人端粒酶逆转录酶核酶抑制端粒酶活性的实验研究

目的　为有效地切割端粒酶逆转录酶mRNA以降低端粒酶活性 ,从而使肿瘤细胞生长变慢 ,凋亡增加 .方法　设计并合成了 2个针对端粒酶逆转录酶mRNA的锤头状核酶基因htertRZ及htert 5’RZ ,构建了核酶基因的体外转录和真核表达质粒 ;并将核酶转染致肿瘤细胞中 ,检测其对肿瘤细胞端粒酶活性和生物学性状的影响 .结果　 2种核酶在细胞内均能明显地抑制端粒酶活性 ;核酶htertRZ稳定转染细胞后 ,使细胞生长变慢 ,倍增时间延长 ,但无明显促细胞凋亡作用 .结论　 2种核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂 ,在抑制肿瘤生长中发挥作用 .     

人端粒酶逆转录酶核酶抑制端粒酶活性的实验研究

为有效切割端粒酶逆转录酶mRNA为抑制端粒酶活性,设计合成了针对端粒酶逆转录酶mRNA的核酶基因htert RZ及htert-5'RZ,构建了核酶基因的体外转录和真核表达质粒,将核酶转染至肿瘤细胞中,均能抑制端酶活性,核酶heterRZ稳定转染细胞后,使细胞倍增时间长,但无明显细胞凋亡,因而,二种核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂,用于抑制肿瘤生长。     

端粒酶与食管癌、胃癌相关性的研究

端粒是染色体DNA端部的特化部分，由高度重复的短序列DNA一蛋白质组成的特殊结构，能维持染色体的稳定和完整．端粒酶是由RNA与蛋白质亚基组成的核糖核蛋白酶，能以自身RNA为模板，合成端粒序列，是一种非常特殊的逆转录酶．端粒的长度和端粒酶的活性与细胞永生化，细胞衰老和癌变密切相关，在肿瘤发生发展中，端粒酶成为一种重要的肿瘤生物学标志物，有望作为诊断和治疗肿瘤的新靶点．本对端粒酶的结构与功能，端粒酶与食管癌、胃癌相关性的研究新进展及端粒酶活性的检测方法做一简要综述．     

端粒酶活性检测研究进展

端粒酶是细胞内常见的一种逆转录酶,其功能在于维持细胞内染色体末端端粒的长度。端粒酶活性的异常升高通常与肿瘤细胞的产生以及生长相关。端粒酶的活性已经成为了癌症诊疗领域中非常重要的生物标志物。因此,对于端粒酶活性准确且高效的定量分析检测方案是当今分析科学,临床医学等相关学科领域研究的重点之一。随着分析测试技术的发展,提出了一系列具有超高性能的端粒酶活性检测方案。总结了近5年来端粒酶活性检测方案的发展全貌并且预估了端粒酶活性检测的未来发展方向。     

人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7活性的作用及影响

目的 探讨端粒酶特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性、增殖和凋亡的影响.方法 设计合成RZ基因,构建人端粒酶锤头状核酶真核表达质粒pcDNA3.1( )-hTERT-RZ,测序鉴定.提取MCF-7细胞总RNA,RT-PCR扩增靶基因的cDNA片段,插入载体pMD18-T并测序鉴定.将核酶重组体及hTERT载体体外转录,琼脂糖凝胶电泳检测Rz的切割活性.核酶载体转染乳腺癌细胞MCF-7,RT-PCR法检测核酶重组子转染效率及核酶转染细胞中hTERT mRNA的表达量,TRAP法测定细胞端粒酶活性,MTT法、流式细胞仪测定细胞增殖及凋亡.结果 测序表明peDNA3.1( )-hTERT-Rz和pMD18-T-hTERT构建成功.5%琼脂糖凝胶电泳表明体外转录出Rz和靶基因hTERT,Rz对靶基因hTERT具有切割活性.构建好的核酶真核表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞.发现其潜伏期延长,对数生长期减缓,S期细胞比例降低,G1期细胞比例增高(P＜0.01).端粒酶活性检测发现端粒酶活性明显降低.结论 端粒酶催化亚单位特异性核酶对靶基因hTERT在体外和体内均有催化切割活性,该核酶在乳腺癌MCF-7细胞中抑制hTERT的表达和细胞增殖,为核酶应用于恶性肿瘤的基因治疗提供了实验依据和新型工具酶.     

关于端粒酶研究:结果与问题

端粒酶是一种由RNA和蛋白质构成的复合结构，在活性状态下端粒酶可以其自身的RNA中的内设模板区为模板，以逆转录方式为染色体末端“加尾”。端粒酶活性的恢复是动物克隆成功的关键因素之一。但是，端粒酶活性恢复机制、端粒酶基因表达调控信号及端粒酶活性与衰老体细胞中染色体端粒恢复的关系等问题还有待研究解决。     

端粒酶与妇科肿瘤诊治的研究进展

端粒酶是一种RNA依赖的逆转录酶,其激活是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤。在妇科肿瘤的发生过程中,端粒酶活性和hTERT的表达与肿瘤的进展具有相关性。端粒酶及其催化亚单位成为妇科肿瘤早期诊断和预后判断的生物学指标。因此,抑制端粒酶活性有望成为妇科肿瘤治疗的新策略。     

全反式维甲酸对HL—60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶（hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变,方法：应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测ATRA处理HL－60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期的变化,结果：ATRA作用于HL－60细胞后,细胞内hTERT蛋白含量逐渐降低,细胞的端粒酶活性相应受到抑制。结论：在IL－60细胞分化过程中,可以通过hTERT基因的表达下调而抑制端粒酶的活性。     

端粒酶催化亚单位hTRT基因在人肝癌组织中的表达

目的：探讨人端粒酶催化亚单位hTRT基因在肝癌组织中的表迭情况．方法：用兔抗人端粒酶催化亚单位多克隆抗体作为一抗，生物素化羊抗兔IgG作为二抗，对肝癌组织石蜡切片采用免疫组织化学方法测定hTRT基因的表达．结果：30例肝癌组织中25例检出hTRT阳性(25／30)，正常肝组织无l例阳性．结论：免疫组织化学法检测hTRT敏感性高、特异性强、重复性好，较其他方法简便、快速、经济且无放射性核素污染等缺点，临床具有推广价值．     

端粒酶核酶抑制肿瘤细胞生长的研究

已证明有84.7%的人类恶性肿瘤组织细胞中端粒酶表达异常增高.端粒酶的作用是合成染色体末端端粒重复序列维持染色体稳定及细胞永生化的关键因素.因此,端粒酶在肿瘤发生发展中起重要作用,是目前最广泛的肿瘤标志物.核酶是一种具有内切酶活性的RNA分子,只要满足一定的空间结构就能定点切割RNA底物.切割端粒酶的核酶(简称为端粒酶核酶)主要针对端粒酶的两个亚单位hTR和hTERT抑制两基因的表达,降低端粒酶的活性,抑制肿瘤细胞的生长.     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

永生细胞系,体细胞和生殖腺细胞中端粒酶活性检测

用TRAP法对来自人肺、乳腺和皮肤的恶性肿瘤永生细胞系．和该三种组织来源的正常体细胞,及正常卵巢和睾丸组织进行了端粒酶活性检测。结果发现,三种永生细胞系和卵巢与睾丸组织中均可测到端粒酶活性,而三种组织来源的体细胞不能测到;提示端粒酶可能对恶性肿瘤细胞永生化、生物种系正常繁衍,和正常体细胞的衰老与寿命起着重要的决定作用。     

Study on the Detection of Telomerase Activity by Combining DNA Sequence Analysis with TRAP

Telomeric repeat amplification protocol (TRAP) is now aconventional assay for detecting telomerase activity. However, this method presents problems owing to tedious quantitation, radioisotopic handling. In order to alleviate these inconveniences, a novel telomerase DNA sequencing assay together with TRAP to detect human telomerase activity was developed. It was used to detect telomerase activity in Hela, HLF, MCF, K562, SMMC-7721 cells, Leukocytes and RNase-pretreated or heat-treated cells as control. Telomerase activity assayed by this method was positive when the number of K562 cells examined was 102，103, and 104. The telomerase activity depended on the number of K562 cells used in the assay. Telomerase activity of Rnase-pretreated cells or heat-treated cells, and human normal peripheral blood leukocyte(Leu) were negative. The result of this method was available within a few hours and was handled without radioisotope. Further studies should be taken to detect telomerase activity in quantitation.     

溴化乙锭-TRAP法检测端粒酶活性(英文)

端粒酶是一种核蛋白,在真核生物体内,通过将端粒重复顺序转移到染色体末端而维持染色体的稳定．端粒酶活性存在于生殖细胞和永生癌细胞,但在正常细胞中却极低乃至无法检测．我们使用ＥＢ染色简化了端粒酶活性检测的传统的ＴＲＡＰ（Ｔｅｌｏｍ ｅｒｉｃ Ｒｅｐｅａｔ Ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）法．结果表明,对粗抽提物而言,ＥＢ染色具有足够的可信度和灵敏度,同时又经济省时,便于推广使用     

DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性研究

摘要: 目的 建立利用 DNA 稳定的银纳米簇检测端粒酶活性的方法。方法 利用合成的寡核苷酸序列能稳定银纳米的特点,在强还原剂硼氢化钠存在下还原银离子得到具有良好荧光特性的银纳米簇。结果 利用端粒酶活性能够延伸 5' － ( TTAGGG) n － 3'的特性,以及含有 G 碱基的 DNA 序列靠近银纳米簇合成模板时,合成的银纳米簇的荧光明显提升特性建立端粒酶活性检测的方法。结论 合成了以寡核苷酸为模板的银纳米簇并对其荧光特性进行表征,建立了 DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性的方法。     

Conditional telomerase induction causes proliferation of hair follicle stem cells

TERT, the protein component of telomerase, serves to maintain telomere function through the de novo addition of telomere repeats to chromosome ends, and is reactivated in 90% of human cancers. In normal tissues, TERT is expressed in stem cells and in progenitor cells, but its role in these compartments is not fully understood. Here we show that conditional transgenic induction of TERT in mouse skin epithelium causes a rapid transition from telogen (the resting phase of the hair follicle cycle) to anagen (the active phase), thereby facilitating robust hair growth. TERT overexpression promotes this developmental transition by causing proliferation of quiescent, multipotent stem cells in the hair follicle bulge region. This new function for TERT does not require the telomerase RNA component, which encodes the template for telomere addition, and therefore operates through a mechanism independent of its activity in synthesizing telomere repeats. These data indicate that, in addition to its established role in extending telomeres, TERT can promote proliferation of resting stem cells through a non-canonical pathway.