基于抗原表位预测的MUC1模拟肽表位筛选

目的:预测粘蛋白1(Mucin1,MUC1)抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位.方法:对MUC1的二级结构及免疫原性进行分析,预测MUC1的抗原表位.利用纯化获得的Ma695抗体筛选噬菌体随机12肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆.结果:MUC1存在有17个潜在的抗原表位区域.经3轮筛选,获得了14个阳性克隆,DNA序列分析并推导出其氨基酸序列:KHYDPFHHRMPQ,QADTARS VALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIHYWNHNRV;4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上.结论:预测MUC1抗原B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能奠定了基础.所得序列KHYDPFHHRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIH YWN HNRV能模拟MUC1抗原表位.     

噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。     

应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究

目的：从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据.方法：用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库.经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较.结果：经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性.结论：所得肽段可能是Em18抗原模拟表位.     

应用噬菌体肽库筛选胃癌相关抗原模拟表位

目的 利用噬菌体递呈随机肽库筛选技术,进行胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ模拟表位的研究,方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗胃癌单克隆抗体ＭＧ７Ａｂ,细胞ＥＬＩＳＡ方法检测其活性,以ＭＧ７ｍＡｂ作为筛选分子,生物淘洗噬菌体递呈随机７肽库,经３次淘洗后将筛选所得的噬菌体克隆进行ＤＮＡ测序,递呈随机７肽氨基酸序列同源性分析,结果 对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序理分析,获得一侯选模拟表位（ＫＰＨＸＨＸ     

旋毛虫抗原模拟表位抗原的筛选及序列分析

目的 分析旋毛虫抗原模拟表位的抗原性及其序列。方法 利用旋毛虫病患者血清免疫球蛋白(Ts-Ig)筛选噬菌体12肽库,以旋毛虫幼虫抗原(TsA)为对照,通过ELISA鉴定筛选所获抗原模拟表位(T1-T6)的抗原性,同时检测这些模拟抗原的DNA序列并分析其氨基酸组成。结果 T1-T6灵敏性及特异性与TsA无明显差异(P>0.05),其中T3,T6与肺吸虫病患者血清无交叉反应,特异性高于TsA(P<0.05),T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应,特异性亦高于TsA(P<0.05)。T1-T6编码的氨基酸序列有同源性,其末端三个氨基酸残基均相同,依次为:苯丙氨酸(F),天冬酰胺(N),脯氨酸(P)。结论 筛选噬菌体12肽库获得的旋毛虫抗原模拟表位具有较好的抗原性,有望发展成为新型旋毛虫病诊断抗原,而F,N,P三个氨基酸残基可能与其较好的抗原性有关。     

华支睾吸虫模拟抗原表位的筛选和鉴定

目的从噬菌体12肽库中筛选华支睾吸虫模拟抗原表位。方法应用噬菌体随机12肽库亲和筛选华支睾吸虫病患者混合血清IgG,经过3轮的淘筛,随机挑取蓝色噬菌斑进行扩增,以ELISA检测其免疫活性,挑选免疫活性较高的克隆进行序列分析及免疫学鉴定。结果8个阳性克隆测得6个DNA序列,Western-bloting显示6个单克隆噬菌体均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别。结论应用噬菌体肽库筛选技术可以获得华支睾吸虫模拟抗原表位。     

日本血吸虫尾蚴抗原模拟表位的筛选及其免疫保护性

目的 筛选日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，探讨其对日本血吸虫的免疫保护性。方法 用粗提日本血吸虫尾蚴抗原的抗体IgC作配体筛选噬菌体12肽库，按“吸附－洗脱－扩增”的过程进行三轮筛选；随机挑取单个噬菌体克隆进行Dot-ELISA检测；用混和噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染45d后剖杀冲虫，计算虫数及肝卵数。结果 经三轮筛选，特异性噬菌体得到富集，挑取11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定，均与日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清呈特异性反应。与对照组相比，混和噬体克隆免疫小鼠的减虫率为18.79%，减卵率为38.00%。结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，这些表位能诱导对日本血吸虫的保护性免疫。     

MUC1抗原的表位预测及模拟位的筛选

目的预测MUC1抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟位.方法联合运用多种方法对MUC1的二级结构和表面特性,如理化性质、亲水性、可塑性、溶剂可及性及免疫原性等方面进行分析,预测MUC1的抗原表位.利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆.结果MUC1存在有多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:1-10,24-54,65-77,84-91,108-134,140-156,159-174,179-196,199-210,220-233,237-265,270-299,316-337,351-362,369-396,411-420,445-502.经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP 4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上.结论应用多参数预测MUC1抗原的B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能、选择表达新型MUC1分子奠定了基础.所得序列TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位.     

噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位

目的 利用噬菌体12肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体(EGFR)抗原模拟表位。方法 以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗及尼妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选表皮生长因子受体抗原模拟表位,经过3轮淘选后,选择可与西妥昔单抗及尼妥珠单抗有不同程度结合的噬菌体,对阳性产物进行克隆及测序。结果 发现17个和21个阳性噬菌体分别与西妥昔单抗及尼妥珠单抗不同程度地结合;阳性克隆测序结果分别获得了3种不同的氨基酸序列。结论 初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体展示的随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位。     

神经精神性狼疮患者的临床特点

目的了解神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE)患者的临床特点,加强对该病的认识,以指导临床进行早期诊断和治疗,改善疾病预后。方法选取2011年6月—2016年6月在海南省人民医院住院的82例NPSLE患者作为病例组,同期收集本院确诊为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)但无神经精神症状的82名住院患者作为对照组,了解NPSLE患者神经精神症状,并比较两组患者的一般情况、临床表现、实验室和免疫学检查。结果 82例NPSLE患者,男性9例,女性73例,年龄(33.2±16.7)岁,病程1年者占69.5%,病例组患者病程要短于对照组(P0.05);62.2%的NPSLE患者在SLE发病3年内出现神经精神症状,常见的症状为狼疮性头痛(20.0%)、癫痫(12.0%)、性格改变(10.5%)和焦虑(10.5%),85.4%的患者合并有其他临床表现,主要为面部红斑(68.3%)、肾脏受累(59.8%)、关节疼痛(42.7%)等,与对照组相比,NPSLE患者更易合并光感性皮疹(P0.05);两组患者血小板、血肌酐、补体C4、免疫球蛋白Ig M、抗ds-DNA抗体、抗r-RNP抗体差异有统计学意义(P0.05)。结论 NPSLE患者偏向于青年女性,常发生于SLE病程的早期阶段,大部分患者在SLE发病3年内会出现神经精神症状,且更易合并光感性皮疹,血小板、肌酐、补体C4的降低和Ig M、抗ds-DNA抗体、抗r-RNP抗体水平的升高可辅助NPSLE进行早期诊断和预测。     

系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析

目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。     

男性系统性红斑狼疮临床特点探讨

目的探讨男性系统性红斑狼疮(SLE)的临床特点.方法对79例男性和612例女性 SLE患者进行对比研究.结果男性患者面部红斑、光敏发生率低,胸膜炎和心包炎多于女性.肾脏损害、尿蛋白定量、Ⅳ、Ⅴ型狼疮性肾炎比率、抗 Sm阳性、病死率明显高于女性.好转率低于女性.结论男性SLE临床表现不典型,肾脏损害较重,预后较差.     

系统性红斑狼疮17例分析

系统性红斑狼疮(SLE)多发于青中年女性,临床表现多样化。本文按美国风湿病学会(ARA)1982年修订的SLE诊断标准,选择17例住院SLE进行了分析,指出应注意对早期、不典型的病例的诊断,治疗方案和药物剂量必须根据病情活动情况而定,救冶狼疮性肾炎(LN)及减少激素用量是治疗中的重要问题。     

系统性红斑狼疮胸部X线平片的诊断价值

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者的胸部X线表现,以提高对本病的认识.方法:分析56例SLE患者的临床和胸部X线资料.结果:56例SLE患者的胸部X线检查有46例可见异常,主要表现为肺部、心脏、胸膜和膈肌的浸润.结论:X线检查对SLE胸部病变的诊断具有重要价值,但其影像学表现不具有特异性,必须密切结合临床资料综合分析.     

集中环磷酰胺冲击联合泼尼松在初治SLE患者中的疗效

目的:观察集中环磷酰胺(CTX)冲击联合泼尼松在初治系统性红斑狼疮(SLE)患者中的疗效。方法:选取初诊且未经治疗的SLE48例。CTX每2周冲击1次。每次第1dCTX0.4g,第2dCTX0.6g。泼尼松0.8mg/kg体质量。对SLE患者进行SLE活动性指数(SLEDAI)评分。将总分数(SLEDAIT)分成临床评分(SLEDAIc)、实验室评分(SLEDAIL)。分别于治疗前,治疗后4,8,12周进行SLEDAIT、SLEDAIc、SLEDAIL评分。于治疗前及治疗后12周测定尿蛋白、血清补体、血清抗双链DNA抗体(ds-DNA)。结果:共有41例随访至12周。治疗后4周与治疗前比较,SLEDAIT、SLEDAIc及SLEDAIL均明显下降(P<0.01),在8周时SLEDAIc继续下降(P<0.05),而SLEDAIL下降不明显。12周时SLEDAIT变化不明显。12周时与治疗前比较,补体C3、C4及ds-DNA均显著下(P<0.01)降,尿蛋白下降不明显。结论:集中环磷酰胺冲击方案有效。在12周时CTX总量可达6～8g,能迅速缓解病情,而不增加CTX的不良反应,可减少泼尼松的用量。     

不完全系统性红斑狼疮患者的随访研究及病情进展预测

目的 观察不完全系统性红斑狼疮（ILE）患者的临床随访研究结果，探索其病情进展预测因素。方法 对ILE患者定期随访，记录其临床资料及实验室检查结果，随访结束时分析病情进展预测因素。结果 共有19例ILE患者入选本项研究。在3年的随访研究中，有11例ILE患者发展为SLE。危险因素分析显示颡部红斑、光过敏、抗dsDNA抗体阳性与SLE进展相关。结论 在本次随访研究中，虽有58％的ILE患者最后进展为SLE，但所有患者的SLEDAI分值都较低，提示ILE为狼疮的一种比较轻的亚型。颡部红斑、光过敏及抗ds—DNA抗体阳性预示这些患者可能发展为SLE．     

系统性红斑狼疮与狼疮肾炎住院患者感染病原菌分析

目的：回顾性分析系统性红斑狼疮（SLE）和狼疮肾炎（SLE‐LN）住院患者感染病原菌的分离情况,为感染患者提供诊治依据。方法选取2010～2014年该院诊断为SLE与SLE‐LN的住院患者380例,其中SLE‐LN患者96例。用常规方法进行细菌接种、培养、分离鉴定和药敏试验。采用SPSS19．0和WHONET5．6软件进行统计分析与药敏分析。结果SLE和SLE‐LN患者尿路感染者分别占25．0％和27．1％,血流感染者分别占8．1％和10．4％,皮肤组织感染者分别占12．0％和8．3％。分离的革兰阴性菌以大肠埃希菌为主,在SLE患者中占25．53％,SLE‐LN患者中占30．21％,其次是鲍曼不动杆菌,分别占13．42％和14．54％。分离的革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌为主,在SLE患者中占11．58％,SLE‐LN患者中占11．46％。69．79％的SLE患者、66．67％的SLE‐LN患者尿液中分离出大肠埃希菌,高于常规尿培养中大肠埃希菌的分离率（45％）,差异有统计学意义（P＜0．01）。SLE患者分离大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于66％,对氨苄西林耐药率达89．69％,对哌拉西林／他唑巴坦的耐药率较低（3．09％）。SLE‐LN患者产超广谱β‐内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率均高于SLE患者。结论SLE患者发生感染的概率较高,临床可选用β‐内酰胺类复方制剂治疗SLE患者大肠埃希菌尿路感染。     

Gender differences are associated with the clinical features of systemic lupus erythematosus

Background  Systemic lupus erythematosus (SLE) mostly occurred in young women. This study was undertaken to investigate the different clinical characteristics of SLE between male and female patients, and to identify the sex hormone levels and clinical outcomes of different gender in SLE patients.

Methods  Of the 516 SLE patients admitted to the Peking University People’s Hospital from January 2008 to December 2010, 58 were male and 458 were female. Clinical manifestations, laboratory profiles and disease activity scores were evaluated in male and female patients. Sex hormones levels were also compared among male patients.

Results  The median age at SLE onset in male and female patients was 27.2 and 28.6 years, respectively. Compared with female patients, at onset of SLE, male patients showed higher rates of serious renal disease (58.6% vs. 47.2%, P=0.064), neuropsychiatric SLE (20.7% vs. 12.0%, P=0.055), and a higher incidence of anti-ds-DNA (25.9% vs. 16.8%, P=0.069), anti-Sm (17.2% vs. 8.7%, P=0.002), anti-Ro (46.6% vs. 28.4%, P=0.004), anti-U1RNP (29.3% vs. 15.3%, P=0.010), anticardiolipin antibody (25.9% vs. 11.4%, P=0.004), and decreased C3 levels (67.2% vs. 49.8%, P=0.009). Systemic lupus erythematosus disease activity index (SLEDAI) scores were higher in men than in women (16.8 vs. 12.8, P=0.038). Of the 58 male patients, 24 had not received aggressive treatment during the three months prior to the study. Levels of testosterone and dihydroepiandrosterone (DHEA) were lower in male SLE patients than in male healthy controls (P=0.004 and P=0.006, respectively). Low serum testosterone was an independent risk factor for the development of lupus nephritis (P=0.043). Male patients with elevated serum prolactin were at increased risk of developing neuropsychiatric manifestations of SLE (P=0.081).

Conclusion  Early recognition of risk factors and appropriate intervention are essential, which might lead to high disease activity and serious systemic damage in male SLE patients.

     

系统性红斑狼疮患者血清泌乳素水平的研究

目的探讨泌乳素（PILL）与系统性红斑狼疮（SLE）的关系。方法检测91例SLE患者与30例健康成人血清PILL水平。结果SLE患者血清PILL水平明显高于正常对照组，且活动期患者PILL水平显著高于静止期患者，PILL水平与抗ds-DNA水平呈正相关。活动期狼疮性肾炎（LN）患者血清PILL水平显著高于静止期患者，PILL水平与抗ds-DNA水平呈正相关。结论SLE患者血清PILL水平与病情活动相关，可将PILL作为判断SLE病情活动性的指标之一；PRL在SLE发病中可能起一定的作用。