阿苯达唑对肝泡型包虫病患者外周血单个核细胞T-bet及GATA3 mRNA表达的影响及意义

目的 探讨阿苯达唑对肝泡型包虫病患者外周血单个核细胞中转录因子T-bet和GATA3mRNA表达的影响及意义.方法 回顾性分析2013年4月至11月新疆医科大学第一附属医院收治的55例受试者的临床资料.其中肝泡型包虫病患者服用阿苯达唑15例,纳入药物组;肝泡型包虫病首治患者14例,纳入肝泡型包虫病组;健康志愿者26例,纳入健康志愿者组.药物组患者口服片剂阿苯达唑10 mg/(kg ·d),用药时间为(2.5±2.3)年.所有受试者在入组后第2天清晨空腹抽取外周血.采用实时荧光定量PCR法检测各组受试者外周血单个核细胞T-bet和GATA3 mRNA的表达,同时运用ELISA法检测受试者血浆IFN-γ、IL-5的表达.正态分布数据以(x)±s表示,偏态分布数据以M表示,组间比较用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法,用直线相关分析探讨两因素之间相关关系.结果 药物组、肝泡型包虫病组和健康志愿者组受试者外周血单个核细胞T-bet mRNA中位值分别为0.117、0.114、0.094,3组比较,差异无统计学意义(F =0.34,P＞0.05);药物组、肝泡型包虫病组和健康志愿者组受试者外周血单个核细胞GATA3mRNA表达水平中位值分别为0.006、0.007、0.021,3组比较,差异有统计学意义(F =4.96,P＜0.05);药物组、健康志愿者组和肝泡型包虫病组受试者T-bet与GATA3的比值(T-bet/GATA3)中位值分别为25.618、8.235、4.350,3组比较,差异有统计学意义(F=9.12,P＜0.05).药物组、肝泡型包虫病组和健康志愿者组受试者血浆IFN-γ表达水平分别为(367±252) μg/L、(305±52) μg/L、(326±122) μg/L,3组比较,差异无统计学意义(F=0.52,P＞0.05);药物组、肝泡型包虫病组和健康志愿者组受试者血浆IL-5表达水平分别为(40±8)μg/L、(52±39) μg/L、(41±6)μg/L,3组比较,差异无统计学意义(F=1.85,P＞0.05);药物组、健康志愿者组和肝泡型包虫病组受试者IFN-γ与IL-5的比值分别为9.5±9.2、6.8±2.1、8.0±2.8,3组比较,差异无统计学意义(F=1.18,P＞0.05).药物组患者阿苯达唑用药时间和T-bet/GATA3之间无相关性(r=0.076,P＞0.05).结论 肝泡型包虫病患者口服阿苯达唑后明显上调T-bet/GATA3,逆转Th1/Th2细胞失衡,Th1细胞杀伤多房棘球蚴的能力明显增强,而Th2细胞保护多房棘球蚴的能力有所减弱.机体的保护性免疫应答有所恢复.外周血T-bet/GATA3可作为阿苯达唑治疗肝泡型包虫病疗效评价的随访指标.     

特应性皮炎患者外周血Th17/Treg和IL-17、TGF-β的表达及与病情相关性研究

目的:探讨特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡和白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平,并分析其与病情的相关性。方法:选取2015年3月-2019年6月在笔者医院确诊的AD患者126例作为观察组,再选取同期健康体检者60例作为对照组。分别检测两组静脉血中Th17、Treg细胞的百分比含量和IL-17、TGF-β水平。采用欧洲特应性皮炎评分标准(Scoring atopic dermatitis,SCORAD)对观察组病情进行评分,并分为以下三个亚组:轻度组(50例),中度组(42例),重度组(34例)。结果:观察组外周血中Th17、Th17/Treg和IL-17水平均高于对照组,Treg水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,观察组TGF-β水平降低,但差异无统计学意义(P0.05)。重度组、中度组外周血中Th17、Th17/Treg和IL-17水平均高于轻度组,Treg、TGF-β水平均低于轻度组,差异有统计学意义(P0.05)。重度组外周血中Th17、Th17/Treg和IL-17水平均高于中度组,Treg、TGF-β水平低于中度组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson相关分析显示,患者外周血Th17/Treg、IL-17水平与其病情(SCORAD评分)之间呈正相关(r=0.930,0.893,P0.001)。患者TGF-β水平与其病情(SCORAD评分)之间呈负相关(r=-0.912,P0.001)。结论:AD患者外周血中Th17、Th17/Treg和IL-17水平均升高,Treg、TGF-β水平均降低,且患者Th17/Treg、IL-17、TGF-β水平均与其病情程度密切相关。因此,Th17/Treg细胞平衡在AD发病机制中发挥重要作用,在今后临床上可据此给予对应治疗。     

IL-17 mRNA在肝脏泡型包虫病中的表达及其临床意义

目的:探讨Th17细胞特异性细胞因子IL-17 m RNA在肝脏泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及其临床意义。方法:将14例经手术确诊的肝脏泡型包虫病患者肝脏组织分为3组:病灶组织(L)组,病灶邻近组织(PL)组和正常肝脏组织(N)组。应用实时荧光定量PCR技术检测各组受试者Th17细胞相关细胞因子IL-17 m RNA的表达。结果:IL-17 m RNA水平在L组、PL组和N组分别为(4.920 7±5.386 4)pg/m L(0.234、9±0.417 9)pg/m L和(0.055 7±0.114 9)pg/m L,L组较PL组和N组明显升高(P0.01);PL组较N组轻度升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:IL-17 m RNA在肝泡型包虫病患者肝脏病灶组织中表达显著升高,可能和棘球蚴感染过程中所致免疫损伤和炎性肉芽肿形成有关。     

冠状动脉旁路移植术后Th17和Treg细胞及其相关因子在新发心房颤动患者外周血中的变化

目的探讨辅助性T细胞17(Th17),调节性T细胞(Treg)及相关因子对冠状动脉旁路移植术后患者新发心房颤动(POAF)的影响。方法选择2013年5月至2016年7月132例行冠状动脉旁路移植术的冠心病患者,其中男82例、女50例,年龄39~76岁。收集患者术后2 h内静脉血,检测外周血Th17细胞,Treg细胞及相关因子表达水平,并进行数据统计分析。结果 132例患者中术后新发心房颤动35例(POAF组),未发心房颤动97例(No POAF组)。相较于No POAF组,POAF组患者外周血中Th17细胞比例和Th17/Treg比值明显升高(P0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P0.05)。血清中Th17细胞相关细胞因子(IL-6,IL-8和IL-17)含量均较No POAF组显著升高(P0.05)。而Treg细胞相关细胞因子(IL-10和TGF-β)含量在两组患者血清中含量差异无统计学意义(P0.05)。结论 POAF患者体内存在Th17/Treg平衡紊乱,调节Th17/Treg细胞平衡紊乱或可减少POAF的发生。     

泡球蚴囊液对大鼠肝星状细胞TGF-β1、IL-6及TNF-α表达的影响

目的观察泡球蚴囊液对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,以初步揭示泡型肝包虫病免疫调节作用的潜在机理。方法以泡球蚴囊液中蛋白成分的浓度代表囊液浓度,分别以0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.9、1.7、3.4、6.8及13.5 mg/m L的泡球蚴囊液干预大鼠HSC-T6细胞,作用24 h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附法检测上清中TGF-β1、IL-6及TNF-α的浓度。结果以不同浓度泡球蚴囊液(0~13.5 mg/m L)干预后,HSC-T6细胞培养液上清中的TGF-β1浓度几乎不变,各浓度组间两两比较差异均无统计学意义(P0.05)。当泡球蚴囊液浓度≤3.4 mg/m L时,上清中IL-6的浓度趋于平稳,各浓度组间两两比较差异均无统计学意义(P0.05);当泡球蚴囊液浓度为6.8和13.5 mg/m L时,IL-6浓度较0 mg/m L组均升高,差异均有统计学意义(P0.01)。当泡球蚴囊液浓度≤0.2 mg/m L时,上清中的TNF-α浓度趋于平稳,各浓度组间两两比较差异均无统计学意义(P0.05);当泡球蚴囊液浓度为0.4 mg/m L时,TNF-α浓度达到最大,为0 mg/m L组的3.53倍(P0.05);此后随浓度增高TNF-α浓度又逐渐降低,但仍高于0 mg/m L组(P0.05)。结论 IL-6和TNF-α可能在肝星状细胞介导的泡型肝包虫病的纤维化和组织损伤中扮演重要角色,而TGF-β1的作用尚不确定。     

血栓闭塞性脉管炎与调节性T细胞的关系

【摘要】〓目的〓探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)与血栓闭塞性脉管炎(TAO)的关系。方法〓收集35例TAO患者,以35例动脉硬化性闭塞症(ASO)患者作为阳性对照组,35例健康人作为阴性对照组。采用流式细胞术检测外周血Treg及其转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素10(IL-10)百分含量;采用ELISA法检测胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(CANCA)和核周型抗中性粒细胞胞浆抗体(PANCA),并分析其相关性。结果〓与正常对照组比较,TAO组患者Treg及TGF-β1均显著升高(P<0.05),而ASO组患者Treg及TGF-β1则显著低于正常对照组,三组间Treg及TGF-β1两两差异具有统计学意义(P<0.05)。与Treg及TGF-β1不同,TAO及ASO组患者IL-10组间无统计学差异,且均显著低于正常对照组(P<0.0)。与正常对照组比较,TAO及ASO组患者CANCA及PANCA均呈不同程度升高,且TAO患者CANCA及PANCA均显著高于正常对照组,而ASO组患者与正常对照组之间并无统计学差异(P<0.05)。Pearson相关性分析显示Treg、TGF-β1及IL-10三者任意一者均与CANCA及PANCA呈显著正相关性(P<0.05)。结论〓Treg及TGF-β1升高可能参与TAO的发病机制。     

大鼠肝移植免疫耐受过程Th细胞和Treg细胞因子及信号通路蛋白的变化研究

目的探讨大鼠肝移植免疫耐受过程中,辅助性T细胞(Th)和调节性T细胞(Treg)细胞因子及相关信号通路蛋白的变化与免疫耐受的关系。方法双袖套法建立原位肝移植模型,将大鼠分为3组:手术对照组(6只),假手术不进行肝移植;短期组(10只),术后存活10 d;耐受组(10只),术后存活100 d,移植肝功能恢复正常。检测各组大鼠肝功能指标如丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),Th1细胞因子[干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α],Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13),Th17细胞因子[粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-17A],Treg细胞因子[IL-10、转化生长因子(TGF)-β、IL-12p]表达水平。对各组大鼠血清进行蛋白芯片检测。结果与手术对照组比较,短期组AST明显降低,ALT明显升高(P0.05)。而耐受组与手术对照组的AST、ALT水平比较,差异均无统计学意义(均为P0.05)。各组大鼠的肝组织中,与手术对照组比较,短期组Th1细胞因子IFN-γ、IL-2表达水平明显升高(均为P0.05);耐受组Th2细胞因子IL-4的表达水平明显低于手术对照组(P0.05);短期组Th2细胞因子IL-5、IL-6、IL-13的表达水平明显低于手术对照组(P0.05);耐受组IL-17A的表达水平明显高于手术对照组(P0.05)。耐受组IL-10、IL-12p的表达水平明显高于手术对照组(均为P0.05),短期组TGF-β的表达水平明显高于手术对照组(P0.05)。与手术对照组比较,短期组细胞间黏附分子(ICAM)-1、前血小板碱性蛋白(Ppbp)、神经纤毛蛋白(Neuropilin)-2、Notch-2蛋白的表达水平明显升高(均为P0.05);耐受组趋化因子配基17(CXCL17)、ICAM-1、Neuropilin-2蛋白的表达水平明显升高(均为P0.05),而B7-1蛋白的表达水平显著减低(P0.05)。结论在大鼠肝移植自然免疫耐受过程中,Treg类细胞因子(IL-10、TGF-β、IL-12p), IL-6, IL-17以及细胞表面的跨膜信号通路分子(ICAM-1、Neuropilin-2、B7-1蛋白)在其中起到了重要的作用。     

Th17细胞及相关因子IL-17与绝经后骨质疏松的相关性研究

目的观察辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)及及相关因子白细胞介素17(interleukin 17,IL17)在绝经后骨质疏松(Postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者外周血及血清中的表达水平,并探讨IL-17细胞与绝经后骨质疏松的发病的关系。方法选取2011年7月~2014年7月在我院确诊的绝经后骨质疏松患者(60例)为研究组,选取同期来我院体检的绝经后骨量正常人群为对照组(60例),采用流式细胞术检测绝经后骨质疏松患者及骨质正常人外周血中Th17细胞水平,采用ELISA法检测两组人群外周血中IL-17、IL-6及TGF-β的蛋白水平;采用RT-PCR法检测两组人群外周血中转录因子T孤独核受体(retinoid-related orphan receptor gamma t,RORγT)的mRNA水平。通过Pearson相关分析绝经后骨质疏松患者中IL-17水平与骨密度(bone mineral density,BMD)以及血清钙可能存在的关系。结果绝经后骨质疏松患者外周血中Th17细胞比例为(2.17±0.41)%,显著高于健康对照组人群的(0.61±0.45)%,差异有统计学意义(P0.001);绝经后骨质疏松患者血清IL-17水平(31.51±10.09)pg/ml,显著高于对照组人群的(16.61±9.93)pg/ml,差异有统计学意义(P0.001);绝经后骨质疏松患者外周血RORγT mRNA的表达水平显著高于正常人群,差异有统计学意义(P0.001)。绝经后骨质正常对照组人群外周血血清中IL-6及TGF-β水平均显著低于绝经后骨质疏松患者,差异有统计学意义(t=8.99,P=0.000;t=4.71,P=0.000);此外,Pearson相关分析结果显示,绝经后骨质疏松患者血清中IL-17与BMD呈显著负相关(r=0.788,P0.05)。结论Th17细胞可能通过分泌IL-17促进绝经后骨质疏松的产生,IL-17可能作为治疗绝经后骨质疏松的重要靶点。     

Th1/Th2细胞因子变化在大鼠肝移植免疫耐受中的作用

目的:研究大鼠肝移植术后移植肝和外周血中细胞因子的表达,并分析其在急性排异反应和耐受诱导中的作用。方法:Kamada法建立大鼠肝移植模型,并随机分为4组,每组8只。A组:同品系组;B组:免疫排异组;C组:B组+免疫抑制剂;D组:C组+骨髓输注。RT-PCR和ELISA技术分别检测移植肝和外周血中细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1的表达,并观察受体存活率。结果:在B组中Th1型细胞因子(IL-2、INF-γ)表达高于A、C和D组(P<0.05);而Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和TGF-β1表达低于C和D组(P<0.05);细胞因子在C组与D组大鼠中的表达无统计学差异。A、C、D组大鼠术后近、远期存活率明显优于B组。结论:Th1型细胞因子(IL-2、INF-γ)参与肝移植急性排异反应的发生,Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和TGF-β1可能参与移植物免疫耐受的诱导,延长移植物存活。     

109例肝囊型包虫病破人腹腔的诊断与治疗

目的 探讨肝囊型包虫病破入腹腔的诊断和治疗方法.方法 回顾性分析1994年1月至2009年12月新疆医科大学第一附属医院收治的109例肝囊型包虫病破入腹腔患者的临床资料.根据流行病学史、典型临床表现、典型影像学特征和血清免疫学检查结果进行诊断.根据不同手术方式将108例行手术治疗的患者分为传统组(传统内囊摘除,67例)和改良组(改良内囊摘除,41例),比较两组患者手术时间、术中出血量、术后平均住院时间、术后带管引流时间、术后残腔并发症、胸腔积液、包虫原位复发、腹腔播散种植、死亡等情况.计量资料采用t检验,组间率的比较采用x2检验.结果 超声、CT、MRI检查确诊率分别为93%(101/109)、99%(70/71)、7/7;血清免疫学检查阳性率为100%(61/61).109例肝囊型包虫病破入腹腔患者中,1例因过敏性休克经抢救无效死亡,其余生存.传统组和改良组患者手术时间、术中出血量分别为(3.2±0.3)h、(104.0±11.5)ml和(3.3±0.4)h、(110.0±23.8)ml,两组比较,差异无统计学意义(t=-1.474,-L 758,P＞0.05);术后平均住院时间、术后带管引流时间分别为(15.3±4.3)d、(28.0 ±4.6)d和(9.3±1.2)d、(7.6±0.8)d,两组比较,差异有统计学意义(t=8.628,28.088,P＜0.05).传统组患者术后残腔积液、残腔感染、胆汁漏、包虫原位复发、腹腔播散种植发生率均显著高于改良组(x2=4.335,3.888,5.691,4.581,10.153,P＜0.05).确诊包虫原位复发或严重并发症再次手术患者21例.结论 流行病学史、典型临床表现、典型影像学特征和血清免疫学检查对于肝囊型包虫病破入腹腔的诊断具有重要作用;改良内囊摘除术+高渗盐水反复冲洗腹腔+术后正规服用抗包虫药物是目前肝囊型包虫病破入腹腔较理想的治疗方式.     

输注调节性T细胞延缓非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的发生

目的 观察过继输注调节性T细胞(Treg)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠自发性糖尿病发生的影响.方法 分选NOD小鼠天然调节性T细胞(nTreg),并诱导Na(i)ve T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(iTreg),分别输注予4周龄的雌性NOD小鼠,观察糖尿病的发生情况,并确定细胞输注后Treg在体内的分布、检测血清中TGF-β1、IL-10及IL-4的表达以探讨Treg的作用机制.结果 对照组小鼠13周龄时即100%自发性发生糖尿病,而输注iTreg和nTreg分别能延缓糖尿病的发生时间至24周龄和25周龄,与对照组比较差异有统计学意义(P＞0.05).Treg细胞输注后主要分布在胸腺,iTreg在体内能促进TGF-β1、IL-10及IL-4表达的上调[血中浓度分别为(543.00±26.51)、(107.67±12.66)、(93.33±12.58)ng/L],与对照组比较差异有统计学意义[(60.67±15.82)、(20.67±6.03)、(30.67±5.51)ng/L,P＜0.05].结论 在体外诱导生成的调节性T细胞可延缓NOD小鼠糖尿病的发生,其机制与上调具有免疫抑制效应的细胞因子相关.     

Transformation of DNA demethylation in the regulatory region of TGFB1 gene in patients with diabetic nephropathy

Objective To investigate the role of DNA methylation changes in the regulatory region of TGFB1 gene in patients with diabetic nephropathy (DN). Methods According to the WHO 1999 guideline for diabetes mellitus diagnosis and classification standard, 91 patients who were hospitalized in June 2013 to May 2015 and diagnosed as diabetes mellitus were selected, including 42 patients with diabetes mellitus (DM group) and 49 with diabetic nephropathy (DN group). Thirty cases with health examination were selected as healthy control group (Con group). DNA was extracted from all the subjects' peripheral blood and modified by sodium bisulfite. DNA methylation status of TGFB1 gene regulatory region was screened by methylation specific PCR and the DNA methylation level was detected by bisulfite sequencing PCR. ELISA was used to test serum TGF-β1. Blood urea nitrogen, creatinine, fasting blood sugar, postprandial blood sugar, glycosylated hemoglobin and urinary albumin to creatinine ratio (UACR) were detected by automatic biochemistry analyzer. Pearson correlation analysis and multiple stepwise regression were used to analysis TGF-β1-related factors, the correlation between the level of serum TGF-β1 and the pathological grade was analyzed in DN patients. Results There were 12.2% patients in DN group with DNA methylation of TGFB1 gene regulation region, lower than those in DM group (42.8%) with Con group (73.3%) (all P＜0.05). The methylation level of TGFB1 regulatory region was 12.5%±8.1% in DN group, significantly lower than those in DM group (35.6%±6.0%) and Con group (66.7%±9.1%) (all P＜0.05). Moreover, compared with that in DM group (1367.22±126.13 ng/L) and Con group [(296.38±74.37) ng/L], TGF-β1 expression was increased significantly in DN group [(2885.73±411.36 ng/L] (all P＜0.01). In DN patients serum TGF-β1 was correlated with eGFR (β=-0.690, P＜0.01) and the methylation (β=-0.302, P＜0.01), and the serum TGF-β1 was negatively correlated with DNA methylation level (r=-0.925, P＜0.01), but positively correlated with the pathological scores among glomerulus, tubulus and arterioles (rs=0.847, P＜0.01). Meanwhile the methylation level related to the pathological grade (χ2=23.667, P=0.04). Conclusion Demethylation in the regulatory region of TGFB1 may play an important role in the activation of TGFB1 induced by high glucose in mesangial cells, so as to participate in the occurrence and development of DN.     

喷他佐辛对止血带致下肢缺血/再灌注后心肌肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的 观察喷他佐辛对下肢缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)的影响及其与降钙紊基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的关系. 方法 选取择期在蛛网膜下腔麻醉下行单侧下肢骨科手术使用止血带患者60例,按照随机数字表法分为对照组(C组)和喷他佐辛组(P组),每组30例.止血带充气前P组患者给予喷他佐辛0.5 mg/kg静脉滴注,C组在相同时刻给予等量生理盐水.在止血带充压前(To)及止血带释压后0.5 h(T0、24 h(T2)时采集输液对侧肘静脉血5 nl,采用ELISA法检测血清中cTnⅠ和CGRP的含量. 结果 两组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与To时cTnⅠ[(0.2 1±0.06)μg/L]比较,C组cTnⅠ在T1时无明显变化(P＞0.05),在T2[(0.28±0.10) μg/L]时明显升高(P＜0.05),P组cTnⅠ在T1、T2时无明显变化(P＞0.05);与To时CGRP[(16.9±2.2) ng/L]比较,C组CGRP在T1、T2时均无明显变化(P＞0.05),P组CGRP在T1[(17.9±2.7) ng/L]、T2[(18.8±2.8) ng/L]时均明显升高(P＜0.05).与C组在T1、T2时cTnⅠ[(0.23±0.12)、(0.28±0.10) μg/L] 、CGRP[(16.9±1.9)、(16.7±2.6) ng/L]比较,P组的cTnⅠ在T1时无明显变化(P＞0.05),T2[(0.22±0.06) μg/L]时明显降低(P＜0.05),P组的CGRP在T1、T2时均明显升高(P＜0.05). 结论 喷他佐辛可以减轻下肢使用止血带诱发I/R后的cTnⅠ升高,可能与内源保护性神经肽CGRP有关.     

Relationship between T-helper cell 17/regulatory T cell imbalance and atherosclerosis cardiovascular disease in maintenance hemodialysis patients

Objective To investigate whether the T-helper cell 17 (Th17)/regulatory T cell (Treg) of patients on maintenance hemodialysis (MHD) present imbalance in terms of proportion and function, and if so, the relationship between such imbalance and atherosclerosis cardiovascular disease (ASCVD). Methods Fifty-seven MHD patients, included 25 with ASCVD and 32 without ASCVD, and 24 healthy volunteers were enrolled. The common carotid artery intima media thickness (CCA-IMT), carotid plaque and plaque area were determined with high-resolution B-mode ultrasonography. Treg (CD4+CD25+Foxp3+) and Th17 (CD4+IL-17+) were measured by flow cytometry. The Foxp3 and RAR-related orphan receptor γt (RORγt) mRNA expressions were measured by real-time PCR. TGF-β1, IL-10, IL-17 and IL-6 in serum were detected by ELISA. Results There were decreased Treg proportion, Foxp3 mRNA, TGF-β1 and IL-10, and increased Th17 proportion, RORγt mRNA, IL-17, IL-6 and Th17/Treg in the ASCVD group compared with that in the non-ASCVD group and healthy group (all P＜0.01). No correlation was observed between Treg and CCA-IMT, but IL-10 were negatively correlated with CCA-IMT (P＜0.05). Th17, IL-17 and ratio of Th17/Treg were positively correlated with CCA-IMT (all P＜0.05). MHD patients with carotid plaques had lower Treg, TGF-β1 and IL-10, higher Th17, IL-17 and ratio of Th17/Treg than those without carotid plaques (all P＜0.05). Moreover, Treg proportion was negatively correlated with carotid plaque area in MHD patients with carotid plaques (P＜0.01). Conclusions The Th17/Treg numerical and functional imbalance exists in MHD patients, especially in patients with ASCVD. This might act synergistically with micro-inflammation on immune-mediated atherosclerosis and contribute to the high incidence of ASCVD.     

RhoA/Rho激酶信号通路在TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

目的 观察TGF-[1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响,以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法 原代培养人皮肤成纤维细胞,将第4代细胞用TGF-β1( 10 ng/ml)刺激后,分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度,Western -blot检测α-SMA的表达水平;并用相同的方法检测不同浓度TGF-β1(0、2、10、50 ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后,α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后,再用TGF-β1刺激,作为实验组,将未作处理的正常细胞作为空白对照组,Y-27632（10 μmol/L）组作为阴性对照组,只用TGF-β1( 10 ng/ml)刺激组作为阳性对照组,分别检测α-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析,P ＜0.05为差异有统计学意义。结果 10 ng/ml TGF-β1按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后,α-SMA的表达量分别为：0h为1.0,3h为1.9+0.2、6h为2.1±0.1,24 h为3.1±0.1。24 h较其他3个时间点α-SMA表达量明显上升（n=4,P＜0.05）。不同浓度TGF-β1刺激人皮肤成纤维细胞后,α-SMA的表达量分别为：0 ng/ml为1.0,2 ng/ml为1.4±0.2,10 ng/ml为3.2±0.1,50 ng/ml为3.1±0.2。10 ng/ml表达量明显高于0 ng/ml和2 ng/ml(n =4,P ＜0.05),较50 ng/ml差异无统计学意义(n=4,P＞0.05)。用Y-27632（10 μmol/L）处理后,再用TGF-β1刺激,细胞的表型转化明显受到抑制,实验组α-SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组(2.9±0.1)明显降低(n=5,P ＜0.05),与空白对照组(1.0)和阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均无统计学意义(n=5,P＞0.05)。结论 RhoA/Rho激酶信号通路参与了 TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程。     

右美托咪定预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤时心肌组织高迁移率族蛋白B1的影响

目的 探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MFRI)时心肌组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达量的影响. 方法 健康雄性SD大鼠52只,体重250～300 g,按随机数字表法分为4组(每组13只):假手术组(S组)、缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组(I/R组)、Dex+I/R组(D组)、Dex+育亨宾+I/R组(D/Y组).结扎左冠状动脉前降支30 min,恢复灌注120 min制备MI/RI模型.再灌120 min时采血ELISA法测定血清中IL-6、TNF-α浓度,随后处死大鼠摘取心脏,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测定心肌梗死面积,Western blot法测定心肌组织HMGB1蛋白的表达量. 结果 与S组比较,I/R组血清中IL-6、TNF-α含量[(336±41)、(636±25) ng/L]均显著增高(P＜0.05),心肌梗死面积明显增大(P＜0.05),心肌组织HMGB1蛋白表达量明显升高(P＜0.05);与豫组比较,D组血清中IL-6、TNF-α含量[(153±10)、(233±9) ng/L]均明显降低(P＜0.05),心肌梗死面积明显减少(P＜0.05),心肌组织HMGB1蛋白表达量显著降低(P＜0.05);与D组比较,D/Y组血清中IL-6、TNF-α含量[(230±20)、(386±32) ng/L]均显著增高(P＜0.05),心肌梗死面积明显增大(P＜0.05),心肌组织HMGB1蛋白表达量明显升高(P＜0.05). 结论 Dex预处理减轻MI/RI心肌组织HMGB1的表达量,减轻I/R损伤的炎症反应.Dex通过α2受体发挥保护作用.     

Nod样受体蛋白3炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探究Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein-3,NLRP3)炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气导致的小鼠急性肺损伤是否具有保护作用. 方法 28只7～9周的清洁级ICR雄性小鼠,按完全随机分组法分为4组:对照组(CON组,6只)、格列苯脲组(GLY组,6只)、机械通气组(VEN组,8只)和格列苯脲+机械通气组(GLY+VEN组,8只).VEN组和GLY+VEN组机械通气4h后与CON组及GLY组麻醉插管后4h测定肺泡灌洗液中蛋白含量及炎性细胞数量,测量肺组织湿/干重比(wet/dry,W/D),观察肺组织病理学改变,ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α的含量. 结果 VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[(0.534±0.104) g/L和(3.4±0.7)×105/ml]比CON组[(0.167±0.021) g/L和(1.9±0.5) ×105/ml]升高(P＜0.01);GLY+VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[(0.425±0.083) g/L和(2.4±0.6) ×105/ml]比VEN组下降(P＜0.05).VEN组肺组织W/D(5.1±0.5)与CON组(4.4±0.4)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),GLY +VEN组肺组织W/D(4.7±0.4)与VEN组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).VEN组和GLY+VEN组肺组织中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达与CON组比较,明显升高(P＜0.05),GLY+VEN组IL-1β和IL-6表达与VEN组比较,表达明显降低(P＜0.05).结论 机械通气前给予格列苯脲可有效减少小鼠肺组织炎症细胞聚集,减轻肺水肿,机制可能与其抑制炎性体的激活有关.     

静脉应用抑肽酶对大鼠肺移植模型缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨静脉应用抑肽酶对肺移植后肺缺血再灌注损伤的作用和机制.方法 利用移植肺冷缺血14 h建立的大鼠肺移植缺血再灌注损伤模型,考察抑肽酶对缺血再灌注损伤的影响,并检测细胞因子等指标探讨机制.结果 抑肽酶组较对照组移植肺氧合好、湿干比小,同时支气管肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-2[(113±32)μg/L和(162±43)μg/L,P＜0.05]、血清中IL-8[(7.26±1.01)ng/L和(9.43±0.97)ng/L,P＜0.05]和肿瘤坏死因子(TNF)-α[(152.3±36.4)ng/L和(211.6±52.7)ng/L,P＜0.05]、肺组织中髓过氧化物酶活性[(2.36±0.62)U/g和(3.98±0.36)U/g,P＜0.05]都显著降低.结论 静脉应用抑肽酶能够减轻缺血再灌注损伤,机制可能包括:减少IL-2的释放、抑制TNF-α活化和IL-8产生,抑制中性粒细胞的聚集、激活和脱颗粒.     

二十碳五烯酸对小鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的 观察二十碳五烯酸(EPA)对于慢性排斥反应的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 建立近交系BALB/C(H-2d)至C57BL/6(H-2b)小鼠心脏腹腔异位移植模型,通过腹腔注射单克隆CD4抗体及CD40L抗体建立慢性排斥反应模型.设立对照组(NS)、慢排组(术后0、1、5、10 d腹腔注射抗CD4单克隆抗体100μg/d,术后0、2、4 d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体200 μg/d)和EPA组[在慢排组的基础上EPA 100 mg/(kg·d)灌胃].术后60 d,EVG染色了解血管病变.利用Real-Time聚合酶链反应(PGR)检测各组移植物慢排相关细胞因子转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17的mRNA水平,组织化学研究EPA作用受体PPARy的表达以及TGF-β通路重要分子Smad3活化情况.结果 利用CD4抗体及CD40L抗体成功建立慢性排斥反应模型,出现典型的血管病变.联合利用EPA明显减轻血管狭窄[闭塞(18±3)%比(59±7)%,P＜0.05]、并下调局部TGF-β、IL-17表达(TGF-β:12.0±2.5比4.0±0.9;IL-17:0.60±0.09比0.10±0.02;P＜0.05).同时上调PPARγ的表达[(25±7)比(2±0.5)个/高倍视野;P＜0.05],并抑制Smad3的磷酸化[(30±5)比(10±3)个/高倍视野;P＜0.05].结论 EPA可以激活和上调供心PPARγ的表达,明显减轻慢性排斥反应血管病变.

Abstract：

Objective To investigate the anti-chronic rejection effects of eicosapentaenoic acid (EPA) in a mouse fully mismatched cardiac transplantation model and the possible mechanism.Methods Heterotopic heart transplantation of male BALB/C(H-2d) mouse to C57BL/6(H-2b) mouse were performed.24 recipients were divided into 3 groups at random:group A ( treated with saline as control,n =8) ;group B recipients were treated with anti-CD40L mAb (200 μg intraperitoneally infusion on the day 0,2 and 4) and CD4 mAb (100μg intraperitoneally infusion on the day 0,1,5 and 10) ;GroupC (CD4 & CD40L mAb combined with EPA by gavage).The cardiac grafts were harvested on the 60th day after transplantation with HE&EVG stained.Real-Time polymerase chain reactio (PCR) was used to detect the transforming growth factor-β1 (TGF-β1),interleukin (IL)-17 mRNA,immunohistochemistry were used to detect the PPARγ and P-Smad3 protein expression respectively in cardiacgrafts from group B and C.Results Combined treatment with anti-CD40L mAb and anti-CD4 mAb resulted in significant prolongation of cardiac allografts survival but ultimately did not prevent the progression of chronic rejection,which showed transplant arteriosclerosis and in terstitial fibrosis.The combination of EPA reserved arterial intimal thickening and delay the process of cardiac allograft vasculopathy [Vascular occlusion rate (18 ± 3 )% vs (59 ±7) %;P ＜0.05].Real Time PCR revealed that IL-17 and TGF-β mRNA was expressed less in grafts from group C than group B (TGF-β:4.0 ±0.9 vs 12.0 ±2.5 ;IL-17:0.10 ±0.02 vs 0.60 ±0.09;P＜0.05).The cells in graft that express PPARγ protein was more in group C than from group B [( 25.0 ± 7.0) vs (2.0 ± 0.5 )/PHF ;P＜0.05],reversely the P-Smad3 protein [( 10 ± 3 ) vs ( 30 ± 5 )/PHF;P＜0.05].Conclusion The administration of EPA can inhibit the chronic rejection and reserve arterial intimal thickerring through PPAR-gamma agonist.     

骨髓间充质干细胞对大鼠慢性胰腺炎中星状细胞的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性胰腺炎(CP)中星状细胞(PSC)的活化、增殖和分化的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为空白组(20只,注射无菌生理盐水)、模型组[20只,尾静脉注射二氯二丁基酯(DBTC)制作大鼠CP模型]、治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射体外培养的同种异体GFP-MSCs)、假治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射等量的无菌生理盐水).取大鼠胰腺检测PSC活化表达的Desmin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,组织中Ⅰ、Ⅲ胶原含量及白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF) -β1表达水平.结果 治疗组PSC表达的Desmin、GFAP、α-SMA,组织中Ⅰ (0.135±0.030) ng/g、Ⅲ胶原含量(0.029±0.008) ng/g,TGF-β1 (0.020±0.006) μg/L浓度均低于假治疗组(P＜0.05),但IL-10 (603.799±89.374) g/ml,TNF-α(507.45±90.13) μg/L均高于假治疗组(P＜0.05),后者与模型组之间的差异无统计学意义(P＞0.05),空白组未见明显异常.结论 BMSCs可以通过对细胞因子的调控减少PSC的活化,抑制其增殖及分化,降低细胞外基质的沉积.