竹节参皂苷的免疫佐剂活性研究

目的通过对竹节参总皂苷进行分段研究,确定其发挥佐剂效应的最佳段位。方法正丁醇萃取的总皂苷过D101大孔吸附树脂,通过用不同醇浓度洗脱,得到不同洗脱段,将各个段所得皂苷与蛋白共同注入小鼠体内进行免疫,每周免疫1次,共3次,最后1次免疫后5天处死小鼠取血,测定抗体效价;然后根据HPLC色谱分析及含量测定确定。结果 Elisa实验表明90%浓度的醇过大孔树脂所得皂苷的免疫佐剂活性最强,10%次之,30%和60%相当;HPLC及含量测定证明了皂苷的佐剂活性。结论 90%醇浓度洗脱的皂苷具有显著的佐剂效应。     

四物汤中不同组分对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤中不同组分对血虚小鼠模型造血功能的作用及其机理.方法:实验各组采用3.5Gy60Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型,造模后连续灌胃7 d,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养.结果:四物汤的多糖部分及非多糖部分均有补血作用.60%～80%醇沉物、80%醇沉上清部位正丁醇萃提物、80%醇沉上清部位乙酸乙酯、正丁醇萃提后剩余物均能升高辐射损伤性血虚证小鼠外周血中白细胞、红细胞数;但20%～40%醇沉物、40%～60%醇沉物及60%～80%醇沉物的补血作用均不及20%～80%醇沉物.芍药苷具有补血作用.结论:四物汤通过多成分、多环节改善血虚证小鼠的造血功能.     

超滤膜技术用于脉络宁注射液废弃物中多糖分离及其活性筛选研究

目的采用超滤膜技术对脉络宁注射液废弃物进行资源化研究。方法脉络宁注射液大生产废弃醇沉物中富含石斛多糖、牛膝多糖和金银花多糖,通过免疫活性筛选自废弃物中分离出富含多糖的有效部位。采用不同孔径超滤膜将废弃醇沉物分离所得粗多糖分为相对分子质量3×103、3×103~1×104、1×104~3×104、3×104~1×105、1×105~3×105、3×105共6个部位,分别命名为MFP1、MFP2、MFP3、MFP4、MFP5、MFP6;利用苯酚-硫酸比色法和考马斯亮蓝G-250染色法测定MFP1~MFP6中多糖和蛋白质的量;ELSD-HPLC法检测MFP1~MFP6中多糖组分;通过小鼠脾淋巴细胞增殖、转化和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7释放NO实验对MFP1~MFP6进行免疫活性筛选。结果 MFP1~MFP6多糖定量测定结果发现MFP4多糖的量最高且免疫活性最优,多糖的量和得率分别为76.80%和10.81%;MFP5免疫活性次之,其量和得率分别为73.23%和14.73%;结论 MFP4和MFP5是免疫活性较优的部位,具开发利用价值。超滤膜技术可用于脉络宁注射液废弃物中多糖资源化利用,该工艺过程简便易行,成本低廉,在循环经济利用中具有独特优势。     

分步醇沉对玛咖多糖单糖组成及抗氧化活性的影响

目的:分析分步醇沉所得玛咖多糖的单糖组成,并对各部分玛咖多糖的抗氧化能力进行研究。方法:采用水提醇沉法得到玛咖粗多糖,通过分步醇沉对玛咖粗多糖进行分离、纯化;采用气相色谱分析法对各玛咖多糖的单糖组成进行分析;最后采用三氯乙酸法和清除DPPH自由基的方法考察各部分玛咖多糖的抗氧化能力。结果:分步醇沉随乙醇浓度增加依次得到0~40%乙醇多糖部分,40%~50%乙醇多糖部分,50%~60%乙醇多糖部分,60%~70%乙醇多糖部分及70%~80%乙醇多糖部分,依次命名为MP1,MP2,MP3,MP4和MP5;其中收率最大的为MP1,纯度最高的为MP4,分别为0.856%和68.5%;经气相色谱技术分析发现不同体积分数乙醇所得玛咖多糖的单糖组成种类及比例不同;抗氧化能力试验结果表明各部分玛咖多糖的抗氧化能力存在显著性差异,其中抗氧化能力最强的为MP5,MP4抗氧化能力次之,抗氧化能力最弱的为MP1。结论:分步醇沉所得各部分玛咖多糖的抗氧化能力有较大差异,玛咖多糖的抗氧化活性与其单糖组成的种类、比例及其空间构象密切相关,分步醇沉对分离纯化玛咖多糖具有重要意义,为玛咖多糖进一步分离纯化、结构组成和药理研究提供可靠的参考依据。     

竹节参多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠的恢复作用研究

目的:研究竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharides)对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠免疫功能的调节作用。方法:腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)制备免疫功能低下模型,计算脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性;分光光度法检测血清溶血素的含量;QHS法检测脾脏分泌抗体形成细胞的能力;流式细胞术检测外周血NK细胞百分比。结果:竹节参多糖能提高免疫低下小鼠的脾脏指数;显著促进脾淋巴细胞的增殖;促进血清溶血素的生成及QHS反应;提高外周血NK细胞比例。结论:竹节参多糖具有较好的免疫增强作用,对免疫低下小鼠的免疫系统具有恢复作用。     

发酵虫草菌粉多糖免疫活性实验研究

目的:探究发酵虫草菌粉多糖的免疫活性。方法:发酵虫草菌粉通过水提醇沉、复溶、透析、浓缩、冷冻干燥得多糖,命名为CSMP-60,其提取条件:60℃水提、提取时间4 h、料液比1∶15、提取次数2次。以小鼠免疫细胞为材料,检测CSMP-60的免疫活性。结果:CSMP-60能促进脾细胞的增殖(P0.05),明显促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α(P0.05),有促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ的趋势。结论:CSMP-60可能是发酵虫草菌粉产生免疫活性的效应物质之一。     

地黄多糖超声提取工艺优化及其抗氧化活性

目的优化地黄多糖超声提取工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以料液比、提取时间、提取温度、醇沉浓度为影响因素,多糖得率为评价指标,正交试验优化超声提取工艺。然后,考察分步醇沉(50%、70%、80%、90%乙醇,相应部位分别命名为RGPS50、RGPS70、RGPS80、RGPS90)对6个品种中多糖含有量的影响,以及多糖对DPPH自由基的清除作用。结果最佳条件为料液比1∶30,提取时间100 min,提取温度50℃,醇沉浓度90%,多糖得率7. 75%。各品种中多糖含有量依次为85-5星科金九沁怀北京3号怀丰。RGPS90中多糖含有量最高,抗氧化活性最弱; RGPS80中多糖含有量相对较低,抗氧化活性最强。结论该方法稳定可靠,可用于超声提取地黄多糖。不同品种、醇沉部位地黄中多糖含有量和抗氧化活性差异明显。     

白芍多糖抑制酪氨酸酶活性成分的筛选

目的筛选白芍多糖抑制酪氨酸酶活性成分。方法水提醇沉法制备多糖后,通过分步醇沉得到不同组分(PRPS20、PRPS40、PRPS60、PRPS80),酪氨酸酶活性抑制试验进行评价。再从PRPS40、PRPS60组分中分离纯化得到3种多糖成分(PRPS40-1、PRPS60-1、PRPS60-2),并对三者进行评价和初步表征。结果 PRPS40、PRPS60组分抑酶活性较强,并呈现明显的浓度依赖性。3种多糖成分初步表征为均一多糖,均以α-糖苷键相连,其中PRPS60-1可能为吡喃糖型中性多糖,PRPS40-1、PRPS60-2可能为含硫酸基的吡喃型酸性多糖,同时三者均显示出一定抑酶活性,并且表现出明显的协同作用。结论 PRPS40、PRPS60组分是白芍多糖美白活性成分,可显著抑制酪氨酸酶活性,所含PRPS40-1、PRPS60-1、PRPS60-2这3种多糖成分可能是其物质基础。     

竹节参多糖对肝细胞损伤的影响

目的：探讨竹节参多糖对脂肪变性肝细胞的保护作用。方法制备竹节参多糖不同浓度（30%、60%及90%）乙醇洗脱部位,应用棕榈酸（PA）诱导HepG2脂肪变性的细胞模型,筛选药物的干预活性,采用MTT法观察细胞存活状况,油红O染色观察细胞脂肪变性情况,提取细胞总RNA检测相关因子的表达水平。结果 MTT法检测结果显示,30%醇沉组细胞存活率较模型组明显升高;油红 O 染色其细胞内泡状脂滴数目较模型组明显减少;RT-PCR检测结果显示,内质网应激相关基因葡萄糖调节蛋白、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白及炎性因子的表达较模型组明显降低。结论竹节参多糖30%乙醇洗脱部位能明显降低PA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能是通过干预内质网应激反应实现。     

滇黄精中多糖的分离与抗氧化活性研究

目的分离纯化滇黄精Polygonatum kingianum中的均一多糖,并阐释其理化性质和抗氧化活性。方法通过水提醇沉、分级醇沉得滇黄精总多糖(PKS)的50%和70%醇沉部位,再经DEAE-琼脂糖凝胶FF离子交换柱和Sephadex G-100柱色谱法分离纯化得到均一多糖,并利用柱前衍生化HPLC、高效凝胶渗透色谱法和红外光谱法分别对其单糖组成、相对分子质量和结构进行研究;同时采用总还原力实验、1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟基自由基(·OH)清除法对其抗氧化活性进行评价。结果从50%和70%醇沉部位分离纯化得到3个均一多糖(PKS-1、PKS-2和PKS-3),其单糖组成均含有D-甘露糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖、D-阿拉伯糖和L-岩藻糖,其中PKS-1及PKS-3还分别含有D-核糖和L-鼠李糖;相对分子质量分别为85 017.83、266 084.76和474 799.22;PKS、PKS-1和PKS-2的总还原能力、·OH及DPPH自由基的清除能力为PKS PKS-2PKS-1。结论从滇黄精50%和70%醇沉部位分离到3个均一多糖,均为含有β构型的吡喃环酸性多糖,其单糖组成相似,PKS、PKS-1和PKS-2均有一定的抗氧化活性,为滇黄精抗氧化活性成分的研究及抗衰老药物和功能性食品的开发利用奠定了科学基础。     

河蚌多糖粗提物的分级醇沉及其活性研究

目的比较不同醇沉浓度河蚌多糖粗提物分级沉淀物的药效,确定河蚌多糖粗提物的有效部位。方法采用不同的醇沉浓度,分级沉淀获得不同的沉淀物,以经典的小鼠热板法和小鼠耳廓肿胀法,分别测定不同分级沉淀物的抗炎和镇痛作用,评价不同纯化工艺对药效的影响。结果 40%乙醇沉淀部位得率较高;40%和60%乙醇沉淀部位是镇痛有效部位(P<0.05);60%乙醇沉淀部位有明显的抗炎作用(P<0.05)。结论 40%和60%乙醇沉淀物段是河蚌多糖粗提物抗炎镇痛的有效部位,可为该提取物进一步的化学和工艺研究提供参考。     

夏枯草抗疱疹病毒多糖的提取及纯化工艺研究

目的:优化夏枯草抗疱疹病毒多糖的提取及纯化工艺,为新药研究提供科学依据。方法:以多糖含量和浸膏得率为指标,采用L9(34)正交试验法对夏枯草多糖提取过程中的提取次数,加水倍量及提取时间3个因素进行优化研究;以多糖含量及体外抗单纯性疱疹病毒I型(HSV-1)活性为考察指标,对超滤和醇沉两种纯化技术进行比较。结果:最优水提工艺为第1次加水14倍,第2、3次加水12倍,提取3次,每次提取时间1.5 h;采用超滤和醇沉两种技术分别纯化所得多糖。通过MTT法测得醇沉多糖和超滤多糖抑制HSV-1的IC50分别为(93.99±13.12)μg/m L和(51.35±15.30)μg/m L,结果表明超滤技术制备的多糖提取物抗单纯性疱疹病毒活性显著高于醇沉技术。结论:采用超滤技术制备的夏枯草多糖具有较高的含量及抗单纯性疱疹病毒活性,可作为夏枯草多糖开发新药的纯化工艺。     

不同分子量双参多糖抗氧化活性研究

目的:对不同分子量双参多糖的抗氧化活性研究。方法:双参经水提醇沉法、sevag法脱蛋白、大孔吸附树脂脱色素得粗多糖,采用40%、60%、80%乙醇分级醇沉得到三个不同分子量的双参多糖TGPA、TGPB和TGPC,利用HPGPC色谱分析三个不同醇沉部位的双参多糖分子量。采用DPPH自由基和超氧阴离子自由基体系对其进行抗氧化活性评价。结果:TGP (A-C)分子量范围在1600~2000 KDa、630~2000 KDa和230~2000 KDa。TGPA主要的分子量为2000KDa、TGPB主要分子量为691830KDa、TGPC主要分子量为575439KDa。不同分子量的双参多糖体外抗氧化活性均呈浓度浓度依赖性,其中分子量小的双参多糖具有较高的清除作用。结论:双参多糖具有一定的抗氧化作用,为其进一步均一多糖的分离纯化、结构表征和活性探索奠定基础。     

胀果甘草多糖GiP-3的结构分析及免疫活性测定

目的:分离纯化胀果甘草多糖,并研究其结构及免疫活性。方法:采用水提醇沉法提取胀果甘草粗多糖,经离子交换柱色谱和凝胶柱色谱分离纯化,高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法、红外光谱(IR)法、气相-质谱(GC-MS)法和核磁共振氢谱(~1H-NMR)法分析其结构,噻唑蓝(MTT)法测定其对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞增殖的影响。结果:胀果甘草根及根茎经水提醇沉,离子交换柱色谱和凝胶柱色谱分离纯化,得到平均相对分子质量为2.1×10~4Da的均一多糖组分GiP-3。对该多糖的结构和免疫活性的研究结果表明,GiP-3是由阿拉伯糖(Ara),鼠李糖(Rha),半乳糖(Gal)以1∶0.12∶18组成的中性阿拉伯半乳聚糖,其结构的主链由→3)α-Galp(1→残基组成,→5)α-Araf(1→支链和少量→2,4)α-Rhap(1→支链位于α-Galp残基的O-6位上。GiP-3在体外对未经诱导和经刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾细胞增殖均有促进作用,对RAW 264.7巨噬细胞的增殖也有一定的促进作用,与空白对照组均有显著性差异(P0.05)。结论:GiP-3为均一多糖,具有免疫增强活性。     

不同分离提纯工艺对冬凌草多糖提取率与免疫活性的影响

目的:优选分离冬凌草多糖的方法,探究不同分离方法对冬凌草多糖分离效果的影响。方法:分别以DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法、乙醇分级醇析法对冬凌草粗多糖进行分离纯化,以不同分离组分中多糖含量及其免疫活性比较优选冬凌草粗多糖的分离工艺。结果:DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法分离得到5个组分,通过乙醇分级醇沉初步得到4个冬凌草多糖组分,前者分离产品纯度较高,而后者产品在体外小鼠脾淋巴T细胞的增殖实验中表现出较强生物活性。结论:为进一步研究冬凌草多糖的生物活性,可选用乙醇分级醇沉法对冬凌草多糖进行分离纯化。     

天冬提取物作为流感灭活疫苗佐剂的初步研究

目的探讨天冬提取物作为流感疫苗佐剂的免疫增强作用,并应用二次回归正交旋转组合方法优化天冬佐剂与疫苗剂量。方法将不同剂量的天冬提取物与H3N2流感灭活疫苗共同肌肉免疫小鼠,以相应剂量灭活疫苗的单独免疫组、灭活疫苗与氢氧化铝共同免疫组、生理盐水免疫组作为对照组,间隔3周,免疫2次,取尾血收集血清,测定血凝抑制（HI）抗体效价。并且应用二次回归正交旋转组合方法,以天冬提取物及流感疫苗血凝素（HA）含量作为2个关键因素设计分组,将HI效价作为响应值,使用SAS9.1软件进行数据分析,对天冬提取物及疫苗剂量组合进行研究,并得出最佳响应值对应的二者剂量。结果天冬提取物能显著增强血清HI抗体效价,并且高于氢氧化铝佐剂。当流感疫苗HA含量为4.345μg、天冬提取物含量为0.1 mg时能够获得最高响应值（HI效价为5 092）。结论天冬提取物对流感灭活疫苗具有佐剂效果,并有望成为流感灭活疫苗的新型免疫佐剂。     

垂盆草水溶性成分的免疫活性研究

目的：研究垂盆草水溶性成分的药理活性。方法：采用水提醇沉法将垂盆草的水提液国醇分别按2：1,1：2进行醇沉,将所得的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ三组水溶性成分,进行正常小鼠及免疫低下小鼠的迟发型过敏（delayed type hypersensitivity)实验,血清溶血素实验。结果：在细胞免疫方面,组分I,II对免疫低下小鼠有免疫增强作用,而对正常小鼠无影响,组分Ⅲ对正常小鼠有免疫抑制作用,对免疫低下小鼠无影响。结论：垂盆草3种水溶性成分的免疫活性和免疫调节作用与机体所处的免疫状态密切相关,Ⅰ,Ⅱ对免疫受抑状态小鼠可能免疫调整作用。     

正交设计法优选六月青多糖胶囊提取及醇沉工艺

目的:优选六月青多糖胶囊提取、醇沉工艺条件。方法:以多糖含量为指标,采用正交试验考察料液比、煎煮次数及煎煮时间对六月青多糖胶囊提取工艺的影响;以多糖含量及多糖收率为综合评价指标,选取醇沉时间、醇沉次数、加醇量及醇沉浓度为考察因素,通过正交试验优选醇沉工艺;采用苯酚-浓硫酸法测定总多糖含量。结果:六月青多糖胶囊最佳提取工艺为加10倍量水煎煮3次,每次煎煮2 h。最佳醇沉条件为水提液过滤后浓缩至0.5 g.mL-1,加7倍量95%乙醇沉淀12h,沉淀1次。醇沉后多糖纯度达71.05%,收率6.83%。结论:优选的提取及醇沉工艺条件稳定合理,可为六月青多糖胶囊的生产提供实验依据。     

红曲霉菌胞外多糖提取及抗氧化活性测定

目的：红曲霉菌胞外多糖发酵提取优化,测定红曲霉菌胞外多糖清除DPPH能力,分析红曲胞外多糖糖链组成。方法：取摇床转速150r/min和120r/min,收集96h,102h,108h,120h的除细胞发酵液,以1/4、1/2、2/3、1/1,浓缩比减压蒸馏去细胞发酵液,95%的酒精分级醇沉,收集15%、30%、50%、75%醇沉沉淀物,苯酚-硫酸法测多糖含量并计算多糖得率;测定各胞外多糖的DPPH清除能力。结果：摇床转速150r/min多糖得率较高,96h发酵的多糖得率明显高于其它发酵时间,1/4浓缩,红曲霉胞外多糖（Exopolysaccharide,Eps）分布最均匀,2/3浓缩提取胞外多糖量最多;75%醇沉多糖清除DPPH最强。结论：不同的浓缩比和发酵时间对红曲霉菌胞外多糖得率有明显的影响;红曲霉菌胞外多糖有清除DPPH能力,以75%醇沉多糖作用为主。     

苦蘵多糖的提取及体外抗氧化活性的研究

目的研究苦蘵多糖的醇沉条件及其体外抗氧化活性。方法经超声提取,除脂,除蛋白等工艺得到苦蘵粗多糖,并考察了醇沉条件(醇沉比、温度、pH、时间、浓缩比)对多糖沉淀的影响。采用体外实验研究了苦蘵多糖对·OH和DP-PH的清除作用及对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用。结果在最佳的醇沉条件(浓缩比4∶1,温度-20℃,醇沉时间16h,醇沉比为1∶4,pH为7)下,多糖提取率为3.15%。多糖对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制率可达80%,对·OH和DPPH也都有很好的清除作用。结论苦蘵果实中多糖有良好的体外抗氧化活性。