吉非替尼对表达PTEN的胶质瘤细胞株U87细胞增殖活性的影响

目的探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对表达磷酸酶一张力蛋白同源物（FrEN）的胶质瘤细胞株U87细胞增殖活性的影响。方法将人脑恶性胶质瘤细胞株U87细胞（PTEN缺失）置人DMEM中培养,根据转染质粒不同分为空白组（不转染任何质粒）、空载体组（转染pCDNA3．1载体）和PTEN组（转染pCDNA3．1-PTEN质粒）,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）,碘化丙碇双掺入法分析细胞DNA合成水平,采用流式细胞仪分析细胞周期,采用蛋白免疫印迹法分析蛋白表达。结果与空白组和空载体组相比,PTEN组PTEN蛋白表达水平明显升高,而磷酸化Akt蛋白表达水平明显降低。PTEN组BrdU阳性细胞比例[（13．5±2．7）％]明显低于空白组[（39．5±4．2）％;P〈0．05]和空载体组为[（40．7±5．1）％;P〈0．05]。PTEN组GJG。期细胞比例[（80．2±6．6）％]明显高于空白组[（43．2±5．2）％;P〈0．05]和空载体组[（41．1＋4．7）％;P〈0．05],而s和G2,M期细胞比例[分别为（35．7±3．7）％和（21．1±2．1）％]明显低于空白组[分别为（36．5±4．1）％和（22．4±1．9）％;P〈0．05]和空载体组[分别为（12．7＋2．O）％和（7．1±1．1）％;P〈0．051。结论高表达PTEN蛋白能够增强胶质瘤细胞株U87细胞对吉非替尼的敏感性。     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。     

全反式维甲酸抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型，腹腔注射全反式维甲酸后．MRI检测胶质瘤的体积变化、流式细胞仪检测细胞增殖时相变化及免疫组化检测p27Kip1蛋白的变化。结果治疗组较对照组肿瘤体积明显减小（P〈0．05）；G1期细胞比例明显增加（P〈0．05），S期细胞比例明显减少（P〈0．05）；p27Kip1蛋白的表达明显增加（P〈0．05）。结论全反式维甲酸通过上调p27Kip1蛋白的表达而抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖。     

冷冻联合全反式维甲酸抑制大鼠C6脑胶质瘤增殖的实验研究

目的探讨冷冻联合全反式维甲酸（ATRA）抑制大鼠c6脑胶质瘤细胞的增殖及其机制。方法在120只Wistar大鼠建立c6脑胶质瘤模型,并随机将其平均分为冷冻治疗、ATRA治疗、冷冻联合ATRA治疗及对照组。接种c6细胞第22天MRI检测10只动物的胶质瘤体积的变化,每组并处死10只动物取肿瘤组织,采用免疫组化法检测p27kipl蛋白的表达;观察余下10只荷瘤鼠的生存期。结果各治疗组较对照组肿瘤体积明显缩小（P〈O．05）,大鼠生存期明显延长,p27kipl蛋白的表达水平明显增多,以联合治疗组最为显著（P〈0．05）;p27kipl蛋白的表达与肿瘤体积呈明显负相关（P〈0．05）,与大鼠生存期呈明显正相关（P〈O．05）。结论与单一治疗相比,冷冻联合ATRA治疗能显著抑制大鼠c6胶质瘤细胞增殖,其机制可能与其表达p27kipl蛋白的上调有关。     

LRIG2基因全长及胞外段对胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响。方法将LRIG2全长,LRIG2胞外段（LRIG2_ecto）及空白质粒（对照）经慢病毒法分别转染胶质瘤细胞系U251细胞,筛选稳定细胞株,实时PCR及免疫印迹法检测mRNA及蛋白表达,细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期及细胞凋亡。结果两转染组Flag标签蛋白表达成功;两转染组LRIG2全长及LRIG2_ectomRNA表达较对照组明显升高（氏0．01）;两转染组细胞增殖率均明显高于对照组（P〈0．01）;两转染组s期与G2/M期细胞数之和（即细胞增殖指数）均明显高于对照组（P〈0．01）,而细胞凋亡率均明显低于对照组（P〈0．05）。结论LRIG2基因全长及LRIG2_ecto促进胶质瘤细胞增殖,并将细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞凋亡。     

靶向沉默Wip1基因协同替莫唑胺抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用

目的研究靶向沉默Wip1基因对增敏替莫唑胺(TMZ)抑制脑胶质瘤细胞增殖作用的影响。方法体外培养人胶质瘤细胞株U-87MG,将携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒感染U87-MG细胞。使用TMZ干预胶质瘤细胞,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术Annexin-V(APC染色)检测细胞的凋亡情况,流式细胞术PI染色法检测细胞周期。实验数据采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果 Wip1基因沉默的胶质瘤细胞与空载体慢病毒对照组细胞对TMZ的作用对比,3d后细胞增殖率较对照组下降57.7%;Wip1基因沉默组TMZ处理5d后细胞凋亡率为15.3%,空载体对照组为5.65%;Wip1基因沉默组细胞凋亡率明显要高(P<0.05);细胞周期结果显示Wip1基因沉默组G2细胞为63.0%,而空载体对照组为23.8%,Wip1基因沉默组表现为G2/M期细胞明显增多(P<0.05)。结论靶向沉默Wip1基因可以显著增加TMZ对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。     

胶质瘤中心部位及瘤周细胞对放疗的敏感性

目的 探讨胶质瘤中心部位及瘤周细胞对放疗的敏感性。方法 建立SD大鼠胶质瘤模型,X射线放疗后,对肿瘤中心及周围部位分别取材,运用免疫组化染色观察不同部位细胞增殖和凋亡指数,于细胞培养后采用流式细胞仪观察细胞凋亡并进行细胞周期分析。结果 X射线放疗后,胶质瘤细胞周围部位细胞增殖指数明显低于中心部位（P〈0．05）,凋亡指数明显高于中心部位（P〈0．05）;流式细胞学显示凋亡率及处于静止期／复制前期（G0／G1期）的细胞比例周围部位高于中心部位（均P〈0．05）。结论 胶质瘤不同部位细胞对放射线的敏感性不同,提高中心部位细胞对放射线的敏感性有助于提高其疗效。     

RhoE表达上调抑制U87细胞增殖与侵袭

目的探讨RhoE在胶质瘤发生发展过程中的作用。方法将包含RhoE基因的质粒转染U87细胞后,采用四唑盐（MTr）法检测细胞增殖能力的变化;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力的改变;Westernblot分析细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2和-9的表达变化。结果RhoE蛋白在U87和U251细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞;上调RhoE表达,U87细胞增殖和侵袭能力明显下降（P〈0．05）;Westernbolt检测显示上调RhoE表达能够降低U87细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平（P〈0．05）。结论上调RhoE的表达能够抑制胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭能力。     

胶质瘤多药耐药细胞株U251/TMZ的生物学特性

目的探讨胶质瘤U251／替莫唑胺（TMZ）多药耐药细胞株的生物学特性。方法采用TMZ间歇浓度梯度递增法诱导建立胶质瘤多药耐药细胞株U251／TMZ,光镜观察细胞形态,细胞计数计算倍增时间,四甲基偶氮唑蓝法检测耐药指数,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-PCR法检测多药耐药性1（MDRl）、Bcl-2、多药耐药相关蛋白5（MRP5）、肺耐药相关蛋白1（LRPl）等mRNA表达。结果胶质瘤耐药细胞株U251／TMZ对TMZ、依托泊苷、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素的耐药指数分别为4．39、3．61、2．64、2．00、1．63;细胞周期结果显示U251／TMZ细胞系较U251亲本细胞系G0/G1期和s期明显减少（P〈0．05）,GfM期明显增多（P〈0．05）;U251／TMZ倍增时间[（14．64＋1．98）h1较亲本细胞系u251[（10．26＋1．03）h1明显延长（P〈0．05）;U251／TMZ耐药细胞株MDRl、Bcl-2、MRP5、LRPl等mRNA表达均较亲本细胞系U251明显上调。结论间歇TMZ浓度递增法可成功建立人脑胶质瘤U251多药耐药系,MDRl、Bcl-2、MRP5、LRPl的表达明显上调可能与耐药性形成有关。     

Beclin 1 基因对恶性胶质瘤细胞 U87 自噬活性和增殖的影响简

目的研究BeclinJ基因对U87胶质瘤细胞自噬和增殖的影响。方法实验分5组：空白对照组．pSUPER—Bec组（表达BeclinsiRNA）与其阴性对照组（pSUPER—non组）,pcDNA3．1-Bec组（表达BeclinJ基因质粒）与其阴性对照组（pcDNA3．1-non组）。分别转染U87细胞,采用免疫印迹检测Beclin1、LC3和p62蛋白在各组的表达;用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）检测各组细胞增殖率。结果转染后48h,pSUPER—Bec组Beclin1、LC3B—11蛋白表达下降,p62蛋白表达升高。pcDNA3．1-Bec组Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达升高,p62蛋白表达下降。与空白对照组或pcDNA3．1-non组相比．pcDNA3．1-Bec组细胞增殖速度降低（P〈0．05）,其他各组细胞增殖速度无明显差异。结论恶性胶质瘤细胞中自噬相关基因Beclinj表达下降,过表达Beclinl蛋白能增强细胞的自噬活性,抑制细胞的增殖活性。     

VEGF165反义RNA抑制C6胶质瘤大鼠体内生长的实验研究

目的针对VEGF及其受体的抗血管生成治疗，已成为恶性胶质瘤治疗研究的新方向，为临床应用VEGF165反义RNA治疗胶质瘤提供实验室证据。方法本研究在建立大鼠C6胶质瘤模型基础上，利用脂质体法将pcDNA3-AVEGF165质粒导入C6胶质瘤细胞，以G418筛选阳性克隆。将阳性克隆及对照C6细胞定向移植人大鼠右脑尾状核，比较大鼠生存时间、肿瘤生长速率的变化，评判VEGF165反义RNA对脑胶质瘤生长的抑制作用。结果①成功将pcDNA3-AVEGF165质粒导入C6胶质瘤细胞，并筛选出阳性克隆株；②对照组和实验组C6细胞周期特征无明显变化；③VEGF165反义RNA对荷瘤大鼠有延长生存时间，延缓肿瘤生长速度的作用。结论VEGF165反义RNA对大鼠C6胶质瘤生长有明显抑制作用。     

不同病理类型和级别胶质瘤细胞IDH1基因突变情况分析

目的探讨国人不同病理类型和级别胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）基因突变情况及其临床意义。方法应用mIDH1 R132H免疫组化学法检测87例国人不同病理类型和级别的胶质瘤标本中IDH1基因突变发生率,分析不同病理类型、不同WHO级别和不同年龄的IDH1基因突变情况。结果 87例国人胶质瘤标本中有45例（51.7%）检出IDH1基因突变,并与胶质瘤的病理类型、WHO分级以及年龄等具有相关性。结论 IDH1基因突变在WHOⅡ、Ⅲ级胶质瘤中的发生率较高,并在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用。     

Autophagy and oxidative stress in gliomas with IDH1 mutations

IDH1 mutations in gliomas associate with longer survival. Prooxidant and antiproliferative effects of IDH1 mutations and its d-2-hydroxyglutarate (2-HG) product have been described in vitro, but inconsistently observed. It is also unclear whether overexpression of mutant IDH1 in wild-type cells accurately phenocopies the effects of endogenous IDH1-mutations on tumor apoptosis and autophagy. Herein we investigated the effects of 2-HG and mutant IDH1 overexpression on proliferation, apoptosis, oxidative stress, and autophagy in IDH1 wild-type glioma cells, and compared those results with patient-derived tumors. 2-HG reduced viability and proliferation of U87MG and LN18 cells, triggered apoptosis in LN18 cells, and autophagy in U87MG cells. In vitro studies and flank xenografts of U87MG cells overexpressing R132H IDH1 exhibited increased oxidative stress, including increases of both manganese superoxide dismutase (MnSOD) and p62. Patient-derived IDH1-mutant tumors showed no significant differences in apoptosis or autophagy, but showed p62 accumulation and actually trended toward reduced MnSOD expression. These data indicate that mutant IDH1 and 2-HG can induce oxidative stress, autophagy, and apoptosis, but these effects vary greatly according to cell type.     

替莫唑胺及甲泼尼龙对人胶质瘤细胞放射治疗敏感性的影响

目的探讨替莫唑胺（TMZ）和甲泼尼龙（MP）对人胶质瘤细胞系U251放射治疗敏感性的影响,以期为临床优化治疗方案提供依据。方法经体外传代培养的U251细胞根据治疗方案的不同,分为对照组、放射治疗（R）组、放射治疗＋替莫唑胺（R＋TMZ）组、放射治疗＋甲泼尼龙（R＋MP）组、放射治疗＋替莫唑胺＋甲泼尼龙（R＋TMZ＋MP）组,分别予以放射治疗（2Gy／24h）、替莫唑胺、甲泼尼龙及三者联合治疗。采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法、流式细胞术和Western blotting法分析U251细胞增殖率和凋亡率,观察凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达变化。结果放射线照射联合甲泼尼龙治疗后,U251细胞存活率明显升高（均P=0．000）;但经体外培养24和48h后,三者联合治疗组（R＋TMZ＋MP组）U251细胞增殖率显著高于放射治疗联合替莫唑胺组（P=0．000）。除对照组外,不同抗肿瘤治疗组U251细胞凋亡率均呈现升高趋势（P=0．000）,但放射治疗联合甲泼尼龙组细胞凋亡率显著低于其他各组（均P=0．000）。经放射线照射联合替莫唑胺和三者联合治疗后,U251细胞Bax蛋白表达水平升高（P=0．000）,而放射线照射联合甲泼尼龙和三者联合治疗,Bcl-2蛋白表达水平升高;其中以放射治疗联合替莫唑胺组Bax／Bcl-2比值最高（P=0．000）,放射治疗联合甲泼尼龙组最低（P=0．000）。结论甲泼尼龙可以诱导人胶质瘤细胞产生放射抵抗,而替莫唑胺对甲泼尼龙诱导的放射抵抗具有增敏作用。提示：胶质母细胞瘤患者在应用甲泼尼龙减轻放射治疗不良反应过程中所诱导的放射治疗抵抗可通过同时应用替莫唑胺而抵消。     

IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响及相关因素分析

目的 检测人脑不同级别胶质瘤组织中IDH1 R132H突变及胶质瘤细胞系IDH1表达情况,探讨IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响.方法 采用q-PCR法检测U87、U251、LN-229、HS683、U118等胶质瘤细胞系中IDH1表达情况,回顾性收集70例经手术切除、病理确诊的胶质瘤组织标本(实验组)及同...     

IDH1R132H抗体在测定人脑胶质瘤中IDH1突变的意义

目的研究IDH1R132H抗体(IMab-1)在测定人脑胶质瘤中IDH1突变中的作用。方法使用IDH1R132H抗体,通过免疫组织化学及Western-Blot方法检测97例人脑胶质瘤及9例其他中枢神经系统肿瘤,10例对照组脑组织的IDH1突变情况,比较其与采用基因片段测序方法检测结果的差异。结果 IDH1基因阳性测定结果:免疫组织化学方法为46例,Western-blot方法为49例,基因片段测序方法为52例,三者在统计学上无差异性。结论使用IDH1R132H抗体,通过免疫组织化学及Western-Blot方法检测人脑胶质瘤中IDH1突变情况,虽然有一定的假阴性,但准确率较高,操作方便,为一种便捷良好的检测IDH1突变的方法。     

全反式维甲酸增强替莫唑胺对U251细胞化疗效果的研究

目的观察全反式维甲酸（ATRA）对替莫唑胺（TMZ）治疗人脑胶质瘤是否有协同作用。方法用ATRA、TMZ或两药联合分别作用于人脑胶质瘤细胞株U251细胞,细胞划痕法检测各组的细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测CD133细胞阳性率。结果ATRA、TMZ均能抑制U251细胞的迁移,联合用药时迁移抑制更明显。对照组、ATRA组、TMZ组及联合用药组U251细胞凋亡率分别为（6．24±0．81）％、（24．93±4．58）％、（21．36±3．76）％和（54．27±4．83）％,CD133阳性细胞率分别为（7．05±0．27）％、（0．66±0．30）％、（36．32±3．22）％和（4．70±0．52）％。各组间细胞凋亡率和CD133阳性细胞率均有明显差异（P〈0．01）。结论ATRA和TMZ两药均可抑制U251细胞株迁移,促进细胞凋亡;两药联合应用可增强TMZ对U251细胞的化疗效果;其机制可能与ATRA减少CD133阳性细胞率有关。     

替莫唑胺对比传统化疗药治疗脑胶质瘤疗效的系统评价

目的系统评价替莫唑胺对比传统化疗药治疗脑胶质瘤的疗效。方法计算机检索国内外文献数据库(时限均从建库开始至2013年7月),收集术后放疗基础上替莫唑胺与传统化疗药治疗脑胶质瘤的随机对照试验,2名研究者独立提取资料和质量评价,使用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果最终纳入8个RCTs,864例患者,其中替莫唑胺组374例,传统化疗药物组490例。Meta分析结果显示,替莫唑胺与传统化疗药比较,两者在治疗有效率[RR=1.48,95%CI(1.24,1.77)]、5年生存率[HR=23.94,95%CI(13.26,43.22)]、无进展生存期[MD=4.00,95%CI(2.61,5.39)]、平均生存期[SMD=1.84,95%CI(1.40,2.27)]、消化道反应[RR=0.53,95%CI(0.39,0.71)]和骨髓抑制[RR=0.20,95%CI(0.08,0.51)]等方面差异均有统计学意义,替莫唑胺优于传统化疗药。结论替莫唑胺在提高脑胶质瘤患者的疗效,延长生存期,减少不良反应等方面均优于传统化疗药。