烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选及培养基优化

以赤星病原菌Alternaria longipes为筛选指示菌,采用平板共培养初筛和发酵上清滤液复筛的方法,筛选了烟草赤星病拮抗芽胞杆菌3株。其中菌株K₁₁的菌体径向生长抑制率（PIRG）为63.64%,发酵上清滤液的PIRG值达67.44%。盆栽试验证明,该菌对烟草赤星病具有良好的拮抗能力。经鉴定菌株K₁₁为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。由单因素实验和正交实验优化得到了K₁₁菌株生物量较高的摇瓶发酵培养基配方：葡萄糖20.0 g/L,豆粕30.0 g/L,K₂HPO₄·3H₂O 1.0 g/L,MgSO₄·7H₂O 0.1 g/L。优化后生防菌株K₁₁的生物量比对照提高6.5倍,生物量高达1.28×10¹⁰ CFU/mL,芽胞形成率在95%以上。     

烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选、鉴定及促生防病作用

为获得对烟草赤星病菌具有较好生防效果的芽胞杆菌,从福建、山东、云南等地烟草叶片中分离得到187株菌株,对烟草种子进行浸种处理,通过测定发芽率筛选到能够促进种子萌发的6株菌株;利用平板拮抗法、离体叶片接种法、温室生测发现FJ1、FJ1-6能促进烟草生长且对赤星病防效较好;通过生理生化和分子生物学鉴定,FJ1为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）,FJ1-6为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。防病特性研究发现,两菌株含有参与脂肽类抗生素Surfactin、Fengycin和Iturin合成的基因且脂肽类粗提物对赤星病菌丝生长有明显的抑制作用,抑制率分别为56.9%、65.0%。综上,FJ1、FJ1-6具有优良的促生防病特性及显著的促种子萌发效应,可应用于烟草育苗及赤星病的防治。     

一株蜡样芽胞杆菌的鉴定及鉴别诊断

我室接收蜡样芽胞杆菌菌种一株,经我室鉴定为蜡样芽胞杆菌７型,现报告如下。     

一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜质分析

从养猪场健康成年猪粪便中分离、筛选出1株芽孢杆菌。经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16S rDNA序列分析相似度为98.99%,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,并进行了该枯草芽孢杆菌与肠道细菌在体外的生长竞争实验。结果表明:肠道厌氧菌群中的双歧杆菌、乳酸杆菌和拟杆菌数量均有不同程度增多,而肠杆菌、肠球菌等需氧菌群数量则有所减少。证明该菌株能促进肠道厌氧菌群的生长,而抑制需氧菌群的生长。可见,枯草芽孢杆菌能起到维持肠道微生态平衡的作用,是一株比较理想的潜在益生菌。     

品质异常全脂灭菌乳中芽胞杆菌的分离鉴定

为了解品质异常全脂灭菌乳中是否存在芽胞杆菌,本试验将南疆某乳品企业提供的味道微苦,有蛋白凝集、沉淀,微涨袋的袋装全脂灭菌乳,于超净工作台内分装到250 mL锥形瓶内,80℃水浴20 min,稀释5个梯度后分别接种于锰盐(55℃)、普通(37℃)营养琼脂培养基培养24～48 h,嗜冷菌计数培养基(5℃)培养5～7 d培养...     

枯草芽胞杆菌在油菜根茎叶的定殖动态和生防作用研究

采用常规方法跟踪枯草芽胞杆菌Tu-100在缩影系统油菜根际的定殖情况。Tu-100在油菜不同根段部位的定殖密度从上到下呈现了逐渐递减的规律。随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8cm以外的根区几乎检测不到接种菌。在油菜播种后3d,定殖密度可达最高水平（8．3×10^5个／g）,然后急速下降,30d后保持相对稳定的较低水平（1．3×10^2个／g）。在油菜三片真叶时喷雾接种一次,20d后,在茎和叶上不能检测到所接种的Tu-100,并且抗菌核病的能力也逐渐减弱。     

食用香料添加剂-桂粉中蜡样芽胞杆菌的分离与鉴定

从送检的待出口食用香料添加剂-桂粉中分离一株出疑似蜡样芽胞杆菌。经细菌形态学观察、葡萄糖发酵试验、硝酸盐还原试验、V—P试验、L-酪氨酸分解试验、溶菌酶试验、卵磷脂酶试验、动力试验、根状生长试验、溶血试验、蛋白质结晶毒素试验等证实分离菌株为蜡样芽胞。     

一株枯草芽孢杆菌的分离及培养基的优化

从土壤中分离出1株芽孢杆菌。经培养特征、形态观察、生理生化试验,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,并采用单因素及正交实验法对枯草芽孢杆菌的培养基进行优化,优化后的培养基为葡萄糖0.5%、玉米淀粉过程污水1.5%、玉米浆1.5%和Mg SO40.5%。     

1株食源性蜡样芽胞杆菌分离株的分子特征毒性及耐药性研究

目的 研究株蜡样芽胞杆菌SCY分离株的毒力和耐药性。方法 使用选择性培养基从银川市某餐厅鱼肉菜肴中培养分离获得蜡样芽胞杆菌SCY分离株,经23S rRNA基因PCR测序鉴定后,通过二代全基因组测序技术分析SCY分离株的基因组特征,进而分别采用免疫组化技术和药敏纸片实验研究SCY分离株的毒性和耐药性。结果 SCY分离株的基因组大小为5.82 Mb,编码基因个数为5 767,编码区总长度占全基因组的85.50%。SCY分离株基因组中共含有11个基因岛、16个CRISPR和5个前噬菌体;其中,SCY编码基因分别在PHI和VFDB毒力因子数据库中注释到了14个和62个毒力基因（Identiy>80,Evalue<0.05）,在CARD耐药数据库中注释到了215个耐药基因（Best Hit evalue<0.05）。小鼠肠道组织切片免疫组化结果表明,炎性因子IL-1β、CASP1和Nlrp3的表达水平发生差异显著性上调。22种细菌抗生素药敏纸片试验结果显示,SCY分离株对氯霉素、克林霉素等高度敏感,对四环素、头孢唑啉、头孢哌酮、氨苄青霉素表现为中介,对青霉素、苯唑西林、哌拉西林、杆菌肽、头孢他啶等10种抗生素表现为耐药,SCY分离株多重耐药情况较为严重。结论 本研究发现的SCY分离株属于肠毒株,携带多种肠毒素毒力基因,且具有典型的多重耐药特征。研究结果为揭示蜡样芽胞杆菌分离株的致病机制提供参考依据。     

烟草根结线虫病生防菌株TB-68的鉴定及室内防效测定

为寻求新的烟草根结线虫生防资源,通过形态学特征和16S rDNA分析对前期分离到的1株根结线虫生防细菌TB-68菌株进行种类鉴定,并通过室内离体活性测定和盆栽试验研究了TB-68菌株对烟草根结线虫病的防治效果.鉴定和研究结果显示,TB-68菌株为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),该菌株发酵滤液原...     

西藏拉萨产弹性蛋白酶枯草芽孢杆菌的分离及鉴定

对拉萨城关区屠宰场附近收集的18份土壤样品,经过平板初筛和摇瓶发酵复筛,得到一株水解弹性蛋白能力最高的菌株XZ1,其酶活为27U/m L。同时对XZ1进行生理生化鉴定和16S r DNA分子遗传学分析,最终鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

一株产抑菌物质的蜡样芽胞杆菌的鉴定及其抑菌物质性质

从酱渣中分离到一株产抑菌物质的新菌株,暂命名为菌株B。研究表明,该菌株经碱中和后的无细胞发酵液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有抑制作用;其发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后,仍然有抑菌活性;双缩脲和茚三酮实验表明,抗菌活性物质为肽类物质。生理生化实验、16S rDNA序列比对及系统发育分析表明,菌株B为蜡样芽胞杆菌,其生长和抑菌最适培养基为NB培养基,在pH 7.0的NB培养液中培养40h其抑菌活性达到最大。     

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

16S与gyrB基因联合建树快速鉴定一株解淀粉芽胞杆菌

在保守序列高度相似的细菌鉴定中,单独使用16S rDNA/RNA序列进行比对和构建进化树通常无法准确鉴定到种,需要增加测序基因数并对多基因进行分析。为实现快速鉴定,课题组对16S与gyrB基因联合建树的方法进行了研究,将土壤中筛选的1株具有淀粉水解酶活性的杆菌HX2016004,分别用通用引物扩增16S和gyrB基因并测序,在Genbank进行序列比对后,选择各菌种保藏中心具有相似16S和gyrB基因的菌株,取其16S和gyrB基因序列,采用Paup^*4. 0构建进化树。使用16S与gyrB拼接序列构建的进化树中属于同一种的菌株聚合在1枝,分类结构准确,其中HX2016004与解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)聚合在1枝,鉴定为解淀粉芽胞杆菌。经生理生化试验验证,该菌株与解淀粉芽胞杆菌特征完全一致,使用16S和gyrB基因联合建树得到的鉴定结果准确且快速简便。通过对Genbank和EZBiocloud已知序列菌株的分析,16S和gyrB基因联合建树的方法普遍适用于解淀粉芽胞杆菌的鉴定。     

富铬枯草芽胞杆菌培养条件的探究

通过单因子试验和正交试验对富铬枯草芽胞杆菌的培养条件：培养温度、培养时间、无机铬水平、接种量和初始pH值进行了优化,研究了各因素对枯草芽胞杆菌数量和有机铬转化率的影响。结果表明：在初始pH值7.0、转速200 r/min、接种量3％、培养温度37℃、培养时间36 h和无机铬水平32.5 μg/g条件下,枯草芽胞杆菌数量的对数值为8.84,枯草芽胞杆菌的生物量为1.018 g/L,有机铬水平可达1 246.85 μg/g。     

虾酱源枯草芽胞杆菌JZXJ-7对组胺中毒小鼠的保护作用

为探明虾酱源枯草芽胞杆菌JZXJ-7(Bacillus subtilis JZXJ-7,Bs-JZXJ-7)对组胺中毒小鼠的保护作用,采用模拟胃肠环境,研究Bs-JZXJ-7抗胃肠液消化特性;构建组胺中毒动物模型,检测C57BL/6J小鼠经Bs-JZXJ-7干预前后的疾病活动指数(disease activity index, DAI)、脏器系数、病理改变、肠黏膜紧密连接蛋白(胞质紧密连接蛋白-1和闭合蛋白)表达、肠组织细胞因子[白介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α]和抗氧化功能(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、总抗氧化和丙二醛)。体外研究结果显示,Bs-JZXJ-7经胃肠液孵育,存活率仍有91.53%,具有良好的抗蛋白酶酶解和耐酸碱腐蚀能力。体内研究表明,Bs-JZXJ-7能够显著(P<0.05)降低小鼠DAI值、缓解脾脏和肠组织肿大,减轻病理损伤。Bs-JZXJ-7还显著(P<0.05)上调肠黏膜紧密连接蛋白表达量,修复肠屏障功能,抑制细胞因子介导的结肠炎症和抗氧化系统调控的氧化应激。Bs-JZXJ-7改善了组胺中毒造成的机...     

组合策略提高普鲁兰酶在枯草芽胞杆菌中的表达

普鲁兰酶(pullulanase)可催化支链淀粉、普鲁兰糖等多糖大分子中的α-1,6糖苷键水解,是最重要的淀粉酶之一.为提高普鲁兰酶发酵水平,该研究将Bacillus deramificans的普鲁兰酶表达于枯草芽胞杆菌WB600.首先考察了天然组成型、合成组成型、诱导型和自诱导型等强启动子对产酶的影响.结果 显示,合...     

一株葡聚糖酶产生菌的分离选育及鉴定

利用葡聚糖平板初筛,三角摇瓶复筛,从土壤样品中中分离得到一株葡聚糖酶高产菌株P5,发酵酶活力可以达到2.5U/mL。菌株呈长杆状、革兰氏染色阳性、产芽孢;生理生化实验结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌最为相近;16S rDNA基因序列包含1510个碱基对,同源性分析显示该菌株与枯草芽孢杆菌菌株最为相近,最高相似性为99%,基于16S rDNA基因序列的系统发育分析显示,该菌株与枯草芽孢杆菌菌株CD-6及YPM8的亲缘关系最近,根据以上多相分类结果鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

一株黄曲霉拮抗细菌的分离筛选及鉴定

通过稀释分离法从土壤中分离纯化出一株具有黄曲霉拮抗活性的菌株。该菌株的次生代谢产物具有抑制黄曲霉生长的效果,抑菌率可达63%。该菌对多种病原真菌抑制效果明显,具有广谱抑菌效果。根据形态学观察、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

一蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的表型与基因型

目的对2003年发生在云南的一起蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒案例中的分离株YN0303进行表型和基因型分析研究。方法采用16S r DNA序列分析和16S/23S r DNA ITS特征图谱分析结合形态、生理生化和基因型进行菌种鉴定;PCR检测呕吐毒素和肠毒素合成相关基因,高效液相和质谱联用(HPLC-MS)化学定量分析呕吐毒素合成情况,测试部分生理生化特性和生长温度范围,进行了pan C分型和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)。结果确认了该菌株确为蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus,虽然该食物中毒是典型的呕吐型案例,但是发现该分离株呕吐毒素相关合成基因ces呈阴性,呕吐毒素化学定量分析结果为阴性;其生理生化特性(水杨苷发酵、淀粉水解和溶血特性)与典型呕吐型菌株也不相同。pan C分型并非呕吐型蜡样芽胞杆菌所属的Ⅲ型,而是属于细胞毒性强的IV型,而且其肠毒素基因hbl、nhe和cyt K2也均呈阳性;多位点序列分析显示该菌是一个新型别ST753,是区域性相对独立进化菌株。结论在该呕吐型食物中毒案例中可能有多个蜡样芽胞杆菌参与,该分离株YN0303并非主要致病株—呕吐型菌株,但可能作为细胞毒性强的菌株参与了共感染。