补肾活血汤对雷公藤甲素致卵巢储备功能下降秀丽隐杆线虫生育力的影响

目的:探讨补肾活血汤对雷公藤甲素诱导的卵巢储备功能下降秀丽隐杆线虫生育力的作用及其机制,以及秀丽隐杆线虫在生育力保护类药物功能筛选和早期评价中的应用价值。方法:将年轻成虫期秀丽隐杆线虫随机分为空白组、雷公藤甲素模型组和补肾活血汤治疗组(62.5、125、250 mg/ml)。雷公藤甲素构建秀丽隐杆线虫卵巢储备功能下降模型,补肾活血汤处理24、48和72 h后,统计后代数目,未受精卵母细胞数目,子宫内受精卵数目,有丝分裂区细胞数目,凋亡细胞和卵母细胞数目;RT-PCR测定细胞凋亡通路相关基因的mRNA表达水平。结果:与空白组比较,雷公藤甲素0.1μg/ml模型组秀丽隐杆线虫后代数目、子宫内受精卵数目、有丝分裂区细胞数目、卵母细胞数目显著减少,未受精卵母细胞和凋亡细胞数目显著升高,ced-3基因表达水平显著升高和ced-9基因表达水平显著下降。补肾活血汤处理卵巢储备功能下降线虫72 h后,与雷公藤甲素模型组相比,补肾活血汤250 mg/ml组线虫后代数目、子宫内受精卵数目、有丝分裂区细胞数目、卵母细胞数目显著增多,未受精卵母细胞和凋亡细胞数目显著降低,ced-3基因表达水平显著降低和ced-9基因表达水平显著增高。结论:补肾活血汤对雷公藤甲素致秀丽隐杆线虫卵巢储备功能下降有显著治疗作用,通过促进不同发育阶段卵细胞的发育而提高生育力,生殖腺细胞凋亡关键基因表达水平的改变是其发挥作用的重要机制之一。秀丽隐杆线虫可用于生育力保护类药物的功能筛选和早期评价。     

六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命及daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达的影响

目的：观察六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命、生殖力、运动能力的影响并探讨其可能的分子机制。方法：秀丽隐杆线虫分为空白对照组、六味地黄丸方高、中、低剂量组（160、80、40mg?mL^-1）。寿命实验观察各组线虫平均寿命;生殖能力测试中,计数各组总子代数目;运动能力实验测试各组线虫20s内身体弯曲的次数。实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）方法检测空白组和六味地黄丸方中剂量组的daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达变化。结果：与空白组比较,六味地黄丸方中、低剂量组均能延长线虫的平均寿命（P<0.01）,以中剂量组更为显著,并可明显提高线虫生殖高峰期及末期的生殖能力。与空白组比较,各剂量组均使线虫运动能力明显减缓（P<0.01）;用药组daf-2 mRNA表达明显下调（P<0.05）;daf-16 mRNA表达明显上调（P<0.05）。结论：六味地黄丸方能明显延长秀丽隐杆线虫寿命,其机制可能与下调daf-2基因和上调daf-16基因表达有关。     

知母须根总皂苷纯化工艺及其延长秀丽隐杆线虫寿命的作用机制研究

目的考察知母须根总皂苷富集纯化的最佳工艺,并对其延长秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)寿命的作用及机制进行研究。方法以知母须根总皂苷得率、总皂苷含量等为指标,考察大孔树脂型号、上样液浓度、吸附流速、上样体积、洗脱溶剂浓度及体积对富集结果的影响。以秀丽隐杆线虫为实验模型,以0.5、1.0、2.0 mg·mL~(-1)知母须根总皂苷进行干预,测定秀丽隐杆线虫寿命、后代数目、运动能力;采用qPCR法测定知母须根总皂苷(1.0 mg·mL~(-1))干预后秀丽隐杆线虫体内daf-16、daf-2、sod-3、ctl-2等基因的表达情况。结果最佳树脂型号为AB-8,上样液浓度为0.2 g·mL~(-1),吸附流速及洗脱流速均为1.0 mL·min~(-1),洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为3倍柱体积,所富集的总皂苷纯度50%。与空白对照组比较,1.0 mg·mL~(-1)浓度的知母须根总皂苷可显著延长秀丽隐杆线虫的平均寿命,提高线虫的半数致死天数(P0.05)、产卵数目及运动频率(P0.01);显著提高线虫体内sod-3、daf-16和ctl-2基因的表达量(P0.01,P0.001),降低daf-2基因的表达量(P0.05)。结论优选的工艺稳定可行,可用于知母须根总皂苷的富集纯化;知母须根总皂苷能延长秀丽隐杆线虫的寿命,其机制可能与Insulin/IGF-1信号通路有关。     

滋肾育胎丸对免疫性不孕模型大鼠卵母细胞生物学行为的调节作用

目的探讨滋肾育胎丸对抗精子抗体(As Ab)阳性的不孕大鼠卵母细胞的干预作用。方法采用主动免疫建立As Ab阳性的免疫性不孕模型。将100只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组及滋肾育胎丸低、中、高剂量组(简称中药低、中、高剂量组),每组20只。造模22天开始灌胃给药,模型组给予5 m L/kg生理盐水灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予0.075、0.100、0.150 g/m L滋肾育胎丸灌胃,每天1次,至36天。分别在造模21天及36天采用ELISA法测定As Ab和转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)水平。处死大鼠后取卵母细胞,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot分别检测TGF-βmRNA及其蛋白表达水平;采用流式细胞学(FCM)和末端终未标记(TUNEL)法测定卵母细胞凋亡率;采用细胞计数-8法(CCK-8)及5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,Ed U)检测卵母细胞增殖水平;采用划痕实验及侵袭小室(Transwell)测定卵母细胞迁移与侵袭能力。结果与空白对照组比较,模型组卵母细胞凋亡增加,细胞增殖减少,迁移与侵袭能力减弱,TGF-βmRNA及其蛋白表达水平显著下调(P0.05);与模型组比较,中药高剂量组卵母细胞凋亡减少,细胞增殖增加,迁移与侵袭能力增强,TGF-βmRNA及其蛋白表达水平显著上调(均P0.05);且中药高剂量组作用明显优于中药低、中剂量组(P0.05)。结论应用高剂量滋肾育胎丸干预免疫性不孕大鼠可明显上调其卵母细胞TGF-β水平,改善卵母细胞功能。     

雷公藤甲素对模式生物雄性秀丽隐杆线虫的生殖毒性作用

目的研究中药雷公藤的主要成分之一雷公藤甲素的雄性生殖毒性及其作用机制。方法将L4期him-5雄虫在0.02、0.2、2.0 mg/L的雷公藤甲素中处理48 h。应用杂交试验观察雷公藤甲素对雄虫生育力的作用,通过观察精细胞形态发育、精细胞活化、精子运动能力,并应用实时荧光定量PCR检测精子发生相关基因的mRNA表达水平,探讨雷公藤甲素雄性生殖毒性的作用机制。结果雷公藤甲素处理48 h后,与溶剂对照组比较,2.0 mg/L雷公藤甲素组线虫后代数目显著减少,0.2、2.0 mg/L雷公藤甲素组线虫精细胞直径和截面积均显著降低,精子活化率显著降低、活动精子百分率显著下降。spe-10在0.02~2.0 mg/L雷公藤甲素组、spe-15在0.2、2.0 mg/L雷公藤甲素组、fer-1和folt-1在2.0 mg/L雷公藤甲素组均出现表达水平下调的现象。结论雷公藤甲素通过抑制him-5雄虫精子发生通路相关基因的表达水平,抑制精细胞形态发育和精子的形态和功能发育,降低him-5雄虫的生育力,提示精子发生损伤是雷公藤甲素发挥生殖毒性作用的重要途径之一。     

马鹿角对秀丽隐杆线虫衰老的影响及抗氧化机制研究

目的:探究马鹿角水提物对秀丽隐杆线虫衰老的影响及可能的抗氧化作用机制。方法:将秀丽隐杆线虫随机分为正常对照组和鹿角水提物1 mg/ml组。观察马鹿角水提物处理后野生型线虫(N2)和突变体线虫(eat-2、daf-2、clk-1)氧化应激条件下存活时间以及野生型线虫(N2)的运动能力、生殖能力和寿命,通过qPCR测定相关抗氧化基因的表达水平。结果:与空白对照组比较,马鹿角水提物1 mg/ml组线虫(N2、eat-2、daf-2)氧化应激条件下的存活时间明显延长(P0.05或P0.01),野生型线虫(N2)的运动能力和生殖能力明显提高(P0.05),但线粒体信号通路突变体线虫clk-1氧化应激条件下的存活时间和寿命无显著差异(P0.01),N2线虫基因gst-4、gst-7、sod-3和hsp16.2表达水平显著增高(P0.01)。结论:马鹿角水提物具有显著的体内抗氧化生物活性,能够延缓线虫衰老,其作用机理可能为通过激活线粒体信号通路,上调相关抗氧化基因表达水平,增强线虫抗氧化应激能力,延缓线虫衰老。     

黄连水提物对秀丽隐杆线虫毒性效应评价

目的评价不同质量浓度黄连水提物对秀丽隐杆线虫的毒性效应。方法制备黄连水提物,以秀丽隐杆线虫为模式生物,通过测定不同质量浓度的黄连水提物对秀丽隐杆线虫死亡率、最长寿命与半数致死时间、个体发育、产卵数和运动行为的影响,评价黄连水提物对秀丽隐杆线虫的毒性效应。结果与对照组相比,黄连水提物0.5、1.0、2.5 mg/mL可使秀丽隐杆线虫的死亡率显著提高(P0.01),最长寿命与半数致死时间显著降低(P0.01);在个体发育方面,黄连水提物1.0、2.5 mg/mL能显著抑制线虫生长(P0.01);生殖行为方面,3个质量浓度的黄连水提物均能显著降低秀丽隐杆线虫产卵数(P0.001),且具有一定的浓度依赖性;在运动行为方面,3个质量浓度的黄连水提物均能显著降低秀丽隐杆线虫头部摆动频率(P0.01),黄连水提物0.5、1.0 mg/mL组线虫身体弯曲频率无显著性差异,黄连水提物2.5 mg/mL组线虫身体弯曲频率极显著降低(P0.01);3个质量浓度的黄连水提物组线虫向前摆动、向后摆动和Omega/U摆动频率均无显著性差异。结论黄连水提物对秀丽隐杆线虫具有明显的毒性作用,为以秀丽隐杆线虫为模式生物评价黄连不同炮制品毒性提供了依据,为中药毒性的生物评价提供了新的思路和方法。     

补肾抗衰汤影响秀丽隐杆线虫衰老的机制研究

目的:探讨补肾抗衰汤对秀丽隐杆线虫衰老的影响。方法:观察野生型N2与daf-2、daf-16突变体线虫在不同浓度(50%、75%与100%)补肾抗衰汤干预下寿命变化,并分析补肾抗衰汤干预下线虫daf-2与daf-16基因表达的变化。结果:高浓度补肾抗衰汤干预可以显著延长N2、daf-2、daf-16突变体线虫的寿命(P<0.01);增加daf-16的基因表达并降低daf-2的基因表达。结论:高浓度补肾抗衰汤干预通过影响daf-2与daf-16基因表达延缓秀丽线虫的衰老。     

滋肾育胎丸对滋养细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的探讨中成药滋肾育胎丸对培养的滋养细胞凋亡的影响及其机制。方法酶解法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,培养原代滋养细胞。将体外培养的滋养细胞分为正常对照组、缺氧环境组、低氧环境下不同浓度滋肾育胎丸组。利用流式细胞术(FCM)检测滋养细胞凋亡情况。Western blot法检测体外培养的滋养细胞Fas/FasL蛋白表达量。结果低氧环境组细胞凋亡率较正常组显著增高(P<0.05);低氧环境组与低浓度滋肾育胎丸组细胞凋亡率比较无显著性差异,中、高浓度滋肾育胎丸组细胞凋亡明显低于低氧环境组(P均<0.05)。低氧环境组较正常组FasL蛋白表达增强,较中、高浓度滋肾育胎丸组FasL蛋白表达减少。结论低氧环境可诱导体外培养的滋养细胞凋亡,滋肾育胎丸呈剂量依赖性抑制低氧环境诱导的滋养细胞凋亡,这种作用的机制可能是通过促使滋养细胞下调FasL蛋白表达实现的。     

滋肾育胎丸治疗黄体不健性月经失调临床观察

目的:根据中医"异病同治"的观点,探讨滋肾育胎丸治疗黄体不健性月经失调的临床疗效及作用机理。方法:采用前瞻性随机对照,通过分析治疗前后临床症状、月经情况、内分泌指标、基础体温和子宫内膜的变化,对比滋肾育胎丸与醋酸甲羟孕酮治疗黄体不健性月经失调的临床疗效。结果:滋肾育胎丸治疗黄体不健性月经失调治愈率达70%,有效率96.7%;而西药组治愈率为43.3%,有效率为86.7%。两组比较有显著性差异(P<0.05)。滋肾育胎丸可使孕激素水平上升,调整雌、孕激素之动态平衡,从而促进卵泡发育及排卵,使黄体期延长,月经正常。结论:滋肾育胎丸能滋补肾阴肾阳,健脾养血,益气培元,治疗黄体不健性月经失调疗效满意,体现了中医"异病同治"的观点。     

滋肾育胎丸联合黄体酮胶囊治疗先兆流产临床观察

目的：观察滋肾育胎丸联合黄体酮胶囊治疗先兆流产的疗效及对血清学指标的影响。方法：62例随机分为两组各31例,观察组用滋肾育胎丸及黄体酮胶囊治疗,对照组仅用黄体酮胶囊治疗。结果：治疗2周后观察组血清学指标、中医症状积分优于对照组（P<0.05）。不良反应两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。总有效率观察组高于对照组（P<0.05）。结论：滋肾育胎丸联合黄体酮胶囊治疗先兆流产能够增强疗效,且安全。     

黄连-吴茱萸不同比例配伍水提物对线虫的毒性效应评价

目的：评价不同比例黄连-吴茱萸配伍提取物对秀丽隐杆线虫的毒性效应。方法：以秀丽隐杆线虫为模式生物,制备不同比例黄连-吴茱萸配伍水提物,测定各水提物对秀丽隐杆线虫寿命、体长及运动行为的影响。每组30条线虫观察存活率,每天在相同时间观察线虫数量,以最后一条线虫死亡时间作为最长寿命;每组40条线虫观察体长,用Image J软件测量死亡线虫虚拟体长;每组30条线虫观察头尾摆动和身体弯曲频率,测定1 min内线虫头部摆动的次数（从一侧摆向另一侧再摆回来）和20 s内身体弯曲的次数（认为线虫相对于身体的长轴移动一个正弦周期的波长为1次身体弯曲）。结果：与黄连组比较,随吴茱萸相对比例增加,秀丽隐杆线虫的死亡率显著降低（P<0.01）;体长显著减少（P<0.01）;对秀丽隐杆线虫的运动行为没有明显的抑制作用。结论：吴茱萸在一定程度上能够降低黄连对秀丽隐杆线虫的毒性,延长其寿命;在生长发育和神经方面影响较小,本研究为黄连和吴茱萸的配伍与炮制减毒研究提供了新的方法。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

加味寿胎汤合滋肾育胎丸辅治早期先兆流产脾肾两虚型临床观察

目的：观察加味寿胎汤合滋肾育胎丸辅治早期先兆流产（TA）脾肾两虚型的效果。方法：68例按随机数字表法分为两组各34例。两组均用黄体酮治疗,观察组加用加味寿胎汤合滋肾育胎丸治疗。结果：总有效率观察组较对照组高（P<0.05）。治疗后性激素水平观察组优于对照组,中医证候积分、子宫动脉血流阻力指数（RI）及搏动指数（PI）观察组均较对照组低（P<0.05）。妊娠结局观察组优于对照组（P<0.05）。结论：加味寿胎汤合滋肾育胎丸辅治早期TA脾肾两虚型可提高疗效。     

滋肾育胎丸治疗先兆流产50例临床观察

目的:观察滋肾育胎丸对先兆流产的疗效.方法:2002年1月至2004年12月在本院就诊的先兆早期流产患者70例,应用滋肾育胎丸治疗23例,同时应用滋肾育胎丸和绒毛膜促性腺激素治疗27例.单用绒毛膜促性腺激素治疗20例.结果:滋肾育胎丸组、滋肾育胎丸和绒毛膜促性腺激素联合治疗组、绒毛膜促性腺激素治疗组有效率分别为86.96%、92.59%、85.00%,无显著统计差异(P＞0.05).结论:滋肾育胎丸治疗先兆流产有效、安全.     

嗣育保胎丸对溴隐亭诱导大鼠流产的影响

目的观察嗣育保胎丸对溴隐亭诱导大鼠流产的影响。方法受孕SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,黄体酮组(2 mg/kg),滋肾育胎丸组(1.5 g/kg),嗣育保胎丸高、中、低剂量组(7.2、3.6、1.8 g/kg)。妊娠第5天开始,各组黄体酮组大鼠隔日肌肉注射给药,其他组大鼠灌胃给药,连续7 d;妊娠第6~8天每只大鼠皮下注射溴隐亭0.25 mg,连续3 d,建立早期流产动物模型。妊娠第11天,检测大鼠流产率,利用放免法检测动物血清中P、PRL水平;大鼠静脉给予缩宫素,利用多导生理记录仪测定大鼠子宫平滑肌张力和收缩峰面积差。结果与模型组比较,嗣育保胎丸高、中剂量组大鼠流产率、子宫张力差值降低(P<0.05),P水平升高(P<0.05);嗣育保胎丸高剂量组PRL水平升高(P<0.05)。结论嗣育保胎能够逆转溴隐亭对PRL、P的降低作用,并抑制缩宫素引起的子宫平滑肌兴奋,对抗子宫平滑肌的紧张作用,对早期流产具有明显的保胎作用。     

间苯三酚联用黄体酮、滋肾育胎丸治疗先兆流产的临床观察

目的:观察间苯三酚联用黄体酮、滋肾育胎丸治疗先兆流产的临床效果。方法:选取150例先兆流产患者,将其分成对照组与观察组各75例,对照组给予间苯三酚联合滋肾育胎丸治疗,观察组给予间苯三酚联用黄体酮、滋肾育胎丸治疗,治疗后对比两组患者的临床效果。结果:观察组的总有效率(93.3%)明显高于对照组(76.0%),对比差异显著,有统计学意义(P0.05)。结论:间苯三酚联用黄体酮、滋肾育胎丸治疗先兆流产的疗效显著,安全性高,值得临床推广与应用。     

滋肾育胎丸联合针灸治疗卵巢储备功能减退临床观察

目的：观察滋肾育胎丸联合针灸治疗卵巢储备功能减退（DOR）的临床疗效。方法：60例按照随机数字表法分为两组各30例。两组均予以针灸治疗,观察组加用滋肾育胎丸治疗。结果：总有效率及抗苗勒氏管激素（AMH）水平观察组高于对照组（P<0.05）,黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）及主要症状积分、次要症状积分低于对照组（P<0.05）,治疗期间未见明显不良反应。结论：滋肾育胎丸联合针灸治疗DOR效果较好,且安全。     

滋肾育胎丸治疗先兆流产56例疗效观察

目的:观察滋肾育胎丸在治疗肾虚型早孕先兆流产的疗效和对孕酮的影响.方法:将符合标准本病患者107例随机分为治疗组56例及对照组51例,治疗组服用滋肾育胎丸,对照组服用黄体酮胶囊;服用至孕8周,观察血清P变化并进行疗效观察.结果:治疗组总有效率为82.1%,对照组为64.7%,两组比较,治疗组优于对照组(P<0.05),两组孕酮水平治疗后比治疗前均显著升高(P<0.05),两组治疗后比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:滋肾育胎丸能提高先兆流产患者孕酮水平,且疗效较好.     

滋肾育胎丸对肾虚-薄型大鼠内膜容受性因子整合素β3及EMX_2表达的影响

目的:探讨滋肾育胎丸对薄型大鼠胚胎着床期子宫内膜容受性的影响。方法:将42只雌性SD大鼠随机分为6组,分别为大鼠空白组,肾虚-薄型子宫内膜大鼠空白组,肾虚-薄型子宫内膜大鼠阿斯匹林组,肾虚-薄型子宫内膜大鼠雌激素组,肾虚-薄型子宫内膜大鼠滋肾育胎丸低、高剂量组。药物干预后,利用qRT-PCR法检测小鼠子宫内膜中整合素β3及EMX_2表达的表达。结果:造模组的ITGβ3基因的相对表达量较对照组、阿司匹林组、雌激素组、滋肾育胎丸高剂量组、低剂量组低(P0.05);滋肾育胎丸高剂量组的ITGβ3基因的相对表达量较其余各组高(P0.05),具有统计学差异。造模组的EMX_2基因相对表达量较其余各组明显增高,P0.05,具有统计学差异;滋肾育胎丸高剂量组的EMX_2基因相对表达量比其余各组的表达低,P0.05,具有统计学差异。结论:滋肾育胎丸可能通过上调整合素β3及下调EMX_2的表达,改善子宫内膜的容受性。