微波辐照对心肌细胞凋亡促进基因影响

目的探讨微波辐照诱导心肌细胞凋亡的分子病理机制。方法以功率密度峰值为950mW/cm2的脉冲微波辐照心肌细胞0,30,60,120s后,采用倒置显微镜观察心肌细胞形态,流式细胞仪及原位末端标记方法检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测多种凋亡相关基因表达的变化。结果辐照后心肌细胞呈现出典型的细胞凋亡形态。辐照60s后6,24h,心肌细胞凋亡率分别为（36.76±5.31）和（26.44±3.94）,与对照组（2.36±0.87）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。原位末端标记结果表明,心肌细胞凋亡率与辐照剂量呈正相关。凋亡促进基因Bax、P53、双向调控基因c-myc表达显著增强（P〈0.01）,凋亡抑制基因Bcl-2表达一过性增强,随后明显降低（P〈0.01）。结论心肌细胞是微波辐照损伤的敏感细胞,微波辐照可诱导心肌细胞凋亡,并存在剂量效应关系。Bcl-2/Bax、P53、c-myc参与微波辐照诱导的心肌细胞凋亡并发挥重要调控作用。     

高功率微波辐照对原代培养心肌细胞超微结构及肌动蛋白表达的影响

[目的 ]研究高功率微波 (HPM)对原代培养心肌细胞超微结构和肌动蛋白表达的影响 ,以探讨其对心肌细胞的损伤和修复规律及损伤机制。 [方法 ]HPM辐照细胞后 ,采用扫描电镜、透射电镜、原子力显微镜和免疫组织化学技术 ,观测心肌细胞超微结构和肌动蛋白表达的变化。 [结果 ]HPM辐照后 ,心肌细胞膜凹陷、穿孔和破裂 ,孔洞直径 ( 840± 5 7.5 9)nm ,深度 ( 2 0 8± 17.2 1)nm。线粒体肿胀 ,高尔基体和内质网扩张肿胀 ,多量髓鞘样结构出现。肌动蛋白的表达明显降低并与辐照剂量密切相关 ,r =-0 .945 (P <0 .0 1)。 [结论 ]HPM对心肌细胞超微结构特别是细胞膜结构造成明显损伤 ,损伤可能存在剂量 效应关系 ,并且有一定的发展和修复规律。     

缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的：探讨缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的相关机制。方法取体外新生大鼠心肌细胞作为试验样本,将其随即平均分配为四组,A组为对照组,B组为模拟缺血组,C组为缺血2 h后再灌注1h组,D组为缺血持续3 h组。采用TUNEL法对各组样本心肌细胞凋亡情况进行检测,并采用免疫组织化学法对Bcl-2/Bax基因的表达情况进行检测。结果在心肌细胞I/R后,检测到明显的阳性凋亡细胞,同时D组和C组细胞凋亡指数明显高于B组,差异具有显著性（P〈0.05）;免疫组织化学检测结果表明,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2基因表达明显下调。结论缺血和缺血再灌注均会造成心肌细胞凋亡,同时心肌细胞的凋亡同Bcl-2/Bax基因的表达之间存在一定的相互作用关系。     

阿托伐他汀与自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的关系研究

目的通过观察阿托伐他汀对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）心肌细胞凋亡的影响，初步探讨高血压心室重塑的可能机制。方法20只雄性SHR随机分为阿托伐他汀干预组（ATV组）和生理盐水组（NS组），以10只正常血压雄性WKY大鼠作为正常对照组（WKY组）分别给予阿托伐他汀和生理盐水灌胃，10周后进行心肌细胞凋亡等指标的测定。结果NS组大鼠和ATV组大鼠与WKY组大鼠相比，左室心肌细胞凋亡指数、血清及左室心肌中TNF-α蛋白、AngⅡ蛋白和血清中ET-1蛋白表达明显升高（P〈0．05），eNOS活性显著降低（P〈0．05），而ATV组大鼠与NS组大鼠比较，eNOS活性ATV组大鼠显著高于NS组大鼠（P〈0．05），余各指标均显著低于NS组大鼠（P〈0．05）。结论阿托伐他汀抑制高血压大鼠心肌细胞凋亡，减轻心室重塑和改善心功能可能与其抑制TNF-α、AngⅡ、ET-1的表达，提高eNOS活性有关。     

过氧亚硝基在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用

目的通过制备小鼠机械性创伤模型，观察过氧亚硝基（ONOO-）在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用和机制。方法利用Noble-Collip创伤仪制作非致死性小鼠创伤模型，通过比色法测定心肌组织caspase3活性，TUNEL染色观察心肌细胞凋亡指数，化学发光法检测总一氧化氮（NOx）含量，EIJSA方法检测心肌组织中过氧亚硝基标志物硝基酪氨酸（Nitrotyrosine，NT）含量。结果机械创伤小鼠心肌组织中发生明显的细胞凋亡，同时心肌组织中一氧化氮含量和硝基酪氨酸含量均增高。结论过氧亚硝基造成的心肌组织蛋白质硝基化是机械创伤致心肌细胞凋亡的重要机制，减少过氧亚硝基的生成有助于减轻机械创伤后心肌损伤。     

白藜芦醇对力竭运动大鼠心肌细胞凋亡影响

目的 摘探讨白藜芦醇对力竭运动大鼠心肌细胞氧化应激、凋亡影响及机制。方法 成年雄性SD大鼠随机分为5组：对照组、力竭运动组、白藜芦醇50、100、200 mg/kg组,检测大鼠心肌组织缺血缺氧面积、心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛、Ca²⁺-ATPase含量,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测心肌细胞Bax和caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,力竭运动组大鼠心肌缺血缺氧面积[（112.27±48.27）μm²]与心肌组织丙二醛含量[（3.98±0.75）nmol/mgpro]明显升高、心肌组织SOD活性[（30.54±4.29）U/mgpro]与Ca²⁺-ATPase活性[（0.32±0.03）mol/（mg·h）]明显下降、心肌细胞凋亡指数[（23.4±2.3）%]与心肌组织Bax、caspase-3蛋白表达[（1.28±0.32）、（1.59±0.12）]明显升高;与力竭运动组比较,200 mg/kg白藜芦醇组大鼠心肌缺血缺氧面积[（22.12±10.22）μm²]与心肌组织丙二醛含量[（1.65±0.11）nmol/mgpro]明显减少、心肌组织SOD、Ca²⁺-ATPase活性[分别为（69.57±9.02）U/mgpro、（0.72±0.11）mol/（mg·h）]明显升高、心肌细胞凋亡指数[（10.4±1.3）%]与心肌组织Bax、caspase-3蛋白表达[（0.36±0.11）、（0.62±0.13）]明显降低（P<0.01）;呈明显剂量效应关系。结论 白藜芦醇可有效缓解大鼠力竭运动所致氧化应激状态,其机制可能与降低心肌组织Bax、caspase-3表达水平,减少心肌细胞凋亡有关。     

微波辐射对家兔心脏损伤及其机制的研究

目的探讨不同强度微波辐射对家兔心脏的损伤作用及其机制。方法分别以强度为50、100、150和200 m W/cm2,频率为2450 MHz微波照射家兔20 min,照射后6 h,取家兔心脏,检测心肌细胞中ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性,HE染色观察心脏组织结构的改变,Western blotting检测心肌细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达量变化。结果随着微波辐射强度的增加(100、150和200 m W/cm2),辐射组家兔心肌细胞中ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性呈现降低趋势,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,微波辐射组家兔心肌细胞轻度水肿,肌纤维排列不整,心肌细胞出现明显的损伤。Western blotting结果显示,微波辐射后心肌细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达水平随着辐射强度的增加呈上升趋势(P<0.05)。结论微波辐射对家兔心脏具有明显的损伤作用,其可能机制是通过改变心肌细胞内应激水平而引发细胞凋亡。     

体外培养成人心肌细胞凋亡模型的建立

目的　建立缺氧诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡情况。方法　用胰蛋白酶和胶原酶进行消化 ,用差速黏附贴壁法、Brdu加入和人为破坏成纤维细胞法纯化心肌细胞 ,用IMDM培养基培养 ,4～ 6d后将体外培养的成人心肌细胞置于 3 %氧气、92 %氮气及 5 %二氧化碳孵箱中 ,6、12、2 4、48h缺氧后再恢复正常条件培养 4h ,造成缺氧损伤所致细胞凋亡模型 ,分别用倒置显微镜、电镜、TUNEL法技术检测凋亡发生的情况。结果　心肌细胞经历缺氧损伤后 ,倒置显微镜、电镜、TUNEL染色均观察到凋亡阳性细胞。TUNEL法定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 6、12、2 4、48h后 ,其凋亡率分别为 :( 3 3± 0 9) %、( 8 3± 1 8) %、( 16 1± 2 6) %和( 19 4± 2 3 ) %。结论　心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高 ,认为缺氧一定时间可以诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡     

微波致视网膜色素上皮细胞凋亡及锌的防护效应

目的 观察微波致体外培养的猪视网膜色素上皮细胞凋亡及锌的生物防护作用.方法 体外培养猪视网膜色素上皮细胞,微波按强度分为3组(10mW·cm^-2,20mW·cm^-2,30mW·cm^-2)辐照1h.30mW·cm^-2为防护组,在培养液中加入不同浓度的硫酸锌.辐照后电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞.结果 微波辐照后,10mW·cm^-2组可见细胞结构改变,以可逆性损伤为主.2mW·cm^-2组细胞大部分表现为早期凋亡.30mW·cm^-2组细胞可见到凋亡细胞和变性的细胞.流式细胞仪结果显示,随着微波剂量的增加,细胞周期中G1期细胞明显增加,S期和G2期细胞数量逐渐减少,在20mW·cm^-2组和30mW·cm^-2组均出现了“亚G1峰”.防护组随着锌浓度的增加,凋亡细胞的数量有下降的趋势,但细胞周期的分布仍未发生改变.结论 在本实验条件下,微波可引起体外培养的猪视网膜色素上皮细胞的凋亡,一定浓度的锌具有抗细胞凋亡的作用,在一定的浓度范围内,其抑制细胞凋亡与其浓度有量-效关系.     

HMGB1对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制。 方法 心肌细胞H9C2分为正常组、H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组。其中正常组细胞为正常培养的H9C2细胞,H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组细胞分别进行缺氧复氧处理,HMGB1 siRNA组、siRNA-NC组细胞在缺氧处理前48 h分别转染HMGB1小干扰RNA(HMGB1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control)。RT-PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。 结果 与正常组相比,H/R组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平显著升高(P<0.05),而SOD、p-STAT3水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、LDH、MDA及SOD水平、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与H/R组相比,HMGB1 siRNA组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平明显降低,而SOD、p-STAT3水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 HMGB1表达下调可能通过降低缺氧复氧对心肌细胞的氧化损伤而抑制心肌细胞凋亡。     

锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的调节

为了研究锌对大鼠成骨细胞膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＾＋Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活尾及其机制,实验设计照组和３个补锌组。采用孔雀绿比色法同步测定膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＾２＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性,以研究Ｚｎ＾２＋对酶活性的影响。     

镉对体外培养肾组织中Ca2+-ATPase的影响及尼莫地平的干预作用

目的 探讨镉对肾组织中Ca2+-ATPase的影响及尼莫地平(Nimo)对其的干预作用. 方法 在体外条件下,测定CdCl2对肾组织Ca2+-ATPase及乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶 (ALP)、尿N-乙酰-D-氨基葡萄苷酶(NAG)等多种肾损伤标志酶活力的作用及N imo干预处理后的影响.结果在低浓度CdCl2组,Ca2+-ATPase的活力明显升高,100 mg/L CdCl2组Ca2+-ATPase的活力为(42.12±3.35)μmol Pi.g-1 .h-1,与对照组[(31.23±2.59)μmol Pi.g-1.h-1]的差异有显著性(P＜0.05);而随CdCl2浓度升高,Ca2+-ATPase活力受到明显抑制, 200 mg/L CdCl2组的Ca2+-ATPase活力为(20.67±2.46)μmol Pi.g-1.h -1,明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05).而染镉前经Nimo预处理后,200 mg/L CdCl2+Nimo组的NAG活力,100、150、200 mg/L CdCl2+Nimo组的LDH活力及150、200 mg/L CdCl2+Nimo组的ALP活力均低于单纯染CdCl2组,差异有显著性( P＜0.05);100 mg/L CdCl2+Nimo组的Ca2+-ATPase活力低于、而200 mg /L CdCl2+Nimo组则高于单纯CdCl2组,差异均有显著性(P＜0.05). 结论 CdCl2对Ca2+-ATPase活力的影响是双相的,Nim o可部分解除CdCl2对Ca2+-ATPase活力的抑制,并具有减轻镉性肾损伤的能力 .     

移动电话微波辐射对大鼠神经细胞凋亡状态的影响

目的建立微波辐射大鼠动物模型,研究移动电话微波辐射对大鼠神经细胞凋亡状态的影响.方法健康成年雄性SD大鼠80只,随机分为4组空白组、辐射组、单纯去颅骨组、去颅骨辐射组,每组20只.辐射完成后用TUNEL法检测凋亡细胞阳性率,用免疫组织化学方法检测辐射后相应时间的脑组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况.结果去颅骨辐射组TUNEL阳性率[(26.45±9.27)%]和Bax、Bcl-2阳性细胞数(分别为23.5±3.58、11.1±2.55)与相应的空白组[分别为(9.59±2.55)%、14.2±2.46、7.0±1.14]、单纯去颅骨组[分别为(9.52±1.93)%、15.5±1.77、7.4±1.76]、辐射组[分别为(10.04±3.62)%、15.9±2.02、7.2±1.07]比较,差异均有显著性(P＜0.01).各组的Bax/Bcl-2比值均未见明显异常.结论微波辐射对完整颅骨大鼠的神经细胞凋亡状态未产生明显影响,而在去颅骨大鼠中则促进了细胞凋亡的发生,Bax、Bcl-2基因与细胞凋亡的发生相关,完整的颅骨为保护神经细胞免受微波辐射损伤的重要因素.     

高功率微波辐射后下丘脑神经元凋亡和线粒体膜电位与Ca2+的变化

目的探讨高功率微波辐射后下丘脑神经元凋亡、线粒体膜电位与Ca^2＋的变化。方法以10与30mW／cm^2高功率微波辐射原代培养的下丘脑神经元，于辐射后6h采用倒置显微镜和流式细胞术检测细胞的凋亡、线粒体膜电位与胞浆钙离子的变化。结果辐射后6h，10与30mW／cm^2组凋亡率与假辐射组相比均明显增加；30mW／cm^2组辐射后坏死率与假辐射组比较亦明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。辐射后6h，30mW／cm^2组Ca^2＋明显升高，膜电位性明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论细胞凋亡是下丘脑神经元死亡的主要方式之一，胞浆内Ca^2＋超载及线粒体膜电位的下降参与其损伤过程。     

二硫化碳对小鼠心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶基因表达的影响

目的探讨二硫化碳(CS2)对小鼠心肌细胞肌浆网Ca2 -ATP酶(SERCA2 a)表达的影响机制。方法将48只昆明小鼠分为4组给予不同剂量CS2(0~800 mg/m3)吸入染毒5周后,提取心肌的总RNA,运用逆转录聚合酶链反应技术来检测染毒小鼠心肌细SERCA2 a表达水平的变化。结果染毒前后体重差异无显著性(P>0.05),随着染毒剂量的增大,小鼠心肌细胞SERCA2 a的表达逐渐降低,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论CS2能降低小鼠心肌SERCA2 a的mRNA表达水平。     

2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡

目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。     

溴氰菊酯对大鼠神经细胞胞内游离钙浓度及凋亡的影响

目的　观察溴氰菊酯 (DM )对神经细胞游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)及凋亡的影响。方法　Wistar大鼠随机分为对照组与 3个染毒组 ,染毒组腹腔注射 1 2 .5mg/kg的DM ;以Fura 2 /AM为荧光指示剂 ,RF 530 1PC荧光分光光度计测定染毒后 5、2 4、48h后大鼠神经细胞 [Ca2 + ]i浓度的变化 ;FACS42 0型流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果　PM染毒 5、2 4、48h组大鼠海马及皮层细胞 [Ca2 + ]i分别为 :5h组海马 :(389.94± 43 .64)nmol/L、皮层 :(449.33± 2 3 .2 3)nmol/L ;2 4h组海马 :(340 .47±32 .36)nmol/L、皮层 :(31 1 .62± 2 5 .48)nmol/L ;48h组海马 (2 87.1 3± 2 4 .2 9)nmol/L、皮层 :(346 .55±36 .87)nmol/L ,均高于对照组 [海马 :(2 0 3 .2 4± 1 8.53)nmol/L、皮层 :(2 2 6 .85± 1 4 .81 )nmol/L] ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。染毒 48h组大鼠此二项指标值较 5h组明显下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。染毒 2 4、48h组大鼠神经细胞凋亡率 [海马 :(8.45± 1 .0 2 ) %、(9.44± 1 .1 4 ) % ,皮层 :(7.90± 0 .49) %、(8.0 1± 0 .87) % ]均明显高于对照组 [海马 :(2 .97± 0 .36) %、皮层 :(3 .50± 0 .48) % ] ,差异有显著性 (P<0 .0 1 ) ,且有时间 反应关系 (r=0 .940、0 .893)。结论　DM可影响大鼠神     

山楂黄酮对微波辐射大鼠睾丸细胞凋亡的防护作用

目的探讨山楂黄酮对微波辐射所致大鼠睾丸细胞凋亡的防护作用。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为5组,每组8只,分别为空白对照组、辐射模型组、低剂量防护组[40 mg/(kg·d)]、中剂量防护组[(60 mg·(kg·d)]和高剂量防护组[(80 mg/(kg·d)]。辐射模型组和各剂量防护组大鼠均给予200 m W/cm2微波辐射6 min;各防护组按上述剂量再给予山楂黄酮灌胃,每日1次,连续7 d。7 d后处死大鼠,观察睾丸细胞形态学变化,检测细胞存活率、凋亡率及caspase-3活力。结果微波辐射后,辐射模型组大鼠曲精小管退化坏死,胞浆结构疏松,内有水肿空泡,细胞器稀少,胞体核固缩,染色质边集;细胞存活率低于空白对照组,细胞凋亡率和细胞中caspase-3活力高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。山楂黄酮灌胃后,低剂量和中剂量防护组大鼠的睾丸组织形态学变化与辐射模型组相似,而高剂量防护组细胞损伤较轻;各剂量防护组细胞存活率高于辐射模型组,细胞凋亡率和细胞中caspase-3活力低于辐射模型组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 200 W/cm2微波辐射可使大鼠睾丸细胞凋亡,山楂黄酮对微波辐射引起的睾丸细胞凋亡有一定防护效果。     

营养干预对微波致大鼠海马过氧化损伤的保护效应研究

目的 观察微波急慢性辐照对大鼠海马的过氧化损伤效应,探讨微量营养素干预对微波致海马过氧化损伤的保护作用。方法 急性辐照组采用65W/cm²微波辐照20min后用营养饲料喂养八周,慢性辐照组采用15W/cm²微波辐照每天20min,连续8周,通过生化检测SOD、MDA、GSH-PX和ROS评价海马过氧化损伤。结果 微波急慢性辐照均能引起各组别大鼠海马SOD活性、GSH-PX活性、抑制ROS能力下降(P<0.05),MDA含量增加(P<0.05);而营养干预在微波急慢性辐照时能够显著保护SOD、GSH-PX活性(P<0.05),减少MDA含量(P<0.05),有效地促进抑制ROS能力的恢复(P<0.05)。结论 微波急慢性辐照均导致大鼠海马脑组织过氧化损伤,微量营养素干预能通过抗氧化对微波导致的海马组织损伤发挥保护作用。