Chromosomal changes detected by fluorescence in situ hybridization in patients with acute lymphoblastic leukemia

Objectives To investigate patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) for TEL/AML1 fusion,BCR/ABL fusion, MLL gene rearrangements, and numerical changes of chromosomes 4, 10, 17 and 21 by fluorescence in situ hybridization (FISH) and to determine the relationship and the significance of those findings.Methods Fifty-one American patients (34 men and 17 women) were included in this study. Of them there were 41 patients with pro-B cell type ALL, 9 with B cell type ALL and 1 with T cell type ALL.Chromosome metaphases of each sample were prepared according to standard protocols.Fluorescence in situ hybridization was performed using commercially available DNA probes, including whole chromosome painting probes, locus specific probes, specific chromosome centromere probes and dual color/multiple color translocation fusion probes. The digital image analysis was carried out using Cytovision and Quips FISH programs.Results An overall incidence of chromosomal anomalies, including t (9; 22 ), MLL gene rearrangements, t (12;21), and numerical chromosomal anomalies of chromosomes 4, 10, 17 and 21 was found in 33 patients (65%). Thirty-one of them were pediatric patients and two adults. The t(12;21) was the commonest chromosomal anomaly detected in this population; 14 out of the 45pediatric patients (31%) were positive for TEL/AML1 fusion, among which three had an additionalderivative 21[t (12;21) ], four had a deletion of 12p and two had an extra copy of chromosome 21.All 14 patients with positive TEL/AML1 fusion had ALL pre-B cell or B-cell lineage according to standard immunotyping. The percentage of cells with fusion signals ranged from 20% to 80%. All fourteen patients positive for TEL/AML1 gene fusion were mosaic. Three out of the 14 patients positive for the TEL/AML1 gene fusion were originally reported to be culture failures and none of the remaining eleven samples had been found to have chromosome 12 abnormalities by conventional cytogenetic techniques. All pediatric patients with pre-T or T cell lineage and the six adults were negative for TEL/AML1 fusion. One patient had double Philadelphia chromosomes, three had a rearranaement or a deletion of the MLL aene. one had t (4;11)and two had a deletion of the MLL One of the patients with an MLL deletion also had a large ring of chromosome 21, and r (21) was caused by AML1 gene tandemly duplicated at least five times. The second case with the MLL deletion was also unique, the patient had a t (12;21) as well. A total of 20 patients had numerical changes( gain or loss) of chromosomes 4, 10, 17 and 21. Eight patients were found to have trisomies of three or four different chromosomes. Interestingly, seven of these patients did not have TEL/AML1, BCR/ABL or the MLL aene rearranaement, one did have the TEL/AML1 aene fusion. Eleven patients with pro-B cell or B cell type ALL (9 children with ALL, 2 adults with ALL) had numerical changes of chromosome 21 (gain 1 or 2 chromosome 21 ), among them, 10 patients had no structural alteration of chromosome 21, and one was combined by t (12;21 ). Four patients had a monosomy of chromosome 17 and three out of these patients with monosomy 17 also had a fusion signal of TEL/AML1.     

Clinical, cytogenetic and dual-color FISH studies on five cases of myelodysplastic syndrome or acute myeloid leukemia patients with 1;7 translocation

Objective To study the clinical and cytogenetic characteristics of four patients with myelodysplastic syndrome(MDS)and one with acute myeloid leukemia experiencing t(1;7).Methods Five patients seen in our hospital from 1992 to 2001 were diagnosed as MDS and acute myelocytic leukemia(AML)according to the French-American-British(FAB)criteria.Chromosomes were prepared using the direct method as well as 24-hour unstimulated cultimulated cultures of fresh heparinized bone marrow for each subject,while R-banding was used to analyze karyotypes.Dual-color fluorescence in situ hybridization(FISH)using SpectrumRed and SpectrumGeen directly labeled chromosome 1-specific α- satellite DNA probe(red)and chromosome 7-spectific α-satellite DNA probe(green)was performed for three cases.Results Of the five patients,three had 1;7 translocation due to a long history of exposure to benzene.In three cases,dual-color FISH resulted in three red signals and two green ones,in which one red signal adjoining one greem signal in 27.6%,84% and 18.5% metaphases,respectively.Conclusions Exposure to benzene may be the cause for Chinese MDS and AMO patients with t(1;7) translocation.The result of dual-color FISH convincingly confirmed that the centromere of the derivative chromosome 7p/1q resulting from 1;7 translocation was made up of centromeres from both chromosomes 1 and 7.     

FISH技术联合常规细胞遗传学检测MDS的染色体异常

目的：探讨荧光原位杂交(FISH)技术联合常规细胞遗传学检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体异常的临床价值。方法：运用FISH技术联合常规细胞遗传学检测100例经骨髓常规涂片及骨髓活检确诊的MDS患者的染色体异常情况，并对此100例患者进行随访。结果：100例MDS患者中FISH检测出48例有染色体异常，总异常检出率为48%，其中-5/5q-检出率最高，为16%，其余异常阳性检出率依次为20q-(15%)，+8(12%)，-7/7q-(11%)，-Y(5%)。而常规细胞遗传学分析异常检出率仅为11%。FISH检测MDS分子遗传学异常阳性率明显高于常规染色体分析(P<0.01)，且两者结合可将检出率提高至49%。随访结果显示FISH结果正常的患者预后明显好于FISH结果异常的患者，其中存在-7/7q-的患者预后最差，转白血病率明显高于其他染色体异常者。而存在20q-及+8的患者预后中等，存在-5/5q，-Y及正常核型的患者预后较好。结论：49%的MDS患者存在染色体异常，-5/5q-，20q-，+8及-7/7q-是MDS患者较常见的染色体异常，-Y 相对较少。FISH比传统的细胞遗传学检查更敏感可靠，两者联合应用可以提高染色体异常检出率。FISH结果可作为MDS预后评估的一项重要依据。     

Ph染色体阳性急性髓系白血病患者细胞遗传学和免疫表型分析

目的:探讨Ph染色体阳性(Ph )急性髓系白血病(AML)患者细胞遗传学、免疫表型和临床特点.方法:对本院2001年10月至2006年2月间有完整资料可供分析的375例AML患者进行细胞遗传学、免疫学检查,并对其治疗效果进行观察、分析.结果:375例AML患者中检出6例Ph AML患者,其中M1 1例、M2 2例、M4 2例,M5 1例;3例有附加染色体异常;免疫表型2例伴淋系表达;经治疗,1人达完全缓解.结论:Ph AML在细胞遗传学和免疫表型上有其特殊性,疗效及预后较Ph染色体阴性AML患者差.     

慢性髓细胞白血病的细胞遗传学和荧光原位杂交分析

目的 探讨慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞遗传学、分子遗传学特点及其临床意义.方法 选择196例CML患者,采用直接法和（或）24 h短期培养法制备骨髓染色体标本,采用R显带技术（RHG）进行染色体核型分析;用BCR-ABL双色双融合探针或ES探针对骨髓间期细胞进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测.结果 将患者分为慢性期和加速/急变期2组.细胞遗传学分析：附加染色体异常、变异易位在2组中比例分别为9/166（5.4%）、7/166（4.2%）和19/30（63.3%）、3/30（10.0%）.196例患者中检出179例Ph阳性标本,占91.3%;其中典型易位169例（94.4%）,变异易位10例（5.6%）,附加染色体异常出现频率最多的为双Ph、＋ 8、I（17q）、-Y.分子遗传学分析：68例患者行FISH 检测,均为BCR-ABL融合基因阳性（含10例变异易位、11例Ph染色体阴性及6例染色体检测失败者）,其中10例（14.7%）为der（9）缺失（含1例染色体检测失败者）,在慢性期、加速/急变期中比例分别为8/55（14.5%）、2/13（15.4%）.68例患者中典型易位41例,变异易位10例,der（9）缺失在典型易位、变异易位中比例分别为5/41（12.2%）和4/10（40.0%）.结论 与慢性期相比,加速/急变期附加染色体、变异易位等异常明显增加,染色体核型分析有助于疾病诊断和进展的分析,并且在遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高疾病的诊断率和染色体异常的检出率及准确率,并可有效检测der（9）缺失.     

八探针荧光原位杂交技术在急性髓系白血病诊断中的应用

摘要：目的探讨八探针间期荧光原位杂交技术（FISH）在检测急性髓系白血病（AML）常见细胞遗传学异常中的价值。方
法采用八探针FISH系统,即以针对AML1/ETO融合基因、PML-RARα融合基因、CBFβ/MYH11 融合基因、MLL基因、
P53基因、Del（5q）、-7/Del(7q)、Del(20q)八种DNA探针对40例AML患者细胞遗传学异常进行检测,并与常规G显带核型
分析技术相比较。结果40 例AML中,共22 例多探针FISH检出了细胞遗传学改变,总阳性率为57.50%,包括：AML1/
ETO融合基因、PML-RARα融合基因、MLL基因断裂重排、Del(5q)、-7/Del(7q)、P53基因缺失、8号染色体三体7种细胞遗
传学异常。而常规G显带核型分析技术(CCG)对于相对应的遗传学异常仅检出8例,另检出3例八探针FISH不能检出的
异常,总阳性率为27.50%。结论FISH八探针诊断技术较常规G显带核型分析技术具有省时、准确、高效等优点,可作为
急性髓系白血病临床诊断的一个重要手段。     

间期荧光原位杂交结合测序分析在慢性髓系白血病慢性期伊马替尼治疗监测中的应用

目的:探讨在慢性髓系白血病(CML)慢性期伊马替尼治疗中,间期荧光原位杂交(I-FISH)结合Abl酪氨酸激酶区测序技术对疗效监测、耐药分析及预后判断的意义.方法:应用双色双融合探针I-FISH对18例伊马替尼治疗获完全细胞遗传学缓解的CML慢性期患者骨髓内残留肿瘤细胞负荷进行检测,并对I-FISH检测阳性患者进行ABL酪氨酸激酶区测序分析.结果:双色双融合探针I-FISH的正常分界值为0.73%,18例伊马替尼治疗后患者检测中,8/18(44%)结果阳性;8例I-FISH检测阳性患者测序分析发现2例(25%)出现ABL激酶区点突变,点突变类型为E255K和T315I.结论:联合应用I-FISH和测序分析不仅能较灵敏、特异地监测伊马替尼治疗后肿瘤细胞负荷的变化,并可对药物疗效、耐药情况进行早期分析,有效地指导治疗和判断预后.     

儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系. 方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测. 结果:初治和复发AL组生存素 mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1 mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P＜0.01);复发AL组生存素 mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025). 生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性. 细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系. 儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关. 生存素 mRNA表达水平高者缓解率低. 结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性. 生存素是AL复发的高危因素;AL 生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.     

多探针荧光原位杂交技术联合G显带核型分析诊断维吾尔族成人急性髓系白血病的效果

目的 探讨多探针荧光原位杂交(FISH)技术联合G显带核型分析(CCG)在喀什地区维吾尔族成人急性髓系白血病(AML)诊断中的应用价值.方法 采用AML多探针FISH系统[包括PML/RARα、AML1/ETO、CBFβ/MYH11融合基因,MLL基因重排,Del (20q),-7/Del (7q),Del(5q)及P53基因8种探针]对30例该地区新诊断维吾尔族成人AML进行检测,同期进行常规CCG.结果 30例AML中有20例多探针FISH检测出细胞遗传学异常,异常检出率为66.7％.而CCG的异常检出率为36.7％,相对应的遗传学异常仅检出9例,另检出2例多探针FISH不能检出的异常.多探针FISH异常检出率明显高于CCG(P ＜0.05),且两者结合可将检出率提高至73.3％.结论 多探针FISH对于细胞遗传学异常的检出率较CCG高,两者联合检测可以提高AML遗传学异常的检出率,为该地区维吾尔族成人AML的精准诊断提供更多客观可靠的依据.     

染色体核型分析和荧光原位杂交技术对慢性粒细胞性白血病的诊治意义

目的 分析染色体核型分析和荧光原位杂交（FISH）检测方法在慢性粒细胞性白血病（CML） 中的诊治意义。方法 171 例标本应用染色体R 显带进行核型分析,218 例标本应用间期FISH 进行分析。 结果 在171 例患者中,116 例（68%）检出Ph 染色体,22 例（13%）存在其他异常核型。218 例CML 患者 标本应用FISH 进行分析,174 例（80%）检出BCR/ABL 基因。76% CML 患者BCR/ABL 融合基因产生的蛋 白类型为P210,3% CML 患者BCR/ABL 融合基因产生的蛋白类型为P210 共表达P190,0.95% CML 患者融 合基因产生的蛋白类型为P190。另外,18% CML 患者存在der（9）部分序列缺失。结论 FISH 对BCR/ABL 融合基因检出率高于染色体核型分析对Ph 的检出率。染色体核型分析可提示Ph 染色体及多种其他异常核型。 FISH 分析可提示是否存在BCR/ABL 融合基因,也可提示不同的融合蛋白类型,还可提示der（9）的部分序 列缺失与否。2 种分析方法可以多角度提示CML 患者的疾病信息,在CML 的诊治中有重要的临床价值。     

优化的预包被式多探针荧光原位杂交技术可提高白血病细胞遗传学异常的检测效率

目的探讨对预包被式多探针荧光原位杂交(FISH)技术进行优化在检测白血病细胞遗传学异常的意义。方法 141例初诊为ALL或AML/MDS的患者骨髓标本,行预优化的包被式多探针FISH流程检测(在原始流程的基础上增加了调整细胞密度、蛋白酶消化步骤),其中35例行常规流程检测,对比优化前后对白血病细胞遗传学异常的检测成功率与阳性位点检出率。结果对多探针FISH实验流程进行优化后,ALL的检测成功率由85.3%提高到100%,阳性位点检出率由5.1%提高到8.6%;AML/MDS的检测成功率由67.4%提高到99.8%,阳性位点检出率由3.5%提高到6.0%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论通过对常规预包被式多探针FISH系统检测流程进行优化,显著提高了白血病细胞遗传学异常的检测效率,增强了该技术的临床实用性。     

伴银屑病的急性髓系白血病类型及染色体核型分析

目的：探讨急性髓系白血病（AML）与银屑病之间的关系,并分析伴有银屑病AML患者的染色体核型及疗效特点。方法：调查本院2004～2010年100例AML患者银屑病的发生率,并应用G显带技术分析AML患者染色体核型。结果：AML患者中银屑病伴发率为8%（8/100）,其中7例为AML-M3,1例为AML-M5。AML-M3患者的银屑病伴发率为25.9%（7/27）,显著高于非M3患者伴发率1.4%（1/73）和总体伴发率8%（均P〈0.05）。AML-M5患者银屑病伴发率为5.3%（1/19）,其它AML亚型未发现伴有银屑病。73例获得染色体核型患者中,非重现性结构异常发生率13.7%（10/73）。伴银屑病AML患者非重现性结构异常发生率为50%（3/6）,伴实体瘤AML患者发生率为100%（2/2）,均高于不伴银屑病或其它实体瘤的AML患者发生率7.7%（5/65）（P〈0.05）。AML-M3中2例伴t（15;17）平衡易位之外结构异常患者均达到完全缓解。结论：伴银屑病的AML患者中以AML-M3较为多见,伴银屑病AML患者染色体核型容易出现非重现性结构异常,伴银屑病AML-M3中染色体非重现性结构异常可能对疗效无影响。     

染色体与急性白血病相关性分析

目的 应用细胞遗传学分析方法,研究急性白血病染色体异常,结合临床探讨细胞遗传学对急性白血病诊治的价值.同时结合国内外细胞遗传学危险度划分标准,分析核型与预后的相关性.方法 采用短期培养法制备骨髓细胞染色体,以G显带对77例急性白血病患者进行染色体核型分析,并对参与诱导治疗的患者进行生存随访.结果 77例白血病患者中,染色体异常核型检出率为79%.参与治疗的63例病人中,首次完全缓解率为78%.典型的t(15;17)患者治疗预后良好.结论 70%以上的急性白血病患者会出现染色体异常.细胞遗传学改变是影响急性白血病预后的独立因素.     

VEGF在急性髓系白血病中的表达及预后关系研究

目的:检测初诊未治急性髓系白血病(acute myeloid leukemia AML)患者化疗前后血清VEGF的表达水平,探讨VEGF的表达对AML预后的评价作用。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)检测40例AML初发患者化疗前后血清及12例对照组血清VEGF的含量。结果:初发和未缓解AML患者血清VEGF水平明显高于正常对照组和完全缓解(CR)AML组(P<0.01);初治组AML患者血清VEGF含量明显高于缓解组和对照组(P<0.01),未缓解患者血清VEGF含量又明显上升,与CR组比较差异有统计学意义(P<0.01)。初诊未治AML患者化疗前血清VEGF的表达与骨髓中白血病细胞比例呈正相关。结论:AML患者血清VEGF水平一定程度上可能反映体内白血病细胞的总负荷量同时与临床病情变化密切相关,可作为了解病情、观察疗效、判断预后的指标之一。     

急性髓细胞白血病免疫分型和FAB分型的关系

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)免疫分型和FAB分型的关系。方法:对93例初治AML进行细胞形态学检查和免疫分型检查,免疫分型采用流式细胞术(FCM),并对2种检查结果进行分析。结果:93例AML中M1亚型1例,M2亚型68例,M3亚型13例,M4亚型3例,M5亚型4例,未分类4例;单表型74例,伴淋系抗原表达12例,双表型5例,未表型2例;细胞形态学确诊AML72例,诊断准确率为77.4%;免疫分型确诊AML91例,FAB分型结合免疫分型使诊断的准确率达到97.8%。结论:免疫分型在鉴别AML各亚型和杂合性白血病(HAL)方面具有重要作用,细胞形态学结合免疫分型可提高诊断准确率,弥补FAB分型的不足之处。     

外周血细胞计数对老年急性髓系白血病生存预后的影响

目的：探讨不同外周血细胞计数对老年急性髓系白血病（AML）生存预后的影响。方法：回顾分析我科1997～2008年收治的可评估的老年AML患者67例,按外周血细胞的不同分组,进行完全缓解（CR）率的比较及单因素的Kaplan-Meier生存分析。结果：67例患者的中位生存期为4.2个月。20例（29.9%）获得完全缓解（CR）,中位生存期为7.5个月 未缓解的中位生存时间为3.5个月（P〈0.01） 外周血红蛋白浓度≥80g/L时CR率高（P〈0.05）,而不同白细胞及血小板计数的组别其CR率比较无统计学意义（P〉0.05）。白细胞计数≥50&#215;10^9/L组,中位生存时间为2.5个月,明显低于其他组别（P〈0.01）。不同血小板计数及血红蛋白浓度分组未见生存差异（P〉0.05）。结论：外周血高白细胞计数是老年AML患者预后不良的因素,支持治疗对老年AMI很重要。     

急性白血病患者骨髓细胞中TSLC1的表达及其临床意义

目的:观察肺癌肿瘤抑制物1(tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1)在急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓细胞中的表达情况,探讨其在AL的早期诊断、预后评估及指导治疗中的意义。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测39例AL患者及10例对照组骨髓细胞中TSLC1 mRNA的表达情况。结果:对照组TSLC1表达阳性率为80.00%,AL组为12.82%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中M1、M2及M5型与对照组TSLC1表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);M3、M4型与对照组TSLC1表达差异均无统计学意义(P>0.05),各亚型间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:AL中TSLC1失表达是一个频发事件,可能与AL的发生、发展有关,对AL的早期诊断、预后评估及指导治疗具有重要意义。     

核结合因子相关的急性髓系白血病的临床分析

目的 探讨影响核结合因子(CBF)相关的急性髓系白血病(AML)患者临床特征、细胞遗传学特点及影响其生存、预后的主要因素.方法 对130例CBF AML[其中AML伴t(8;21) 87例、AML伴inv (16)/t(16;16)43例]患者进行随访,分析其免疫表型、染色体核型及治疗、生存情况、影响总体生存时间及无复发生存时间的因素.结果 130例CBF AML患者总完全缓解率96.1％,其中1疗程总完全缓解率77.2％.中位生存期(OS) 51.64 (0.26～ 132.5)个月,中位无复发生存期(RFS)未达1.18 ～ 96.62个月.3年OS率50％,5年OS率41％;3年RFS率59％,5年RFS率54％.年龄、染色体核型与OS有关,其中年龄≥45岁患者、染色体核型伴9q-的患者预后差、生存期短.在巩固治疗过程中采用≥2疗程的中剂量阿糖胞苷(Ara-C)巩固治疗方案的患者预后好,生存期长.OS、RFS对比分析显示:AML伴inv (16)/t(16;16)的OS较AML伴t(8,21)明显延长(P =0.046),但AML伴t(8,21)的RFS较AML伴inv (16)/t(16;16)明显延长(P=O.038).结论 年龄、染色体核型及巩固治疗的方案是影响CBFAML患者生存、预后的主要因素,在巩固治疗中采用≥2疗程的中剂量Ara-C可以延长CBF AML患者的OS、RFS.AML伴inv (16)/t(16;16)患者较AML伴t(8,21)患者总体生存期长、预后好.     

Alu-PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的制备慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ基因重排的ＤＮＡ探针。方法应用Ａｌｕ－ＰＣＲ和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） 技术,对３个酵母人工染色体（ＹＡＣ）候选克隆进行鉴定,制备ＤＮＡ探针,并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性 白血病患者骨髓细胞筛选。结果确定了ＹＡＣ７６５Ｅ３为非嵌合体,定位于染色体２２ｑｌｌ ｂｃｒ基因区域,而且可在Ｐｈ染 色体阳性细胞中易位至９ｑ３４。探针特异性杂交效率达９５％。结论ＦＩＳＨ技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特 殊序列定位的重要检测方法。联合应用Ａｌｕ－ＰＣＲ技术特异性扩增载体ＹＡＣ中人类基因组来源的ＤＮＡ制备探针,为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

DNA含量的流式细胞仪检测在急性髓细胞系白血病中的意义

目的:探讨DNA含量对急性髓细胞系白血病(AML)预后的影响.方法:用流式细胞仪对133例AML患者的骨髓或外周血单个核细胞DNA含量进行测定,分析与顸后的关系.结果:133例AML异倍体的检出率34.6%,DNA含量为异倍体患者的复发率略高于整倍体者,S G2M期百分比增高者治疗缓解率低,易早期复发.结论:DNA异倍体及S G2M期的百分比增高与AML的预后有关;流式细胞仪检测DNA含量,方法简单、快速,可作为筛检DNA异倍体的有效手段.