荧光光谱法研究咖啡酸与胰脂肪酶相互作用

采用荧光光谱法研究了咖啡酸与胰脂肪酶的相互作用,主要包括荧光猝灭特性及结合常数、结合位点数的计算,抑制酶类型及抑制活性,金属离子对相互作用的影响。结果表明:咖啡酸加入后胰脂肪酶产生了规律性的荧光猝灭,最大吸收波长出现红移现象,主要属于静态猝灭。25℃和37℃下结合常数分别为6.48×104L/mol和1.38×105L/mol,热力学参数ΔH>0且ΔS>0,表明结合反应是自发进行的吸热反应,相互作用主要表现为疏水作用力。咖啡酸对胰脂肪酶的抑制类型为非竞争性抑制,抑制活性IC50为（0.88±0.07）mg/m L。四种金属离子（Cu2+、Ca2+、Fe3+、Fe2+）一定程度上增加结合常数和结合位点数,说明四种金属离子促进了咖啡酸与胰脂肪酶的结合。      

茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶活性的抑制作用

以湖南茯砖茶为原料通过热水浸提、树脂吸附分离得到茯砖茶多酚类物质,并采用酶动力学和荧光猝灭分析方法探讨了茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶的抑制作用。结果表明：茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶有抑制作用,半抑制浓度（IC50）为0.81 mg/mL,抑制类型为可逆非竞争性抑制,其抑制常数Ki为2.56 mg/mL。荧光光谱分析表明茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶具有荧光猝灭效应,与茯砖茶多酚类物质的结合可能造成了酶结构的改变,从而降低了酶的催化活性。     

苦瓜多糖对胰脂肪酶抑制作用的研究

研究测定苦瓜多糖在不同的反应条件下对胰脂肪酶的抑制率,探讨了浓度、pH、反应时间、反应温度等条件下苦瓜多糖对胰脂肪酶活性的影响。结果表明,苦瓜多糖浓度为30mg/mL,pH为7.5,反应时间为15min,反应温度为37℃时,对胰脂肪酶的抑制效果最佳。在此条件下,苦瓜多糖对胰脂肪酶半抑制浓度IC50为29.86mg/mL,抑制率为51.24%。抑制类型为非竞争性抑制作用,抑制常数Ki=21.62mg/mL。苦瓜多糖对脂肪酶具有明显的抑制作用,为新型减肥药物的开发提供了新的思路。     

苦荞麦多糖对胰脂肪酶抑制作用的研究

以三油酸甘油酯为底物,研究苦荞麦多糖在不同条件下对胰脂肪酶抑制作用的影响,确定其最佳抑制条件、抑制作用类型及抑制常数。结果表明,苦荞麦多糖对胰脂肪酶具有明显抑制作用,其半抑制浓度IC50为28.23mg/m L。多糖浓度为30mg/m L,反应时间为15min,p H为7.5,温度为37℃时抑制效果最佳,抑制率达到52.17%,为非竞争性抑制,抑制常数Ki=43.28mg/m L。通过紫外吸收光谱测定表明胰脂肪酶紫外吸收光谱最大吸收波长发生红移,显示苦荞麦多糖是通过改变胰脂肪酶的构象,致使其酶催化活性受到抑制。苦荞麦多糖可以作为植物源的胰脂肪酶抑制剂发挥减肥因子的作用。     

枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用

采用酶动力学法探讨枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用。采用紫外、荧光和红外光谱研究枸杞叶黄酮与胰脂肪酶相互作用的机理。结果表明:枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性有抑制作用,半抑制浓度(IC50)为(0.910±0.008) mg/mL,抑制类型为可逆非竞争抑制,抑制常数为6.04 mg/mL。紫外和荧光光谱显示:枸杞叶黄酮能使胰脂肪酶芳香氨基酸暴露,微环境和酶构象改变,内源荧光猝灭,猝灭类型为动态猝灭为主的混合型猝灭。热力学参数显示:枸杞叶黄酮与胰脂肪酶的相互作用力主要为疏水相互作用。红外光谱显示:枸杞叶黄酮对酶蛋白二级结构的影响,主要表现为复合物结构变得有序化,β-折叠向α-螺旋的转化。枸杞叶黄酮通过改变胰脂肪酶结构和微环境,进而抑制胰脂肪酶活性。     

黑木耳多糖对胰脂肪酶活性的抑制作用

目的:以月桂酸4-硝基苯酯为底物,考察黑木耳多糖对胰脂肪酶活性的抑制作用,确定最佳抑制条件、抑制类型及抑制常数。方法:采用水提醇沉的方法制备黑木耳多糖,阴离子交换树脂分离多糖,考察不同反应条件（浓度、p H、温度、时间）下黑木耳多糖各组分对胰脂肪酶活性的抑制效果;通过紫外吸收光谱研究黑木耳多糖与胰脂肪酶构象之间的关系;测定不同浓度底物时的反应吸光度值,初步确定黑木耳多糖对胰脂肪酶抑制作用的机理。结果:分离获得6个组分,其中中性多糖组分a对胰脂肪酶抑制效果较好。当p H为7.5、温度37℃、反应时间为60 min时抑制效果最佳,此时中性多糖组分a抑制率最高达到46.93%;反应类型为非竞争性抑制,米氏常数Km为17.68 mg/m L,最大反应速率V_max为1.43μmol/min,抑制常数Ki为30.32 mg/m L。通过紫外吸收光谱测定,胰脂肪酶最大吸收波长发生红移,说明黑木耳多糖改变了胰脂肪酶的构象,致使其酶催化活性受到抑制。结论:黑木耳多糖对胰脂肪酶活性具有抑制作用,表明黑木耳多糖降血脂作用可能与胰脂肪酶的活性抑制有关,为降血脂功能性产品的开发奠定理论基础。      

文冠果壳皂苷抑制胰脂肪酶活性的研究

本文旨在确定文冠果壳皂苷作为减肥因子对胰脂肪酶活性的作用效果。通过对胰脂肪酶反应条件(pH、反应时间和反应物加入顺序)的摸索,确定AB-8大孔树脂纯化的文冠果壳皂苷对胰脂肪酶活性的影响,并通过紫外吸收光谱(200~340 nm)、荧光光谱(激发波长290 nm,扫描波长300~450 nm)确定文冠果壳皂苷对胰脂肪酶作用的机理。研究结果表明,文冠果壳皂苷对胰脂肪酶抑制率高达87.5%,最佳反应体系pH 7.4,反应时间15 min,反应物加入顺序为底物与文冠果壳皂苷预热后加入胰脂肪酶溶液反应。文冠果壳皂苷与胰脂肪酶作用后,改变了胰脂肪酶中发光氨基酸(Trp、Tyr)所在微环境,胰脂肪酶分子结构和构象发生变化,导致胰脂肪酶紫外吸收光谱最大吸收波长红移和荧光强度降低,胰脂肪酶活性抑制。文冠果壳皂苷可通过抑制胰脂肪酶发挥减肥因子的作用。     

黄酮“落新妇苷”对胰脂肪酶抑制作用研究

通过研究落新妇苷对胰脂肪酶的抑制活性,进一步探索其调节脂肪代谢的可能原因。结果表明,落新妇苷对胰脂肪酶有一定的抑制作用,半抑制率浓度为105μmol/L,最大抑制率为56.3%;且抑制效果随二者作用时间延长而增强。酶动力学特征研究表明,落新妇苷是胰脂肪酶非竞争性抑制剂,不改变其与底物的亲和程度,但使最大反应速度减小。荧光光谱滴定法表明落新妇苷会使胰脂肪酶内源荧光淬灭,并使其最大发射波长红移,二者结合常数lg Ka为5.50,结合位点数n为1.17。     

莽草酸对脂肪酶抑制作用的研究

研究莽草酸对脂肪酶的抑制作用。结合酶动力学方法和荧光光谱法,研究了莽草酸对脂肪酶的抑制动力学和抑制机理。研究结果表明,当脂肪酶浓度为1.00 mg/mL时,反应时间为15 min,莽草酸对脂肪酶的半抑制浓度(IC_(50))为3.16mg/mL,最适温度由37℃增大到41℃,抑制类型为混合型脂肪酶抑制剂,抑制常数为Ki=4.30mg/m L,Ki’=3.28mg/mL。在发射波长为300～450nm,激发波长为240～300nm范围内,扫描得出的荧光光谱图可以看出,莽草酸对脂肪酶有荧光淬灭效应,能使酶的内源生色基团(Tyr、Trp、Phe)由蛋白质内部的疏水区向亲水环境暴露,从而改变酶的结构,抑制其催化效果。研究莽草酸对脂肪酶的抑制特性,为开发减肥药物和保健食品提供了思路和依据,具有潜在的应用价值。     

粉碎粒径对油菜蜂花粉在体外模拟消化中多酚含量及发酵产酸的影响

通过体外模拟方式,对比4种不同粉碎粒径的油菜蜂花粉在消化各阶段的多酚溶出量、消化完成后多酚残留量,同时结合高效液相色谱分析残留多酚组分及其利用肠道菌群发酵产酸能力。结果表明,在体外模拟消化过程中蜂花粉多酚溶出量随粉碎粒径的减小而增加,粉碎提高了溶出多酚在肠液消化过程中的保留率。经消化完成后,蜂花粉多酚残留量随着粉碎粒径的减小而增加,同时粉碎对其残留多酚的组分有一定影响。在体外模拟后肠发酵产酸过程,粉碎粒径越小发酵液pH值越低,产生的乙酸、丙酸、丁酸含量越高,发酵产酸特性越好。研究表明,在蜂花粉多酚的体外消化特性上破壁优于未破壁,为蜂花粉深加工产品的开发与应用提供理论依据。     

油菜蜂花粉加工副产物多酚对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究油菜蜂花粉加工副产物中多酚对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法油菜蜂花粉加工副产物经乙醇提取得到粗提物,通过大孔树脂分离纯化得到20%,35%,50%,65%,80%和95%组分样品,选取总酚含量较高的50%组分及多酚粗提物进行急性肝损伤保护的研究。经腹腔注射CCl_4建立小鼠急性肝损伤模型,分别灌胃不同剂量的多酚粗提物、50%组份样品,以水飞蓟素作为阳性对照,检测血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,观察肝组织病理学变化。结果 50%组分高剂量组(300 mg/(kg·bw))可以显著抑制小鼠血清中由CCl_4造成的ALT/AST活性升高(P0.05),明显提高肝组织中SOD、GSH活性,并且显著降低组织中MDA的含量(P0.05),此外,从肝组织病理学结果来看,50%组分高剂量组可以减轻因CCl4造成的肝组织损伤,有效减少炎症因子的产生。然而多酚粗提物低、高剂量组及50%组分低剂量组在某些指标的检测中并未表现出显著的保护效果。结论油菜蜂花粉加工副产物经乙醇提取后多酚粗提物,采用AB-8大孔树脂分离纯化后的50%组分高剂量组样品对CCl_4所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

木瓜皮多酚和黄酮提取工艺优化及酪氨酸酶与胰脂肪酶抑制活性研究

以木瓜皮为原料,研究了木瓜皮多酚和黄酮的提取工艺及抗氧化、酪氨酸酶和胰脂肪酶抑制活性。在单因素实验基础上采用正交试验研究超声温度、超声时间、乙醇浓度、料液比对木瓜皮多酚和黄酮含量的影响,并测定木瓜皮对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力以及对酪氨酸酶和胰脂肪酶的抑制活性。结果表明,木瓜皮多酚和黄酮的最佳提取条件为:超声温度40 ℃,超声时间60 min,乙醇浓度60%,料液比1:25 g/mL,在此条件下多酚和黄酮含量分别为（82.00±0.65）mg/g和（162.76±2.82）mg/g。抗氧化活性实验结果表明,木瓜皮提取物对DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别为（94.79%±0.10%）和（96.94%±0.23%）。抑制酶活性实验结果表明,木瓜皮提取物对分别以L-Tyr和L-Dopa为底物的酪氨酸酶的抑制率为（83.33%±6.80%）和（67.12%±0.32%）,对胰脂肪酶的抑制率为（82.78%±1.28%）,说明木瓜皮具有较强的抗氧化能力、酪氨酸酶及胰脂肪酶抑制活性。     

桑叶多糖的化学组成及其对胰脂肪酶的抑制作用研究

将复合酶辅助热水提取所得的桑叶粗多糖依次进行脱蛋白和脱色处理后得到桑叶多糖,研究其化学组成和对胰脂肪酶的抑制作用及作用类型.结果 表明,桑叶多糖的总糖含量为58.28％,其单糖组成及摩尔比为甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸=8.61∶23.42∶4.23∶12.73∶1.31∶3....     

多指标评价果胶酶对油菜蜂花粉的破壁作用

为改善蜂花粉的破壁效果,采用果胶酶对油菜蜂花粉进行破壁处理。以pH值和温度为考察因素,蛋白分散指数、可溶性糖含量、显微镜分析、粒度分析等为评价指标,对破壁工艺进行优化。结果表明:果胶酶对油菜蜂花粉有一定的破壁作用,最佳破壁条件是pH值3.5,温度50℃。该条件下,蛋白分散指数为0.684 6;可溶性糖含量为24.86%;部分花粉粒萌发孔打开,花粉粒周围有小颗粒性物质出现;花粉孔洞面积增加,增加率为39.20%;花粉颗粒由孔洞率小的范围趋向孔洞率大的范围分布;花粉颗粒的粒径和花粉碎片的粒径都有减小的趋势,其中1μm以下粒径范围内的花粉碎片变化最为明显,增加了339.92%。     

纤维素酶对油菜蜂花粉的破壁作用

研究纤维素酶对油菜蜂花粉破壁的影响。通过单因素试验分别考察料液比、加酶量、酶解温度、酶解时间对油菜蜂花粉破壁的影响,以油菜蜂花粉破壁率和多糖提取率为指标,根据单因素试验结果设计正交试验,得出油菜蜂花粉的最佳破壁条件为料液比1:50(g/mL)、加酶量为1.75%、酶解温度47.5℃、酶解时间5.0h,此条件下的油菜蜂花粉的破壁率为85.72%,多糖提取率为18.85%。     

油菜蜂花粉多糖和黄酮的提取研究

对油菜蜂花粉多糖和总黄酮的提职工艺进行了研究.通过单因素和正交试验确定了油菜蜂花粉多糖和总黄酮的最佳提取工艺条件.结果表明:在温度为90℃、pH值为5、料水比1:8(m/V)时提取1.0h,油菜蜂花粉多糖得率为25.12%,提取率为81.55%;选用95%乙醇作为溶剂,料液比1:7(m/V),在70℃水浴中提取1.5 h,油菜蜂花粉总黄酮得率为3.32%,提取率为94.80%.本研究采用方法工艺简单,提取率高.     

柚皮素对胰脂肪酶抑制作用的研究

抑制胰脂肪酶的活性能够有效地减少肥胖的发生。该研究从酶学动力学、荧光猝灭和分子对接的不同角度研究柚皮素对胰脂肪酶的抑制作用。抑制酶活性试验结果表明,柚皮素以可逆竞争性方式抑制胰脂肪酶的活性,且半数抑制浓度为2.413 mmol/L。荧光猝灭试验结果显示,柚皮素与胰脂肪酶结合后酶的荧光被猝灭,胰脂肪酶的构象发生变化。分子对接结果显示,柚皮素与胰脂肪酶形成了酶-抑制剂复合物,阻止了酶和底物的结合,从而导致酶催化活性降低。     

胰脂肪酶特异性卵黄抗体对胰脂肪酶活性的抑制作用研究

肥胖对人类的健康构成了极大的危害,胰脂肪酶抑制剂由于可以有效地预防和治疗肥胖而受到了人们的广泛关注。本研究首次以胰脂肪酶为抗原制备了胰脂肪酶特异性卵黄抗体（L-Ig Y）,并分析了其对胰脂肪酶活性的抑制效果。结果表明,L-Ig Y可通过与胰脂肪酶的非竞争性结合发挥显著的酶活抑制作用（p<0.05）,计算得出其表观半抑制浓度（IC50）为168.62μg/m L。模拟胃液消化环境中10 min,L-Ig Y的活性几乎完全丧失,但是在模拟肠液中2 h,L-Ig Y的免疫活性仅下降了约20%,表明其有望作为一种潜在的胰脂肪酶抑制剂应用于肥胖的预防和治疗。      

对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶的抑制作用及机理

为探究对羟基肉桂酸乙酯的降脂活性,本文采用酶反应动力学和分子对接技术来研究对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶的抑制类型和抑制机理.抑制动力学结果表明,对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶表现为可逆竞争型抑制(半抑制浓度IC50为41.07μg/mL),其最大反应速率Vmax为2.61μmol/L·min,抑制常数Ki为114.35μg/...     

黑果枸杞花色苷提取物对胰脂肪酶活性的影响

目的:探究黑果枸杞花色苷提取物对胰脂肪酶活性的抑制作用。方法:提取黑果枸杞花色苷,采用分光光度法测定黑果枸杞花色苷提取物对胰脂肪酶的抑制活性;紫外光谱法和荧光光谱法研究黑果枸杞花色苷提取物与胰脂肪酶作用的特性。结果:黑果枸杞花色苷提取物对胰脂肪酶的活性具有一定的抑制作用,半抑制质量浓度为(2.84±0.45)mg/mL,抑制类型为可逆型竞争性抑制。紫外光谱和荧光光谱分析显示黑果枸杞花色苷提取物能使胰脂肪酶肽键C=O基团发生π→π*跃迁,α-螺旋含量降低,内源荧光发生猝灭。热力学参数显示黑果枸杞花色苷提取物与胰脂肪酶之间的作用力主要是氢键和范德华力。结论:黑果枸杞花色苷提取物能与胰脂肪酶相结合,进而抑制胰脂肪酶的活性。