双孔色谱介质的制备和质粒DNA快速色谱纯化

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,二甲基丙烯酸乙二酯为交联剂,环己醇与十二醇为有机致孔剂,200 g/L的碳酸钙悬浮液为内水相(超孔致孔剂),用二次乳化法制备了(W/O)/W乳液,通过紫外光引发悬浮聚合生成两类孔型高分子微球(DEA-B).DEA-B孔径为双峰分布,范围分别为50~200 nm和500~5000 nm.其体积平均粒径、湿密度与不含超孔的微孔介质(DEA-M)接近.在流速为0.5 mL/min(150 cm/h)及相同的洗脱条件下,比较了所制备的微孔色谱介质填充的色谱柱与双孔色谱介质填充的色谱柱对5.4 kb质粒DNA的分离效果.结果表明,仅双孔介质色谱柱可以纯化质粒DNA,并且可以在1500 cm/h的高流速下得到色谱纯的质粒DNA,证明该双孔色谱介质可以用于质粒DNA的高速分离.     

大孔型疏水整体柱的制备及其表征

利用液体致孔剂正庚烷,将双甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)聚合成含有环氧基团的大孔型整体柱,用正丁胺修饰制备成疏水性整体柱。压汞法分析表明,疏水整体柱的孔隙率为60.2%,500nm以上的大孔占疏水整体柱孔隙率的65.7%。在2890cm/h的高流速下,疏水整体柱的背压只有10.9MPa。以牛血清白蛋白(BSA)为研究对象,动态吸附容量为14.4mg/g介质,在一定范围内,分离效果不受操作流速的影响。此外,在1445cm/h的流速下,3min内即可对细胞色素C、RNase A、溶菌酶和鸡卵清蛋白进行基线分离。结果表明,大孔型疏水整体柱可用于蛋白质的快速分离和分析。     

接枝多胺聚合物制备大孔阴离子交换色谱介质及其蛋白吸附行为评价

以环氧活化聚甲基丙烯酸酯大孔微球(FastSep-epoxy)为基质,通过接枝聚(烯丙基胺)(PAA)制备了大孔阴离子交换色谱介质(FastSep-PAA)。考察了介质的合成条件对离子交换容量(IC)及蛋白结合容量的影响,发现IC随PAA浓度、反应时间和溶液pH的增加均表现为增长趋势;同时结合蛋白吸附容量的变化选择了最优合成条件。通过扫描电子显微镜观察介质的表面形貌,发现其孔隙连通性较好,且接枝前后介质孔道结构无明显变化,PAA配基密度对介质结构无明显影响。此外,通过压汞法和氮气吸附法测定接枝前后不同介质的孔径尺寸和孔径分布情况,并考察该类介质的孔径与蛋白吸附行为的关系,发现其蛋白结合容量未出现随介质孔径尺寸增加而显著下降的现象,且孔径尺寸增加更有利于蛋白在介质内部传质。在126 cm/h的流速下FastSep-PAA介质的原始孔径(即FastSep-epoxy的孔径)为400 nm时的蛋白动态结合容量(DBC)最高(70.3 g/L),该孔径下介质比表面积大,蛋白可吸附位点较多;原始孔径为700 nm及以下的介质蛋白DBC均随流速增加而均有一定下降;原始孔径为1 000 nm的介质蛋...     

大孔吸附树脂分离提取多杀菌素

采用大孔吸附树脂法分离提取多杀菌素.从11种大孔吸附树脂中筛选出DM11进行了静态、动态吸附性能实验,并考察了不同吸附、解吸条件的影响.结果表明,DM11的静态吸附容量为25.63mg/g(wet resin),其吸附等温线符合Langmuir吸附等温式.采用丙酮做洗脱剂,洗脱率为97.5%,动态吸附最佳吸附pH为9.5,吸附流速为6BV/h,穿透吸附容量为21.2mg/ml(wet resin),洗脱流速1.5BV/h.     

新型固液双重致孔球形离子交换剂的制备及其性能研究

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体 ,采用固液联合致孔方式 ,通过一步悬浮聚合制备了一种新型双孔高分子球形载体 .经化学修饰后 ,得到含二乙胺羟丙基的阴离子交换剂 (介质A) .优化了制备条件 .并与用相同方法制备的但仅含有机溶剂致孔剂的介质B进行了比较 .介质A和B均具有较高的静态吸附容量和机械强度 .由于介质A内含有流动相可以对流通过的大孔 ,因此其动态吸附容量远高于介质B ,并且在较高的流速下表现出较好的色谱流动性能     

基于超大孔聚合物微球的混合色谱模式层析介质的制备

以甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚的超大孔聚合物微球为基质,采用聚乙烯亚胺和丁基缩水甘油醚先后衍生微球的表面,制备成兼具阴离子交换与疏水相互作用的混合色谱模式层析介质。考察离子交换基团、疏水配基密度对蛋白载量、回收率的影响,结果表明,在离子交换容量0.2~0.5 mol/mL范围内,随着介质离子交换容量的增大,蛋白载量及回收率均呈增加趋势,蛋白载量最高值达40 mg/mL,回收率大于90%。当疏水配基的密度大于0.03 mol/mL时,介质开始表现疏水相互作用。此超大孔混合模式色谱介质在大于2000 cm/h 的流速下依然能保持低于2 MPa 的柱背压,同时在高流速下(2880 cm/h)纯化人血清中的抗体应用中表现良好的分辨率。此介质在高通量分离纯化应用方面具有巨大潜力。     

无序介孔硅复合纳米结构的制备与慢活化行为

通过对SiO_2纳米粒子进行镁热还原及后处理,制备了多级无序Si介孔复合纳米结构MP-Si@SiO_x@C,此结构展现出容量非衰减缓升的电化学慢活化行为,可抵消循环容量常规衰减趋势,赋予负极优良的循环稳定性.通过X射线衍射(XRD)、透射电子显微镜(TEM)、场发射扫描电子显微镜(SEM)、N_2吸附-脱附测试和孔径分布模拟分析发现,Si介孔组织包含微-窄介孔(1~5 nm)、中介孔(5~20 nm)以及大介孔-宏孔(20~100 nm)三级孔道,分别源于原初级粒子内部孔道、粒子团聚堆垛与粒内酸蚀、团聚体再堆垛;此合成装配方法有效提升了Si材料的堆积密度,电池电极能获得较高的体积比容量和储能密度.     

致孔剂溶解度参数对大孔层析介质的结构影响研究

分别以甲基丙烯酸缩水甘油醚酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯为功能单体和交联剂,采用悬浮聚合方法制备了大孔聚合物微球。考察了致孔剂的组成及用量对微球的孔径、比表面积的影响,其中随着致孔剂中的良溶剂(二氯甲烷δ=9.7(cal/cm~3)~(1/2)和不良溶剂(正辛醇δ=10.3(cal/cm~3)~(1/2)的比例变化,致孔剂体系溶解度参数可调范围为9.89~10.09(cal/cm~3)~(1/2),随着致孔剂与聚合物之间溶解度差值的增加,微球的孔径随之增大而比表面积呈下降趋势。将此类微球偶联聚乙烯亚胺衍生为阴离子交换层析介质,以前沿分析法比较了不同孔径的微球的传质性能,其中孔径为257 nm的介质仍能保持较高的动态蛋白载量(45.1 mg/m L),表明此类大孔介质在高通量分离纯化应用方面具有很大潜力。     

混合模式色谱配基密度对抗体吸附分离性能的影响

作为蛋白A色谱的重要替代技术,混合模式色谱(mixed-mode chromatography,MMC)具有稳定、廉价和选择性好等优势。本文考察了以Sepharose Fast Flow为基质、4-(咪唑-1-基)苯胺(AN)为配基的新型色谱介质AN SepFF中配基密度对抗体吸附行为和分离性能的影响。研究结果表明,AN SepFF色谱介质在抗体吸附中具有21.2mmol/L的临界配基密度。在临界配基密度以上,抗体在色谱介质上具有较高的吸附容量和很低的解离常数并展现了相当程度的盐耐受性。动态吸附结果进一步表明,抗体的色谱介质中具有与商品化介质相当的动态吸附容量。抗体纯化的结果也表明,在临界配基浓度以上AN SepFF色谱表现出较好的纯化抗体的能力,其抗体产品纯度高于目前商品化的色谱介质;配基密度为55mmol/L时,AN SepFF色谱纯化抗体的收率达到91.9%。由此,AN SepFF色谱介质展现了巨大的应用前景。     

超大孔聚合物亲和色谱层析介质的制备及评价

探索了用席夫碱法在超大孔聚合物微球表面偶联Protein A配基制备亲和层析介质的方法,以亲水化后的聚丙烯酸酯类超大孔微球为基质,考察了氧化剂浓度(H5IO6)对配基偶联量的影响,以扫描电子显微镜表征微球表面形貌,结果发现其偶联Protein A后微球仍能够保持其大孔结构。考察了该类亲和介质在不同操作流速(361~3 600 cm/h)下的动态载量,在3 600 cm/h操作流速下,人抗体载量与361 cm/h相比仅下降10%左右,表明该类介质适合抗体大分子的快速传质,能够满足快速、高效、高通量分离纯化的需求。     

聚二乙烯苯型多孔吸附剂的纳米孔结构表征

采用氮气吸附法 ,研究聚二乙烯苯多孔吸附剂的纳米孔结构 .结果表明 ,以甲苯 液体石蜡 (2 :1)为致孔剂制备的聚二乙烯苯多孔吸附剂 ,其比表面和孔体积随致孔剂用量增大而增加 .在二乙烯苯总含量相当时 ,m 二乙烯苯与p 二乙烯苯等比例混合制备的吸附剂 ,具有最大的比表面和孔体积 ,而聚m 二乙烯苯吸附剂和聚p 二乙烯苯吸附剂依次下降 .中孔分布研究说明 ,各种吸附剂的中孔主要分布在 2～ 2 0nm之间 ,其中在5nm附近存在一个明显的分布峰 ,是吸附剂在制备时由于致孔剂的存在而在微核 微核之间形成的孔 .微孔分布研究发现 ,聚m 二乙烯苯吸附剂和聚p 二乙烯苯吸附剂的微孔集中分布在 0 .4～ 1.2nm之间 ,这些微孔可能是微核内部不规整聚集的高分子链之间的缝隙和紧密接触的微核之间的缝隙 .用扫描电镜观察吸附剂内部 ,显示吸附剂的确是由微核聚集形成的 ,其间存在着大小不同的纳米尺度的空隙     

Preparation and characterization of novel macroporous cellulose beads regenerated from ionic liquid for fast chromatography

Macroporous cellulose beads (MCB) used as anion exchangers were successfully prepared from cellulose solution in ionic liquid by double emulsification followed by cross-linking and modification with diethylaminoethyl. The pore structure and properties of the MCB were investigated and the results were compared with homogeneous cellulose beads (HCB). The MCB in size of about 71 μm is characterized by two sets of pores, i.e., diffusion pores (10–20 nm) and macropores (800–2000 nm), determined by mercury porosimeter. In addition, the bed permeability and effective porosity for BSA of MCB-packed column are 58% and 25% higher than those of HCB-packed column, respectively. The adsorption properties of MCB were evaluated, and compared with HCB and commercial absorbent (Sepharose 6 Fast Flow, CSFF). It is found that the pore diffusivity of BSA in MCB is over 7.9 times higher than HCB, and 6.7 times higher than CSFF, respectively. While the equilibrium adsorption capacity (q_m) of BSA on MCB is obviously lower than that on HCB and CSFF, the dynamic binding capacity (DBC) on MCB at 10% breakthrough reaches 47.7 mg/mL, higher than HCB (40.3 mg/mL) and CSFF (46.2 mg/mL) at flow rate of 360 cm/h. In addition, the MCB-packed column showed better column efficiency over the HCB packed one. Therefore, we demonstrated that the MCB possessed more advantages than other ones, like HCB and CSFF, and was expected as an ideal material for fast chromatography.     

同多酸和染料探针共振光散射法测定蛋白质

在酸性条件下,铬黑T、钼酸铵与蛋白质形成聚合物,使体系的共振光散射明显增强。据此建立了利用共振光散射技术测定总蛋白含量的新方法。在最佳条件下,体系的最大散射峰位于555nm处。共振光散射增强的程度与蛋白质的浓度呈良好的线性关系。牛血清白蛋白和人血清白蛋白的线性范围分别为0.20～10.0μg/mL和0.10～8.0μg/mL,检出限为0.050μg/mL和0.039μg/mL。方法已用于人血清样品的分析,并与考马斯亮蓝的测定结果进行了比较,两者无显著性差异。     

树脂填充聚醚砜纤维吸附剂对牛血清蛋白吸附性能的研究

重点研究树脂填充聚醚砜(PES)纤维吸附剂与模型蛋白质牛血清蛋白(BSA)之间的吸附与脱附行为.结果表明,蛋白质BSA在树脂填充PES纤维吸附剂中的平衡吸附过程较好地符合朗格缪尔吸附模型,树脂Lewatit CNP80ws填充PES吸附剂的最大吸附容量约为139mg BSA/g吸附剂.表面具有开孔结构的树脂填充PES纤维吸附剂的吸附速率较快,在不同结构纤维吸附剂中BSA的扩散系数在1·82×10-14~8·7×10-14m2/s范围内变化.另外,考察了BSA溶液的pH与洗脱剂等因素对吸附剂吸附与脱附性能的影响,研究结果对蛋白质的实际分离纯化具有重要的参考价值.     

高效液相色谱-荧光分析法同时测定人体尿液中黄蝶呤与异黄蝶呤

建立了高效液相色谱-荧光法同时测定癌症病人尿液中黄蝶呤及异黄蝶呤的新方法。选择荧光检测波长λex=345nm,λem=420nm。以磷酸盐缓冲溶液(pH=7.5)-甲醇(体积比为98∶2)为流动相,流速1.0mL/min,黄蝶呤与异黄蝶呤含量分别在0.0013～0.945μg/mL及0.00017～0.118μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数分别为0.9999和0.9996,检出限分别为0.5ng/mL和0.05ng/mL,加标平均回收率在86.2%～107.5%之间。方法应用于癌症病人尿样分析,取得了较好的结果。     

气体中合成辣椒素的检测方法研究

研究了气体中合成辣椒素(OC)的固体吸附-气相色谱检测方法,建立了气体样品经XAD-2吸附后于CH_2Cl_2溶液中解析,采用毛细管色谱柱分离,FTD检测器进行检测的技术途径.色谱柱:HP-5;载气:高纯氮气(1.2 mL/min);进样口温度:250℃;检测器温度:280℃;程序升温:初始温度180℃,保持0.5 min后以30℃/min的速率升至250℃保持5 min;对影响样品采集和检测的条件进行了选择研究,方法平均回收率为91.5%;平均相对标准偏差为3.2%(n=6);对气态OC的最低检出浓度为10 μg/m~3;在5.0～1000.0 μg/mL范围内有良好的线形关系(r=0.9996).     

Nanoscale pore morphology and distribution of lacustrine shale reservoirs:Examples from the Upper Triassic Yanchang Formation,Ordos Basin

Pore structure plays an important role in the gas storage and flow capacity of shale gas reservoirs. Fieldemission environmental scanning electron microscopy(FE-SEM) in combination with low-pressure carbon dioxide gas adsorption(CO2GA),nitrogen gas adsorption(N2GA),and high-pressure mercury intrusion(HPMI) were used to study the nanostructure pore morphology and pore-size distributions(PSDs) of lacustrine shale from the Upper Triassic Yanchang Formation,Ordos Basin. Results show that the pores in the shale reservoirs are generally nanoscale and can be classified into four types: organic,interparticle,intraparticle,and microfracture. The interparticle pores between clay particles and organic-matter pores develop most often,l with pore sizes that vary from several to more than 100 nm. Mercury porosimetry analysis shows total porosities ranging between 1.93 and 7.68%,with a mean value of 5.27%. The BET surface areas as determined by N2 adsorption in the nine samples range from 10 to 20 m2/g and the CO2 equivalent surface areas(2 nm)vary from 18 to 71 m2/g. Together,the HPMI,N2 GA,and CO2 GA curves indicate that the pore volumes are mainly due to pores 100 nm in size. In contrast,however,most of the specific surface areas are provided by the micropores. The total organic carbon(TOC) and clay minerals are the primary controls of the structures of nanoscale pores(especially micropores and mesopores). Micropores are predominantly determined by the content of the TOC,and mesopores are possibly related to the content of clay minerals,particularly the illite-montmorillonite mixed-layer content.     

胶束扫集毛细管电泳分离测定绿原酸和咖啡酸

采用胶束扫集毛细管电泳分离测定双黄连口服液中的绿原酸和咖啡酸.试验条件为:重力进样时间40 s;以20 mmol/L NaH_2PO_4,100 mmol/L 十二烷基磺酸钠(SDS)为电泳缓冲液(含体积分数15%甲醇,pH 2.20),分离电压-20 kV,检测波长214 nm,讨论了pH、SDS浓度、样品溶剂等对分离效果的影响.在优化条件下,绿原酸和咖啡酸的检出限分别达到1.02和0.168 μg/mL,线性范围分别为5.86～51.5 μg/mL和1.27～14.5 μg/mL.     

流动注射在线预富集-高效液相色谱法测定四种硝基类化合物

建立了以香烟过滤嘴纤维作吸附剂,在线固相萃取-高效液相色谱（SPE—HPLC）测定水中邻硝基苯甲酸、对硝基苯胺、邻硝基苯酚、3-氯硝基苯四种硝基类化合物的方法。邻硝基苯甲酸、对硝基苯胺、邻硝基苯酚、3-氯硝基苯分别在0．006～4．80、0．003～2．40、0．002～1．60、0．002～1．60mg／L范围内峰面积与浓度呈线性关系,相关系数分别为0．9994、0．9996、0．9997和0．9996;检出限（S／N=3）分别为1．0、0．8、0．6,0．6μg／L;富集倍数分别为28．2、176．6、172．1、153．3。该法用于河水中四种硝基类化合物的测定,回收率为85．41％～116．44％,相对标准偏差在1．1％～5．4％范围内。