表皮生长因子抑制小脑颗粒细胞凋亡的作用

目的了解表皮生长因子(EGF)对小脑颗粒细胞(rCGC)的保护作用。方法在细胞培养24小时的rCGC中,分别加入EGF及一氧化氮酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(NG-nitro-L-arginine methylester,NAME)。再经24小时二氧化碳恒温培养后,通过光学显微镜观察它们对rCGC产生的影响。结果EGF能显著减少培养细胞的损失,NAME可抑制EGF的作用。结论EGF通过一氧化氮酶抑制细胞凋亡而对小脑颗粒细胞产生保护作用。     

咖啡酸对神经毒素MPP+诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡的保护作用

目的:探讨咖啡酸(CA) 是否对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion, MPP ) 诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡具有保护作用.方法: 用咖啡酸孵育大鼠小脑颗粒细胞, 经MPP 处理后, 用MTT法测定细胞存活率, 荧光法检测caspase-3的活性.结果:咖啡酸对MPP 致小脑颗粒细胞存活率降低和caspase-3活性增强具有很好的抑制作用,并呈现稳定的量效和时效关系.结论:咖啡酸对MPP 诱导小脑颗粒细胞凋亡具有明显的保护作用.     

1—甲基—4—苯基吡啶啶离子诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡

目的 建立1－甲基－4－苯基吡啶离子（1－methy1-4-phenyl pyridinium ion,MPP^ )诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型。方法 MPP^ 处理大鼠小脑颗粒细胞,分别用甲基绿－派诺宁染色,DNA凝胶电泳,流式细胞术进行检测。结果 浓度为50μmol/L MPP^ 使小脑颗粒细胞发生凋亡。结论 以MPP^ 为诱导剂建立的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型,可用于研究和帕金森病（PD）有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物。     

免疫组织化学法观察体外培养的大鼠小脑颗粒细胞

用神经元特异性烯醇酶的抗血清进行PAP免疫组织化学染色(简称抗NSEPAP染色),观察体外培养大鼠小脑颗粒细胞的迁移,分化与成熟。发现随着细胞从种植片向周围迁移,突起逐渐形成,抗NSE-PAP染色反应于第四天从阴性转为阳性,染色逐渐增强,以10～12d最为明显,并由胞体延及突起。提示体外培养颗粒细胞的分化和成熟与体内的发育过程相似,可为体外研究神经细胞的发育提供较理想的实验模型。     

阿魏酸钠对多囊卵巢大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的:研究阿魏酸钠(SF)对多囊卵巢大鼠体重、血清激素和卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:20只SD雌性大鼠注射脱氢表雄酮(DHEA)建立多囊卵巢大鼠(PCO)模型,随机分为SF组和DHEA组,观察用药前后动物体重和血清激素水平变化情况;TUNEL法和免疫组化法检测卵巢颗粒细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平变化。结果:SF组血清T水平和E2浓度均较DHEA组降低(P<0.05),血清P浓度则明显增加(P<0.05);DHEA组镜下可见卵巢颗粒细胞层数明显增加至4-8层,细胞凋亡率显著低于SF组(P<0.001),其Bcl-2表达较空白组低(P<0.05),Bax表达则较高(P<0.001),Bcl-2/Bax的比值下降;SF组Bcl-2的表达较DHEA组高(P<0.001);Bax表达较低(P<0.001),Bcl-2/Bax的比值增加。结论:阿魏酸钠改善多囊卵巢大鼠内分泌状况可能与调节Bcl-2和Bax蛋白表达,发挥其抗细胞凋亡有关。     

米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的 探讨米非司酮(RU-486)对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能及其凋亡的影响.方法 体外培养SD雌性大鼠的卵巢颗粒细胞,采用流式细胞术及荧光染色观察加入米非司酮后细胞凋亡情况,免疫细胞化学法观察颗粒细胞中凋亡因子Fas的表达,化学发光法检测雌、孕激素水平.结果 颗粒细胞凋亡数量随米非司酮剂量增加而增多,凋亡率在米非司酮低剂量组[(7.50±0.86)%]与对照组[(6.70±0.73)%]间差异无统计学意义,中剂量组[(9.53±0.78)%]、高剂量组[(13.00±1.75)%]与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),各处理组之间差异有统计学意义(P<0.05).颗粒细胞中Fas蛋白表达随米非司酮处理剂量的增加而增强,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).培养细胞上清液中孕酮的水平随米非司酮浓度增加而降低,各处理组间差异有统计学意义(P<0.05),雌二醇水平组间差异无统计学意义.结论 米非司酮可能通过上调颗粒细胞表面Fas蛋白的表达,直接抑制颗粒细胞孕酮的分泌,诱导颗粒细胞发生凋亡,抑制卵泡发育;米非司酮对颗粒细胞分泌雌二醇的功能则没有直接的影响.     

氨甲酰胆碱对多巴胺诱导的小脑颗粒细胞凋亡的保护机制

[目的]研究多巴胺诱导小脑颗粒神经元凋亡的分子机制,以及胆碱受体激动剂氨甲酰胆碱对多巴胺诱导凋亡的作用。[方法]在培养的小脑颗粒神经元建立多巴胺凋亡模型。用相差显微镜观察形态学,NDA凝胶电 Hoechst 33258核染色分析神经元凋亡。细胞的存活率用二乙酸荧光素（FDA）染色法检测。采用Western blot分析细胞外信号调控的蛋白激酶（ERK）激活情况。[结果]多巴胺可诱导小脑颗粒神经元调亡,并可持续激活ERK,二者均可被氨甲酰胆碱和PD98059抑制。氨甲酰胆碱对神经元的保护作用及对ERK激活的抑制作用可被阿托品阻断。[结论]多巴胺在小脑颗粒神经元诱导凋亡可能是通过持续激活ERK介导的,氨甲酰胆碱通过激活M胆碱受体,继而抑制了ERK的激活,从而起到对神经元的保护作用。     

维生素D对PCOS大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的 探讨维生素D（vitamin D,VD）对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells,GCs）凋亡的影响。方法 选取3周龄SD雌性大鼠21只,采用随机数字表法分为对照组（n=6）和造模组（n=15）,建立PCOS大鼠模型。造模组采用来曲唑[1mg/（kg·d）,溶于0.5%羧甲纤维素钠溶液]灌胃联合高脂饲料喂养,对照组采用等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,给予普通饲料喂养,将12只造模成功的大鼠（3只造模失败）,采用随机数字表法分为PCOS组（n=6）和PCOS+VD组（n=6）,两组灌胃同等剂量玉米油,普通饲料喂养,连续21d。比较对照组、PCOS组和PCOS+VD组大鼠的动情周期、卵巢形态学变化,以及血清25羟维生素D[25 hydroxyvitam D,25-（OH）D]、睾酮（testosterone,T）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）水平。造模结束后,分离GCs进行体外培养,根据培养方式分为GCs对照组（n=6）、GCs-PCOS组（n=6）、GCs-（PCOS+VD）组（n=6）、GCs-（PCOS+ VD+LY294002）组（n=6）。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,透射电镜观察细胞凋亡小体,蛋白免疫印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果 与对照组比较,PCOS组大鼠血清中T、LH水平升高,FSH、25-（OH）D水平降低,动情周期紊乱,卵巢呈多囊样改变,差异均有统计学意义（P<0.05）;与PCOS组比较,PCOS+VD组大鼠血清T、LH降低,FSH及25-（OH）D水平升高,动情周期恢复正常,囊状卵泡数量减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。与GCs对照组比较,GCs-PCOS组GCs凋亡率及Bax蛋白表达增加,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少,差异均有统计学意义（P<0.05）;与GCs-PCOS组比较,GCs-（PCOS+VD）组的GCs凋亡率及Bax蛋白表达降低,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达增加,差异均有统计学意义（P<0.05）;与GCs-（PCOS+VD）组比较,GCs-（PCOS+VD+LY294002）组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 VD可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制GCs凋亡。     

氨甲酰胆碱对多巴胺诱导的小脑颗粒细胞凋亡的保护机制

【目的】研究多巴胺诱导小脑颗粒神经元凋亡的分子机制,以及胆碱受体激动剂氨甲酰胆碱对多巴胺诱导凋亡的作用。【方法】在培养的小脑颗粒神经元建立多巴胺凋亡模型。用相差显微镜观察形态学,DNA凝胶电泳和Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,细胞的存活率用二乙酸荧光素（FDA）染色法检测。采用Westernblot分析细胞外信号调控的蛋白激酶（ERK）激活情况。【结果】多巴胺可诱导小脑颗粒神经元凋亡,并可持续激活ERK,二者均可被氨甲酰胆碱和PD98059抑制。氨甲酰胆碱对神经元的保护作用及对ERK激活的抑制作用可被阿托品阻断。【结论】多巴胺在小脑颗粒神经元诱导凋亡可能是通过持续激活ERK介导的。氨甲酰胆碱通过激活M胆碱受体,继而抑制了ERK的激活,从而起到对神经元的保护作用。     

白藜芦醇改善多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能和抑制凋亡的作用

目的：观察白藜芦醇对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响以及线粒体的形态和功能的改变,并探讨其可能的保护机制。方法：32只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,PCOS模型组（n=24）和模型对照组（n=8）。成功提取PCOS组颗粒细胞并体外培养,然后用不同浓度的白藜芦醇处理颗粒细胞,CCK-8法检测细胞活力的变化;Mito Tracker Deep Red染色观察细胞线粒体的形态变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化;ATP检测试剂盒检测ATP的变化;分光光度计检测与凋亡密切相关casppase-3和caspase-9酶活性变化;最后,蛋白免疫印迹法检测颗粒细胞内caspase-3和caspase-9蛋白水平的变化。结果：白藜芦醇处理PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞后,颗粒细胞的增殖活性明显增强（P=0.000）;Mito Tracker Deep Read染色结果显示线粒体质量明显增加,形状呈管状或长条状;颗粒细胞内ATP产量和线粒体膜电位也明显增加（P=0.000、P=0.000）。另外,白藜芦醇也降低了caspas...     

Bax/Bak在抑制人颗粒细胞凋亡中的作用

目的探讨Bax、Bak等凋亡分子的小分子干扰RNA（siRNA）可否抑制人颗粒细胞凋亡。方法（1）用Western blotting检测Bax-siRNA、Bak-siRNA;（2）将Bax-siRNA、Bak-siRNA分别或同时转染入人颗粒细胞,观察基本形态,用流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡。结果（1）转染了Bax-siRNA和Bak-siRNA后的条带减弱,说明细胞内Bax、Bak含量降低。（2）空白对照组、Bak干扰组、Bak＋Bax干扰组细胞形态正常;Bax干扰组细胞形态基本正常,胞质中有少数黑点;阳性对照组、阴性对照组细胞变圆,收缩,细胞间距大,胞质中有较多黑点。（3）流式细胞仪检测结果：Bak干扰组凋亡指数为3.44%,Bax＋Bak联合干扰组凋亡指数为3.97%,明显低于阴性对照;Bax干扰组凋亡指数为19.98%,与阴性对照组相似。结论（1）干扰Bak等凋亡分子的表达,可以抑制颗粒细胞的凋亡。（2）Bak干扰组及Bax＋Bak联合干扰组抗颗粒凋亡效果显著。（3）Bax干扰组抑制颗粒细胞凋亡的作用不明显。     

海洋甾体YC-1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

【目的】观察海洋甾体YC 1对低钾 (5mmol/L ,lowK )诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响 ,并对其机制进行初步探讨。【方法】小脑颗粒神经元原代培养 ;采用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)和Hoechst 332 5 8DNA染色法观察神经元存活率及形态学特征 ;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。【结果】低钾引起小脑颗粒神经元凋亡。Hoechst332 5 8DNA染色表现出染色体固缩 ,DNA凝胶电泳表现出由大小不一的断裂DNA片段形成的“梯形”条带。YC 1(1 2 5～ 2 0 μmol/L)呈时间和剂量依赖性地抑制上述现象的出现。蛋白质合成抑制剂放线菌酮 (cycloheximide)不能改变由不同孵育时间造成的YC 1对神经元不同保护效果的差异。【结论】YC 1抑制低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,YC 1的这一作用可能属于一非基因效应。     

卵泡刺激素对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的：探讨FSH对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响。方法：分别将新鲜卵巢和冻融卵巢卵泡颗粒细胞分离出来，体外培养4d，对比培养液中添加FSH与未添加FSH条件下的颗粒细胞凋亡率。结果：培养液中添加FSH后，冻融颗粒细胞凋亡率降低。结论：培养液中添加10ng／ml FSH，可减少从新鲜和冻融卵泡分离的颗粒细胞在体外培养过程中发生凋亡的几率。     

SiRNA抑制细胞凋亡Fas通道研究进展

在生物体发育过程中和在许多疾病的发病机制中,细胞凋亡起着重要的作用。参与调节细胞凋亡的许多信号途径中,Fas—FasL是最重要的介导细胞凋亡系统(Nagata,S．,1996)。肝脏的许多细胞表达Fas／FasL,当Fas这一重要的细胞凋亡受体过度表达时,则可以引起疾病。如受HBV感染的人肝细胞表面有高度表达的Fas,可以诱发感染细胞过度凋亡,成为严重肝功能衰竭的主要原因。     

神经酰胺对大鼠离体培养颗粒细胞凋亡的影响

探讨神经酰胺与颗粒细胞凋亡的关系。方法以ＰＭＳＧ处理的雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为模型,制备了颗粒细胞悬液。应用ＴＵＮＥＬ法及流式细胞术检测了神经酰胺对离体培养颗粒细胞凋亡的影响。结果体以培养的颗粒细胞存在自发性凋亡,神经酰胺处理的颗粒细胞凋亡率明显高于对照组;流式细胞术分析可见增强的凋亡峰。结论神经酰中能作为一种重要的信息分子参与大颗料细胞凋亡。     

胆红素诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的研究

目的从细胞与分子水平探讨胆红素神经毒性的机制。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒和大脑皮质神经元,观察胆红素对其毒性的影响。并用ＤＮＡ染色及琼脂糖凝胶电泳法确定胆红素诱导神经元死亡时的形态学及生物化学改变的特征。结果胆红素在０～１７μｍｏｌ／Ｌ的浓度下,选择性地、剂量与时间依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡,呈现凋亡的特征为：核染色质浓缩与ＤＮＡ双链断裂成小片段;在凝胶电泳图上呈“梯形”样改变;用ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂预处理神经元,可阻断其死亡。说明胆红素诱导小脑神经元死亡的过程需要蛋白质的合成。而此浓度的胆红素对大脑皮质神经元的毒性明显低于小脑神经元。结论胆红素可以选择性地诱导小脑颗粒神经元凋亡。     

高K~+阻止神经元凋亡与cAMP关系的研究

原代培养的新生大鼠小脑颗粒神经元经 5mmol/LKCl或 2 5mmol/LKCl或 5mmol/LKCl+ 10 μmol/LFK处理 ,用二乙酸荧光素 (FDA)染色法测定存活细胞数及用碘标放射免疫法测定神经细胞内cAMP浓度 ([cAMP]i)。结果表明 :①幸存神经元数 :高钾组 199.11± 2 4.0 0 ,低钾组 47.5 6± 11.0 9,FK组 2 0 1.11± 2 7.43;② [cAMP]i(pmol/孔 ) :高钾组 0 .5 8±0 .2 2 0 ,低钾组 0 .32± 0 .10 6 ,FK组 2 .2 0± 0 .46 9。认为高K+ 阻止原代培养新生大鼠小脑颗粒神经元凋亡的效应与cAMP无关。     

心脏K+电流的特点和功能

不同物种 ,心脏不同部位的不同组织 ,至少存在10种不同的Ｋ+电流。某些电流只在某种组织中存在 ,如ＩＫＡＣｈ电流只在心房中存在 ,起搏电流只在有起搏功能的细胞中存在。这些电流每一种都有其特定的激活时程 (如存在失活过程的话 ,也有特定的失活过程 )和从失活恢复的时间过程 (如果存在的话 ) ,并常常取决于机能状态受到某些特异性阻滞剂的调节。正如利用这些电生理特性来确定在异源性表达系统中的电流和天然细胞中的电流有什么关系。近年来对多数心肌细胞Ｋ+电流的分子基础的研究已很充分[1] 。一组被称为延迟整流的Ｋ+电流是因为它们受…     

阻止脑细胞凋亡的药物

萨斯喀彻温的研究人员研制出数种药物并获得专利,这些药物有朝一日将有助于抵抗阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、癌症、卒中和其他衰弱性疾病。研究人员正在创建以萨斯喀彻温为基地的制药公司以便进一步提供资金以研制这些药物。萨斯喀彻温大学神经精神病研究单位(NRU)Alan Boulton说,该单位对这些药物进行了10年研究,在1992年取得了第一项专利。     

海洋甾体YC—1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

目的：观察海洋甾体ＹＣ－１对低钾（５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｌｏｗ Ｋ＾＋）诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法：小脑颗粒神经元原代培养;采用二乙酸荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ,ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法观察神经元存活率及形态学特征;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。结果：低钾引起小脑颗粒神经元凋亡,Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ＤＮＡ染色