细胞(GMCs)增殖及细胞外基质分泌的影响.方法:用MTT法检测细胞增生,ELISA法检测转化生长因子β-1(TGF-β1)和细胞外基质Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN).结果:黄芪组、水蛭组和黄芪 水蛭组均可降低血清TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的含量;其中以黄芪 水蛭组最明显,水蛭组次之,均强于黄芪组.结论:益气化瘀法可以抑制系膜细胞增殖及细胞外基质分泌.     

牛磺酸对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响

目的　观察牛磺酸对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响 ,以探讨其作用的可能机制。方法　用MTT法检测系膜细胞增生 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,ELISA检测细胞外基质Ⅳ型胶原的生成。结果　牛磺酸可剂量依赖性地抑制系膜细胞增生 ,并影响细胞周期 ,使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并可明显减少Ⅳ型胶原的分泌 (P <0 .0 1)。结论　牛磺酸可显著抑制系膜细胞增生 ,使细胞周期阻滞于G0 ～G1期 ,该作用可能与其抑制细胞外基质Ⅳ型胶原的分泌有关     

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达;同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平,并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低,且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌,从而发挥抗肾纤维化作用。     

IL—1β对人肾系膜细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的：探讨IL－1β对人肾小球系膜细胞合成和分泌细胞外基质（ECM）的影响。方法：利用ELISA法和放免法分别检测IL－1β对人肾小球系膜细胞刺激后培养上清FN、PCⅢ、Ⅳ．C的水平。结果：IL－1β对人肾小球系膜细胞合成和分泌FN、PCⅢ、Ⅳ．C具有明显的刺激作用（与对照组相比,P＜0．05）,在刺激24h时的作用最强。结论：IL－1β可能通过增加FN、PCⅢ、Ⅳ．C的合成和分泌,引起ECM的积聚,致肾组织进行性纤维化和硬化。     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞XⅧ型胶原表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对XⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响，以及两者在大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT-PCR、Western blot法观察外源性TGF-β1阻对大鼠肾小球系膜细胞中中XⅧ型胶原表达的影响；制备大鼠抗Tny-1肾小球肾炎模型，应用免疫组织化学．ABC分别观察TGF-β1和XⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1阻作用后，大鼠肾小球系膜细胞中胞中XⅧ型胶原的表达升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中TGF-β1阻的表达在1、3和5d仅有微量表达，第7天开始其表达明显且随时间增强；XⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF-β1阻吻合，XⅧ型胶原的表达与TGF-β1阻的表达间具有显著的相关性。结论 XⅧ型胶原的表达与TGF-β1的作用相关，可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程．并且可能在肾小球纤维化中纤维化中起一定的作用。     

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖（LPS）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组：对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR（RT-PCR）法检测ECM中层黏连蛋白（LN）β2 mRNA表达的变化。结果（1）LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义（P〈0.05）;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义（P〈0.01）;（3）正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义（P〈0.01）。结论从蛋白和mRNA两个水平同时观察到ECM成分（如FN、LN和ColⅣ）的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。     

苦参素对肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、α-SMA合成的影响

目的 研究苦参素对肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、α-SMA合成的影响,阐明其对肾小球系膜细胞的作用.方法 采用肾小球系膜细胞培养方法和甲基噻唑基四唑法(metyl thiazolyl tetronzolium,MTT)及免疫组化方法分别检测苦参素培养后肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、α-SMA合成的影响.结果 一定浓度的苦参素能明显促进肾小球系膜细胞的增殖(P＜0.05),抑制TGF-β1的合成(P＜0.05),而对α-SMA合成无明显影响(P＞0.05).结论 一定浓度的苦参素可以抑制肾小球纤维化,保护肾小球系膜细胞,而对系膜细胞的表型转化无明显作用.     

LOX-1介导ox-LDL诱导大鼠系膜细胞表达TGF-β1及分泌细胞外基质

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠肾小球系膜细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及分泌细胞外基质(ECM)的影响,并观察LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(PIA)对ox-LDL上述作用的影响.方法:体外培养肾小球系膜细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1 mRNA的表达;RT-PCR观察空白组、ox-LDL组(50 μg/ml)和PIA组(50 μg/ml ox-LDL 250 μg/ml PIA)肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA的表达,ELISA法检测上述3组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的含量.结果:RT-PCR结果表明,25、50、100 μg/ml ox-LDL组LOX-1 mRNA表达明显高于0 μg/ml组(P＜0.05),其中50 μg/ml组表达最高;50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA表达明显高于空白组和PIA组(P＜0.01).ELISA结果表明50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1 、FN、Col Ⅳ的含量明显高于空白组和PIA组(P＜0.05).结论:ox-LDL体外可促进大鼠肾小球系膜细胞表达LOX-1、TGF-β1及分泌细胞外基质,PIA可抑制ox-LDL的上述作用,提示LOX-1可能介导了ox-LDL对肾小球系膜细胞的损伤,参与了肾小球硬化的发生和发展.     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响

目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。     

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及人肾小球肾炎中表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(tranforming growth factor-betal，TGF-β1)对其反应性基因产物醛糖还原酶(aldose reductase，AR)在大鼠系膜细胞中表达的影响及两者在人肾小球肾炎中的表达及其相互关系。方法 采用RT-PCR、Westem blot法观察外源性TGF-B1对大鼠系膜细胞中AR表达的影响；以12例肾小球轻微病变作为对照，对各种不同组织学类型的lgA肾病(15例)，膜性肾炎(14例)，局灶节段增生性肾炎(12例)，狼疮性肾炎(14例)，新月体性肾炎(9例)的人肾穿刺活检标本，应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF-β1和AR在肾炎组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1作用后，大鼠系膜细胞中AR的mRNA表达与蛋白水平升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。各型肾炎中TGF-β1的表达均显著高于对照组；除lgA肾病之外的各型肾炎中AR的表达均显著高于对照组，AR的表达与TGF-β1表达之间具有显著的相关性。结论 TGF-β1相关反应性基因产物AR的表达与TGF-β1的作用密切相关，其可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程。     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

黄芪对TGF-β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :探讨黄芪对腹膜纤维化的作用及可能机制。方法 :人腹膜间皮细胞 (HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 ) ,TGF β1组 (F12 +TGF β15ng/ml) ,TGF β1加黄芪 1组(F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 10 0 μg/ml,TGF β1加黄芪 2组 (F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 1mg/ml) ,分别在 2 4,48h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原抑制剂 (PAI 1)的含量 ;FNmRNA ,PAI 1mRNA和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测。结果 :①HPMC表达FN ,PAI 1和bFGF ;②HPMC在 5ng/mlTGF β1刺激下分泌FN及PAI 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;③HPMC在TGF β1和不同浓度的黄芪刺激后 ,在 2 4h内可使FN及PAI 1减少 ,尤其是PAI 1与TGF β1组比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。④HPMC经TGF β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调 18.5 4%,8.6 %和 6 6 .9%,HPMC经 10 0μg/ml和 1mg/ml黄芪作用 12h后FN ,PAI 1和bFGFmRNA的表达与TGF β1组比较均下调 ,其结果分别为5 .3 %,1.3%,3 .8%和 5 .4%,74.3 %,2 3 .7%。结论 :TGF β1可促进HPMC合成     

Y-box结合蛋白-1促进大鼠系膜细胞增生及TGF-β1分泌

目的:观察Y-box结合蛋白-1(Y-box binding protein 1,YB-1)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增生及分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1),构建YB-1真核表达载体,转染系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及细胞计数法检测大鼠MC过表达YB-1后的增生情况,双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1分泌,real-time PCR法测定细胞TGF-β1基因相对表达量?结果:YB-1过表达后MC增生和TGF-β1基因表达增加,同时MC分泌TGF-β1增加?结论:YB-1能促进MC增生及TGF-β1分泌增加?     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达及细胞外基质合成的影响

目的 探讨阿魏酸哌嗪(PF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质成分表达的影响及其意义.方法 将体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为正常对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1加50、100、200 ng/mL PF干预组.分别利用免疫细胞化学法检测各组细胞CTGF蛋白表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞CTGF mRNA表达量,双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 CTGF蛋白及mRNA、细胞上清Col Ⅰ、FN表达量在TGF-β1组较正常组明显升高(P<0.05),阿魏酸哌嗪组上述指标均低于TGF-β1组(P<0.05).结论 阿魏酸哌嗪能抑制TGF-β1诱导下肾小球细胞外基质(ECM)的合成.其机制可能与下调系膜细胞上CTGF的表达量及功能活性有关.     

紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。     

Resveratrol对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.     

雷公藤多苷对肾小球细胞外基质以及TGF-β1的影响

肾小球系膜细胞 ( MC)增殖以及细胞外基质( ECM)积聚是多种肾小球疾病共有的病理学特征 ,而 ECM过多积聚最终导致肾小球硬化以致肾功能衰竭[1] 。ECM积聚是多种因素参与的一个复杂的生物学过程 ,其中转化生长因子 - β1 ( TGF- β1 )是促进 ECM积聚的一个重要调控因子 [2 ]。所以抑制 MC增殖 ,减少 ECM的积聚 ,是延缓肾小球疾病进展 ,防止肾功能衰竭的重要环节。雷公藤多苷( TW)是临床上治疗慢性肾炎的常用药物 ,现已证实TW对 MC增殖有明显抑制作用[3 ] ,而 TW对 MC分泌 ECM和 TGF- β1的作用 ,目前尚未见报道。本实验利用 …