猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

不同稀释剂对猪冷冻精液的影响

手握法采集12月龄大约克种公猪精液,在37℃下离心,弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,用7种不同的稀释液进行稀释,应用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。结果表明,在7种稀释液中,7号稀释液优于其他6种稀释液(p<0.05);与其他的冷冻保护剂相比,甘油的冷冻保护性能较好(p<0.01),其适宜浓度为2~4ml/l;干解冻(40~45℃)效果优于湿解冻,解冻后精子活率达0.46~0.49(p<0.05);稀释液中添加安钠咖可有效地延长精子的冻后存活时间(p<0.01)。     

枸杞多糖对猪精液冷冻效果影响的研究

通过在猪精液的冷冻基础液中添加不同浓度的枸杞多糖,来研究冻后猪精子的活率、质膜完整性、线粒体完整性和顶体完整性等各项参数指标,探讨枸杞多糖不同浓度对猪精液冷冻保存效果,试图寻找一种能较好地保护精子的天然抗冻剂.     

猪冷冻精液受胎率试验

1990～1991年,利用本项研究确定的冷冻、解冻稀释液及成套冷冻技术程序生产的冻精,以杂交母猪和本地母猪为主进行配种试验,受胎率由30％提高到50％,1991年中间试验情期受胎率提高到70.59％,窝产仔8.34～9.73头。     

猪精液冷冻方法试验

试验表明,初冻温度是影响猪精液冷冻效果的重要因素。冻前及冷冻过程中,不同温度下制作的冻精活率差异极显著(P<0.01)。精液降至8℃、采用-70～-90℃的初冻温度,冷冻效果最好,不同剂型和剂量的冷冻效果差异不显著(P>0.05),本试验,30毫升块状和15毫升塑料安瓿冷冻后精子活率达0.39～0.40,复苏率达57％。     

猪精液冷冻技术研究进展

概述了猪精液冷冻的研究历史、冷冻损伤机理,并从稀释液添加剂、冷冻保存承载工具、精子密度、精子冷冻种间差异和个体差异等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素,介绍了解冻后精子质量的检测方法,探讨了猪精液冷冻中存在的问题并进行了展望。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

猪精液冷冻稀释液配方的筛选

本试验优选出的冷冻稀释液1号和2号配方,冻精活率达0.5,解冻后精子在38～40℃恒温下存活指数分别为1.98±0.64和2.27±0.62。应用日立 H-800型透射电子显微镜对冻精进行超微结构观察,精子顶体完整率分别达59.61%和63.54%。2号配方的冷配情期受胎率达70.57%,其顶体完整率与受胎率呈正相关。     

不同解冻温度对精子活力的影响

温度是精子最敏感的外界因素之一。人们的注意力多集中在稀释液和冷冻方法的研究,对冷冻精液的解冻方法和技术的研究不足。但实践证明,牛精液冷冻效果好坏与解冻温度有很大关系。长期以来,人们沿用冷冻精液的解冻温度38～40℃解冻冷冻精液。为此,可以通过本试验了解不同解冻温度对牛冷冻精子复苏的影响,找出适宜牛细管冷冻精液的最佳解冻温度。     

奶山羊冷冻精液配种技术

一、主要器械 内窥镜、羊专用输精枪、细管剪、镊子、液氮罐、温度计等. 二、对母羊的基本要求 凡年龄在1.5岁以上,发育良好,膘情适中,发情正常有规律,无重大传染病的母羊均可进行输精.     

不同浓度咖啡因对犬精液冷冻效果的影响

为提高犬冷冻精液的冷冻效果,试验向Tris-卵黄基础稀释液中添加不同浓度的咖啡因;结果表明:当所添加的咖啡因浓度为5.0mmoL/L时,精子活率为0.33±0.04(P0.01),显著对照组。添加浓度为12.5mmoL/L时,精子活率仅为0.23±0.04(P0.01),显著对照组。浓度为5.0mmoL/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036(P0.01),显著对照组。但添加咖啡因的各组跟对照组在顶体完整率上并无显著差异。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

不同解冻方法对奶牛冻精活力的影响

将 5头荷斯坦种公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻 ,对解冻后的精液品质进行检测。结果表明 :解冻后顶体正常率、精子活率随解冻温度升高而升高 ,而畸形率随解冻温度升高而降低 (P<0 .0 1) ;高温(37℃ ,75℃ )下随着解冻时间延长 ,活率增高 (P<0 .0 5 ) ;低温 (5℃ )、室温 (15℃ )下解冻 ,活率与解冻时间长短没有明显关系 (P>0 .0 5 ) ;精子顶体正常率、畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。在实践中建议使用 75℃ 2～6 s解冻。     

圆筒形贮存管对猪精液冷冻保存效果的影响

试验研究了用圆筒形贮存管冷冻猪精液时不同漂浮时间和解冻时不同解冻温度、时间对冷冻保存效果的影响。猪精液冷冻时,圆筒形贮存管在放入液氮罐前,先置液氮面上3 cm处,分别漂浮熏蒸5、10、15、20 min后投入液氮中保存。精液解冻时,分别在37℃＋1.5 min、52℃＋1.0 min、70℃＋0.5 min解冻处理。结果表明,漂浮15 min处理可显著提高猪精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。52℃＋1.0 min处理组的猪精液冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率显著高于其它2个处理组。试验结果还证实,用圆筒形贮存管冷冻猪精液是可行的,所获得的冷冻后最高精子活率与用0.25 mL麦管获得精子活率无显著差异。     

不同冷源对民猪精液冷冻保存效果的影响

用干冰和液氮作为冻源对民猪精液冷冻效果进行研究,包括对精子活率及顶体完整率的影响.结果表明,以干冰为冻源进行民猪精液冷冻,解冻后精子活率为43.5％,顶体完整率为52.2％;以液氮为冻源进行民猪精液冷冻,解冻后精子活率为41.8％,顶体完整率为51.5％,二者差异不显著.     

不同解冻温度和时间对肉牛细管冻精精子活力的影响

[目的]寻找肉牛精子最佳解冻温度和解冻时间。[方法]将54支利木赞公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻,对解冻后的精液品质进行检测。[结果]解冻后精子活率随解冻温度升高(40～75℃)而升高,而畸形率随解冻温度升高而降低,但高温下(90℃)解冻,精子活率显著低于解冻温度为40～75℃(P<0.05),畸形率显著高于解冻温度75℃(P<0.05);低温(40、75℃)下随着解冻时间延长,精子活率增高,但差异不显著;高温(90℃)下解冻,精子活率与解冻时间长短关系更为明显,时间越长,精子活率越低。精子畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。[结论]在生产实践中根据具体情况选用适合的解冻温度和解冻时间,建议使用75℃/3～5s解冻。     

母牛冷冻精液人工配种技术

近年来，肉牛产业已成为昭通市畜牧业发展的主攻方向。市委、市政府十分重视养牛业的发展，制定了一系列扶持政策，增加投入，加强基础设施建设，引进世界先进的牛细管冻精，在全市各县(区)均建立了肉牛冻精改良配种站，大力推广肉牛冻精人工配种技术，现将其操作技术介绍如下。