U50,488H抑制缺氧/复氧心肌细胞线粒体分裂作用及机制

目的探讨外源性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50,488H对缺氧/复氧(H/R) H9C2心肌细胞线粒体分裂的作用及机制。方法将H9C2心肌细胞随机分为常氧对照组(Control组)、H/R组、H/R+U50,488H组(H/R+U组)、H/R+κ-OR阻断剂(nor-BNI)+U50,488H组(H/R+N+U组)、H/R+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin+U50,488H组(H/R+W+U组)、H/R+蛋白激酶B(Akt)抑制剂MK2206+U50,488H组(H/R+M+U组)。采用CCK8试剂盒检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态;免疫印迹法检测细胞内PI3K、Akt、线粒体动力学分裂相关蛋白1(Drp1)的表达。结果与Control组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率显著增加,线粒体分裂增加,磷酸化PI3K与Akt表达略增加,磷酸化Drp1 Ser637表达显著降低(P <0. 05);与H/R组比较,H/R+U组细胞活力增加,细胞凋亡率下降,线粒体分裂减少,磷酸化PI3K、Akt Ser473与Drp1 Ser637表达均显著增加(P <0. 05)。结论 H/R可引起心肌细胞凋亡及线粒体异常分裂,使用U50,488H激活κ-OR后,可通过PI3K-Akt通路促使Drp1 Ser637磷酸化,抑制H/R心肌细胞线粒体异常分裂,减少细胞凋亡。     

幼鼠实验性肺炎右室心肌细胞L型钙电流的记录

观察幼年大鼠发生肺炎时右心室心肌细胞L型Ca^2 通道电流,研究肺炎合并心力衰竭时心肌细胞钙代谢改变。取50日龄Wistar大鼠,分别经气管注入金黄色葡萄球菌和无菌生理盐水,建立肺炎模型和对照。急性酶解分离出右室心肌细胞,采用全细胞式膜片钳方法,对接咱后24h、120h的肺炎组和相应对照组分别记录右室心肌细胞L型Ca^2 通道电流。24h肺炎心肌细胞L型Ca^2 通道电流大小无显著改变,而120h肺火组通道电流显著增大,两组电流曲线的峰电位和激活电位均无改变。实验表,同炎早期右室心肌细胞膜L型Ca^2 通道电流无明显改变,中后期明显增大,整个观测期间肺炎对该通道基本属性无明显影响。     

鬼箭羽钩藤复方液对心肌肥大大鼠L型钙电流的影响

 目的 探讨鬼箭羽钩藤复方液对高血压性心肌肥大的影响.方法 利用腹主动脉缩窄法建立高血压性心肌肥大模型,利用灌胃法给予中药治疗,采用离体大鼠心脏 Langendorff 灌注法急性分离心肌细胞,利用膜片钳全细胞技术记录L型钙电流,比较正常对照组、高血压模型组及中药治疗组之间的区别.结果 高血压模型组的L型钙电流密度显著高于正常对照组(P＜0.05);中药治疗组的L型钙电流密度显著小于高血压模型组(P＜0.05),与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 鬼箭羽钩藤复方液具有逆转高血压性心肌肥大的作用.     

κ阿片受体激动剂U45088 H对大鼠体外循环后认知功能及PKA-CREB信号通路影响

目的探讨κ阿片受体(KORs)激动剂U45088H对大鼠体外循环(CPB)后认知功能及PKA-CREB信号通路的影响。方法选取成年雄性SD大鼠40只为研究对象。采用随机数字表法分为假手术(S)组、CPB(C)组、CPB+U50488H(K)组、CPB+KORs拮抗剂Nor-BNI+U50488H(N)组与CPB+PKA拮抗剂H89+U50488H(H)组,每组各8只。S组不建模型,其余4组各CPB 60 min。K组CPB前30 min静脉注射U50488H 1.5 mg/kg;N组CPB前1 h静脉注射Nor-BNI 2 mg/kg,CPB前30 min静脉注射U50488 1.5 mg/kg;H组CPB前1 h侧脑室注射H89 5μl,CPB前30 min静脉注射U50488H 1.5 mg/kg。1 d后水迷宫法检测大鼠认知功能,TUNEL法观察海马组织细胞凋亡,Western-blot法检测海马组织p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达情况。结果与S组比较,C、K、N及H组大鼠水迷宫逃避潜伏期均延长,穿越平台次数、游泳距离及停留时间均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,C、K、N及H组大鼠海马细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,C、K、N及H组大鼠海马p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KORs可减少大鼠CPB后认知功能障碍的发生,其机制可能与激活PKA-CREB信号通路有关。     

脱氢表雄甾酮对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活性钾通道的作用

本实验应用膜片钳技术 ,研究钙激活性钾通道开放剂脱氢表雄甾酮 (DHEA)对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (SMCS)钾通道的作用 ,从离子通道水平探讨DHEA对CHPH作用机制 ;同时用右心插管法证实DHEA对CHPH的降压作用 ,并观察DHEA对体动脉压的影响 ,以期筛选有效治疗CHPH而副作用小的新药。作者选取 5 0只雄性Wistar大鼠 ,随机分为对照组(A组 ,1 0只 )和慢性缺氧组 (B组 ) ,B组又随机分为B1、B2、B3、B4组 (每组各 1 0只 ) ,B组大鼠均以常压缺氧 3周建立大鼠慢性缺氧肺动脉高压模型。采用急性酶分离法分离得到大鼠肺动脉平滑肌…     

缬沙坦对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的研究AT1受体拮抗剂缬沙坦对正常大鼠心室肌细胞L-钙电流(Ica-L)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,观察0.4μmol/L的缬沙坦引起单个大鼠心室肌细胞L型钙通道电流变化。结果0.4μmol/L缬沙坦使正常大鼠心室肌细胞L型钙电流峰值明显降低(P<0.01),I-V曲线上移,但不改变其激活电位、峰值电位和反转电位。不影响通道稳态激活曲线,使稳态失活曲线左移。结论0.4μmol/L缬沙坦可直接阻断大鼠心室肌细胞L型钙通道,改变心室肌细胞的电生理特性,可能是其抗心律失常的机制之一。     

急性缺氧对脑损伤大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体1α表达的影响

目的　观察急性中度缺氧对脑损伤大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体 1α (metabotropicglutam ate receptor 1α,m Glu R1α)表达的影响 ,探讨缺氧诱导二次脑损伤的致伤机理。　方法　 90只雄性 SD大鼠随机分为对照组 ,损伤组 (改良 Marm arou脑损伤模型 )、缺氧 (4 0 0 0 m高度 ) 10 min组、缺氧 30 m in组、损伤后缺氧 10 min组、损伤后缺氧 30 min组等 6组 ,各组在相应处理后 4h取标本 ,行免疫组化、HE染色及电镜检测。光镜下计数每高倍视野中损伤神经元及 m Glu R1α阳性神经元的数目 ,并对实验结果进行析因设计的方差分析。　结果　 10 m in和 30 min缺氧对正常鼠脑皮层的显微、超微结构及 m Glu R1α表达无明显影响 (P>0 .0 5 ) ;10 m in缺氧也未导致脑损伤大鼠脑皮层显微、超微结构及 m Glu R1α表达明显改变 (P>0 .0 5 ) ;而 30 min缺氧可诱导脑损伤大鼠脑皮层显微及超微结构明显改变 ,m Glu R1α表达明显增高 (P<0 .0 1)。　结论　 30 min急性中度缺氧可加剧脑损伤大鼠脑皮层神经元损伤 ,同时诱导 m Glu R1α高表达 ,提示 m Glu R1α可能参与了缺氧诱导的二次脑损伤过程     

肿瘤坏死因子致伤无菌大鼠对脑组织β受体及磷脂酶A_2活性的影响

用放射配基结合分析法测定了经腹腔注射重组人肿瘤坏死因子α型(TNFα)致伤的无菌大鼠脑细胞膜肾上腺素能β受体,同时用ELISA法测定了血中TNFα水平,用生化法测定脑细胞组织膜磷脂酶A_2(PLA_2)活性。结果表明,外原性重组人的TNFα在整体状况下能增加脑组织β受体数量,激活膜PLA_2,同时血中TNFα水平亦高于对照组。     

超氧中介巯基氧化剂对骨骼肌型钙释放通道的调控作用

目的通过研究可氧化巯基的萘醌（NQ）和硒（Se）化合物对骨骼肌型钙释放通道（RyR1）的调控作用,探讨以O2^.-巯基为基础的氧化胁迫对细胞钙调控机制/钙信号通路的影响。方法在NQ和Se的激活及抑制浓度下,考察骨骼肌肌质网（SR）囊泡系的O2^.-的产量及其对[3H]-ryanodine结合、钙释放动力学、RyR1的氧化还原电势Eryr、单通道活动和通道蛋白的自由巯基群规模等的影响。结果RyR1的自由巯基逐渐被NQ或Se氧化,表现为先激活后抑制通道;导致Eryr分别向更加还原和氧化方向移动;氧化巯基同时伴有浓度依赖性的O2^.-产生,后者参与氧化RyR1自由巯基。结论O2^.-在NQ和Se类巯基氧化剂调控RyR1的机制中起到重要作用,其主要作用目标之一是RyR1中那些对氧化环境敏感的自由巯基职能群。     

快速心房起搏对家兔L型钙通道α1c亚单位表达的影响及维拉帕米的保护作用

目的 观察快速心房起搏对家兔心房L型钙通道基因和蛋白表达的影响及L型钙通道阻滞剂维拉帕米的保护作用.方法 新西兰大耳白家兔30只,随机分成快速起搏组和维拉帕米干预组,经右颈外静脉穿刺于右房置入电极,起搏组根据起搏时间分为P6(6h)、P12(12h)、P24(24h)、P48(48h)组和假手术组(SH组).维拉帕米干预组在快速起搏前缓慢静脉推注维拉帕米0.2mg/kg.停止起搏后取右房组织,应用半定量反转录聚合酶链反应测定各时相点L型钙通道α1c亚单位mRNA的表达水平,Western blot检测蛋白的表达水平.结果 L型钙通道α1c亚单位表达水平在快速起搏6h后下调,并随起搏时间的延长进一步下调,mRNA和蛋白的改变一致;维拉帕米干预后,其表达水平在快速起搏6h和12h时没有改变,在起搏24h时开始下调,但幅度明显小于快速起搏组.结论 快速心房起搏可使L型钙通道亚单位mRNA和蛋白表达水平下调.维拉帕米对快速心房起搏导致的L型钙通道亚单位表达下调有保护作用.     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型Ca电流阻滞作用的实验研究

目的：观察卡维地洛对大鼠心室肌细胞ICa,L电流的抑制作用,探讨卡维地洛抗心律失常的离子通道机制。方法：采用胶原酶酶解法分离大鼠心室肌细胞;采用膜片钳全细胞技术记录大鼠心室肌细胞ICa,L电流,观察细胞外液中加入卡维地洛后,ICa,L电流的变化。结果：对照组及卡维地洛组ICa,L密度分别为（pA／pF）：11．25±1．57,3．89±0．59（P〈0．05）;卡维地洛组ICa,L的I—V曲线向上方移位。结论：卡维地洛能够对抗心律失常的机理之一与它能够阻断ICa,L有关。     

过氧化氢对乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响及卡维地洛的拮抗作用

目的　研究过氧化氢 (H2 O2 )对心肌细胞[Ca2 + ]i的影响 ,以及卡维地洛对H2 O2 诱导钙超载的拮抗作用。方法　采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养。实验分为 4组 :正常对照组 ;H2 O2 组 :加入终浓度为 10 0 μmol/L的H2 O2 ;卡维地洛组 :加入终浓度为 1μmol/L的卡维地洛 ;H2 O2 +卡维地洛组 :同时加入卡维地洛 1μmol/L与H2 O2 10 0 μmol/L。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术 ,分别于加入H2 O2 后即刻和 15min时检测 [Ca2 + ]i的变化。结果　对照组和卡维地洛组心肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。一加入H2 O2 ,细胞内荧光光密度值便开始增加 ,15min后细胞内荧光强度和荧光光密度值较对照组显著增高 (P <0 0 5 )。而H2 O2 +卡维地洛组细胞内荧光光密度值显著低于H2 O2 组 (P <0 0 5 )。结论　H2 O2 可引起心肌细胞内钙超载 ,卡维地洛能显著减轻H2 O2 诱导的心肌细胞内Ca2 + 超载     

利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响

 目的 研究利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响。方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧和高糖模型。实验分为:正常对照组、利拉鲁肽对照组、缺氧和高糖模型组、利拉鲁肽处理组、胰高血糖素样肽-1 (glucagon like peptide-1, GLP-1)受体抑制剂组、高渗对照组6组。采用荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子变化,化学荧光法检测活性氧族(reactive oxygen species, ROS)水平、利用生化方法检测Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性、RT-PCR技术检测钙敏感的钙蛋白酶(μ-calpain)基因表达、流式细胞仪测定细胞凋亡率、ELISA法检测细胞caspase-3活性。结果 与正常对照组相比,缺氧高糖模型组细胞内ROS水平、μ-calpain mRNA表达量、caspase-3活性均显著升高(P<0.01);Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.01);游离钙离子浓度由(117.19±15.04)nmol/L增加至(508.53±26.11)nmol/L,细胞凋亡率由(3.95±0.12)%增加至(31.03±4.30)%(P<0.01)。利拉鲁肽处理组细胞较缺氧高糖模型组上述参数均明显改善,游离钙离子浓度和细胞凋亡率显著降低(P<0.01);GLP-1R抑制剂exendin(9-39)可拮抗利拉鲁肽的上述作用(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可明显抑制缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载及μ-calpain基因的上调,降低caspase-3水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

肾上腺髓质素对肺动脉高压大鼠血流动力学及细胞因子的影响

目的观察肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）治疗对慢性低氧性肺动脉高压大鼠血流动力学指标、肺血管重构及细胞因子表达的影响,探讨ADM对慢性低氧性肺动脉高压的作用及其可能机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（n=10）,低氧组（n=10）和治疗组（n=10）。治疗组大鼠通过微量渗透泵皮下持续给予ADM（300ng／h）2周,低氧组大鼠则用同样的方法给予200μl生理盐水注入。低氧2周后,以右心导管法测定大鼠血流动力学指标,放射免疫法检测血清中醛固酮及ADM水平。处死大鼠,检测右心室与左心室加室间隔比值RV／（IJV＋s）。将肺组织切片进行HE染色,图像分析检测肺血管重构。Western印迹检测重塑的肺血管中转化生长因子-β1（TGF-β1）、内皮素-1（ET—1）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达。结果低氧2周后,与对照组大鼠相比,低氧组大鼠肺动脉收缩压（PASP）、肺动脉舒张压（PADP）、平均肺动脉压（mPAP）及血清醛固酮水平显著升高,RV／（LV＋s）显著增加,肺血管管壁厚度与外径的比值（MT％）及管壁面积与血管总面积的比值（MA％）显著增加,重塑的肺血管中TGF-β1、ET-1和TNF-α的表达显著增加;与低氧组大鼠相比,治疗组大鼠PASP、PADP、mPAP、血清醛固酮水平显著降低,RV／（LV＋S）及重塑的肺血管中MT％和MA％显著下降,同时,重塑的肺血管中TGF-β1、ET-1和TNF—α表达显著降低。结论外源性补充ADM可改善低氧性肺动脉高压大鼠的血流动力学指标及肺血管重构,其机制可能和降低醛固酮水平,抑制肺动脉TGF-β1、ET-1和TNF-α的表达有关。     

An investigation of the effects of TETRA RF fields on intracellular calcium in neurones and cardiac myocytes

Purpose:?This study aimed to determine whether Terrestrial Trunked Radio (TETRA) fields can affect intracellular calcium signalling in excitable cells.

Materials and methods:?Intracellular calcium concentration ([Ca^{2 +} ]_i) was measured in cultured rat cerebellar granule cells and cardiac myocytes during exposure to TETRA fields (380.8875 MHz pulse modulated at 17.6 Hz, 25% duty cycle). [Ca^{2 +} ]_i was measured as fura-PE3, fluo-3 or fluo-4 fluorescence by digital image analysis.

Results:?Granule cells exposed at specific absorption rates (SARs) of 5, 10, 20, 50 or 400 mW · kg^?1 showed no significant changes in resting [Ca^{2 +} ]_i. Increases in [Ca^{2 +} ]_i in response to potassium-induced depolarization were significantly different from sham controls in TETRA-exposed cells, but the majority of the difference was attributable to initial biological variation between cell cultures. No difference was found between fura-PE3 (UV excitation) and fluo-3 (visible light excitation) measurements in these cells. Exposure to TETRA (50 or 400 mW · kg^?1) had no significant effect on either the rate or amplitude of spontaneous Ca^{2 +} transients in cardiac myocytes. The cells showed normal responses to salbutamol (50 μM) and acetylcholine (10 μM).

Conclusions:?Overall, these results showed no evidence of any consistent or biologically relevant effect of TETRA fields on [Ca^{2 +} ]_i in granule cells and cardiac myocytes at any of the SAR tested.     

富氧对缺氧大鼠心肌琥珀酸脱氢酶及超微结构的影响

目的：探讨富氧对缺氧大鼠心肌损伤的保护作用及机理。方法：雄性Wistar大鼠32只随机分为平原对照组、低氧组、富氧组，低氧组在模拟海拔5400m低压舱内24h，富氧组在模拟5400m的低压舱内12h，然后富氧（27．0％的氧混合气）12h，观察心肌琥珀酸脱氢酶（SDH）及超微结构的改变。结果：低氧组心肌细胞灶性变性坏死，肌丝溶解凝固，间质水肿液和纤维素样渗出。富氧组心肌无明显病变，仅滑面内质网轻度扩张。富氧组SDH活性明显高于低氧组。结论：低氧导致心肌SDH活性及超微结构的改变，富氧对心肌有保护作用。     

重复经颅磁刺激(Rtms)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制的研究

目的通过大鼠的行为学及海马β1和β2肾上腺素受体mRNA表达，研究重复经颅磁刺激（rTMS）对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制。方法通过比较抑郁症和非抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的表现探讨大鼠的行为学变化；通过RT-PCR半定量法分析其海马β1和β2肾上腺素受体mRNA含量的变化。结果抑郁症大鼠海马的β1和β2肾上腺素受体mRNA表达增加；rTMS能够缩短抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的悬浮时间，并减少其海马β1和β2肾上腺素受体mRNA的表达。结论rTMS对抑郁症有明显的治疗作用，且作用机制与海马β1和β2肾上腺素受体表达减少有关。     

低氧习服对大鼠血浆内皮素、心房利尿钠肽、C型利尿钠肽和血管紧张素含量的影响

目的：研究急性低氧和低氧习服对大鼠血浆内皮素、血管紧张素、心房利尿钠肽(atrial nalriuretic peptide ANP)和C型利尿钠肽(C-type natriuretic peptide，CNP)含量的影响。方法：间断低氧习服大鼠(3000m、5000m各4h/d，共2周)和正常大鼠经8000m缺氧4h后，观察其血浆内皮素、血管紧张素、ANP和CNP含量的变化。结果：低氧时大鼠血浆内皮素含量有增加的趋势，低氧对血浆CNP含量无明显影响。急性低氧时大鼠血浆ANP、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量显著增高。低氧习服后，ANP和AngⅠ含量显著降低，接近正常水平，AngⅡ含量有下降趋势。结论：大鼠经间断低氧习服后，血浆ANP和AngⅠ含量显著降低，可能是心脏低氧习服的机制之一。