川芎嗪对HaCaT细胞中成纤维细胞生长因子10影响的实验研究

目的研究川芎嗪对HaCaT细胞中FGF10mRNA转录和FGF10蛋白翻译的影响。方法HaCaT细胞以不同浓度的川芎嗪处理48h后,用原位杂交和免疫荧光法检测FGF10mRNA转录和FGF10蛋白翻译的改变情况。结果与对照组比较,处理48h后,FGF10的mRNA水平和蛋白水平均减少,随着川芎嗪剂量的增加,FGF10mRNA转录和FGF10蛋白翻译均减少,两组间比较,有显著性差异(P<0.01)。结论川芎嗪可抑制HaCaT细胞中FGF10mRNA的转录及其蛋白的翻译,随着川芎嗪剂量的增加,HaCaT细胞中FGF10的转录和翻译均减少。     

当归多糖对HaCaT细胞中成纤维细胞生长因子10影响的研究

目的观察不同剂量当归多糖对培养的HaCaT细胞FGF10mRNA转录及其蛋白翻译的影响。方法HaCaT细胞以不同剂量的当归多糖处理48h后,采用免疫组化和原位杂交的方法检测FGF10mRNA转录及其蛋白翻译的改变。结果与未处理组比较,处理48h后,FGF10mRNA转录及其蛋白翻译水平均减少,其变化随当归多糖剂量的增加而减少,两组间比较有显著性差异(P0.05)。结论当归多糖可抑制HaCaT细胞中FGF10mRNA转录及其蛋白翻译,随当归多糖剂量的增加,FGF10的转录和翻译均减少。     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

碱性成纤维细胞生长因子对皮肤萎缩性瘢痕中成纤维细胞的作用

目的探讨人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对豚鼠皮肤萎缩性瘢痕中成纤维细胞的作用。方法取实验用成年豚鼠20只,于脊柱旁两侧A,B,C三处皮肤分别人工造成萎缩性瘢痕后,实验组在A处真皮层注射50μg/L的bFGF0.1mL,隔日1次,共4次;在C处真皮层注射同剂量生理盐水作阴性对照,B处不作任何处理做空白对照。术后第21天切取瘢痕组织行病理切片,应用鼠抗人ki-67单克隆抗体行免疫组化,显微镜下计算增殖成纤维细胞所占百分率。结果实验组、阴性对照组和空白对照组切口瘢痕增殖成纤维细胞百分率分别为(7.63±1.42)%,(0.98±0.33)%和(1.22±0.34)%。实验组增殖成纤维细胞百分率与阴性对照组及空白对照组比较显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF可以促进豚鼠皮肤萎缩性瘢痕中的成纤维细胞增殖。     

UVA对成纤维细胞和HaCaT细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶产生水平的影响

目的 比较5 J/cm2长波紫外线（UVA）照射对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞形态、数目和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）产生的影响。方法 5 J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞和HaCaT细胞后24 h，48 h和72 h，倒置相差显微镜下观察细胞形态和数目变化，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和细胞免疫组化方法检测两种细胞iNOS mRNA和蛋白表达的情况。结果 人成纤维细胞在照射后3个时间点细胞均出现皱缩，24 h细胞数目即明显低于照射前（P < 0.05），iNOS mRNA和蛋白在照射后24 h有高峰表达；HaCaT细胞在3个时间点细胞形态未见明显改变，细胞数目在照射后48 h才明显低于照射前（P < 0.05），且iNOS mRNA和蛋白在照射后48 h有高峰表达。结论 5 J/cm2 UVA照射后人成纤维细胞比HaCaT细胞更易受到损伤，iNOS高峰表达出现更早，且持续时间更长。     

UVA对成纤维细胞和HaCaT细胞形态及诱导型一氧化氮合酶产生水平的影响

目的 比较5 J/cm²长波紫外线(UVA)照射对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞形态、数目和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生的影响.方法 5 J/cm² UVA分别照射人成纤维细胞和HaCaT细胞后24 h,48 h和72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态和数目变化,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫组化方法检测两种细胞iNOS mRNA和蛋白表达的情况.结果 人成纤维细胞在照射后3个时间点细胞均出现皱缩,24 h细胞数目即明显低于照射前(P<0.05),iNOS mRNA和蛋白在照射后24 h有高峰表达;HaCaT细胞在3个时间点细胞形态未见明显改变,细胞数目在照射后48 h才明显低于照射前(P<0.05),且iNOS mRNA和蛋白在照射后48 h有高峰表达.结论 5 J/cm² UVA照射后人成纤维细胞比HaCaT细胞更易受到损伤,iNOS高峰表达出现更早,且持续时间更长.     

姜黄素对紫外线诱导损伤的HaCaT细胞的保护作用

目的比较姜黄素对UVA、UVB急性损伤的HaCaT细胞的保护作用。方法体外培养人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,UVA、UVB照射建立HaCaT细胞急性光损伤模型。姜黄素与HaCaT细胞共培养24 h后,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,确定无毒性姜黄素浓度。通过MTT法、流式细胞术分别检测添加姜黄素前后,UVA、UVB照射引起的HaCaT细胞损伤情况及胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。结果姜黄素浓度在5μmol/L以下时,正常细胞的增殖和凋亡不受影响。添加姜黄素前,UVA照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.9%;UVB照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.2%。添加姜黄素后,UVA、UVB组细胞损伤均减轻(P0.05),ROS水平升幅均下降,呈浓度依赖型。结论对于不同波长的紫外线诱导损伤的HaCaT细胞,姜黄素均可降低急性光损伤引起ROS水平升幅,具有抗氧化保护作用,其保护强度无差异,并且呈浓度依耐性。     

光老化成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCaT细胞增殖的影响

目的: 评价紫外线诱导衰老成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCaT细胞增殖的促进作用.方法: 连续UVB辐射诱导成纤维细胞发生应激性衰老(SIPS).成纤维细胞接种后,制备细胞外基质(ECM).将预处理的HaCaT细胞接种到包被ECM的平皿.流式细胞仪检测HaCaT细胞周期和凋亡,MTT法检测细胞的增殖.结果: UVB-SIPS成纤维细胞分泌的ECM对HaCaT细胞具有较强的促增殖作用,但对细胞凋亡无显著影响.结论: UVB-SIPS 成纤维细胞分泌的ECM可以更强地促进HaCaT细胞的增殖.     

成纤维细胞生长因子10在寻常型银屑病皮损中的检测

目的检测成纤维细胞生长因子10(FGF10)在寻常型银屑病皮损中的水平,探讨其与银屑病发病的关系。方法应用免疫组化法检测了FGF10在22例寻常型银屑病皮损、非皮损中的分布。以20例正常皮肤为正常对照。结果寻常型银屑病皮损、非皮损中FGF10的阳性检测结果均明显高于对照组(P<0.05)。结论银屑病皮损中FGF10阳性的检测结果可能与银屑病的发病有关。     

紫外线照射对HaCaT细胞起源的白介素10和白介素4的影响

我们以往的研究表明,UV照射对HaCaT细胞分泌Th1型细胞因子白介素12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)无明显影响.本研究在此基础上,以长波紫外线(UVA)和中波紫外线(UVB)照射人永生化表皮细胞HaCaT细胞,检测UV照射后HaCaT细胞IL-10、IL-4受体的表达情况和细胞培养液中IL-10、IL-4的含量,探讨UV照射对角质形成细胞产生Th2型细胞因子的影响及其与T细胞亚群失衡的相关性.     

氨基酮戊酸光动力疗法抑制成纤维细胞生长因子10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的机制研究

目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对成纤维细胞生长因子10（FGF-10）诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的作用及其机制。 方法 将培养的HaCaT细胞分为4组：空白对照组（无任何处理）,FGF-10组（加入FGF-10孵育24 h）,ALA-PDT组（ALA孵育24 h后红光照射）,FGF-10 + ALA-PDT组（FGF-10孵育24 h后,再加ALA孵育24 h,红光照射）。用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,Western印迹法检测K1、K6、K16及角质形成细胞生长因子受体（KGFR）的含量,ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1α（IL-1α）蛋白表达,免疫荧光检测各组细胞KGFR和K6蛋白表达水平。统计学分析采用析因设计的方差分析和单因素方差分析。结果 析因分析显示,ALA-PDT和FGF-10对HaCaT细胞增殖无交互作用（F交互 = 1.369,P = 0.276）,FGF-10对HaCaT细胞增殖有促进作用（FFGF-10 = 20.853,P < 0.05）,而ALA-PDT有抑制作用（FALA-PDT = 24.822,P < 0.05）。与空白对照组细胞增殖活性（A值为0.924 ± 0.024）比较,FGF-10组（1.233 ± 0.099）显著升高（P < 0.05）,而ALA-PDT组（0.718 ± 0.107）显著降低（P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组（0.901 ± 0.014）较FGF-10组显著降低（P < 0.05）。Western印迹法显示,FGF-10可促进K1、K6、K16蛋白和KGFR的表达（均P < 0.05）,而ALA-PDT抑制这些蛋白的表达（均P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组K1、K6、K16和KGFR的相对表达量与FGF-10组比较均显著降低（均P < 0.05）。ELISA法显示,FGF-10会增加HaCaT细胞IL-1α蛋白分泌（P < 0.05）,但ALA-PDT对其没有影响（P = 0.467）。此外,免疫荧光检测显示,FGF-10增加HaCaT细胞K6和KGFR免疫荧光强度（P < 0.05）,而ALA-PDT降低K6和KGFR免疫荧光强度（P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组K6和KGFR免疫荧光强度显著低于FGF-10组（P < 0.05）。 结论 ALA-PDT能抑制FGF-10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖,其机制与下调K1、K6、K16、KGFR及IL-1α有关。     

神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子促HaCaT细胞增殖的研究

【摘要】 目的 探讨神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1,NRP-1）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）在血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ,VEGF）促HaCaT 细胞增殖中的可能机制。方法 培养HaCaT细胞,转染NRP-1质粒EX-O0008-M02,采用逆转录（RT）-PCR法检测转染后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测NRP-1蛋白质表达。将部分培养的HaCaT细胞分为脂质体对照组、对照质粒组以及目的质粒组分别予以脂质体、对照质粒pReceiver-M02及目的质粒EX-O0008-M02转染,各组分别加入PBS、MEK1/2抑制剂（U0126）、VEGF或U0126联合VEGF进行处理后,噻唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖的改变,蛋白免疫印迹法观察ERK1/2的磷酸化情况以及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。采用One-way ANOVA 检验组间差异,LSD法进行多重比较和校正。结果 RT-PCR和蛋白免疫印迹实验结果提示EX-O0008-M02质粒转染可有效促进HaCaT细胞NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达。与脂质体对照组（A570值0.63 ± 0.07）及对照质粒组（A570值0.62 ± 0.13）比较,目的质粒组HaCaT细胞增殖活性（A570值0.88 ± 0.14）明显增强,F = 8.755,P < 0.05。与对照质粒VEGF刺激组（A570值0.88 ± 0.10）比较,目的质粒VEGF刺激组HaCaT细胞的增殖活性（A570值1.14 ± 0.18）亦明显增强,F = 4.591,P < 0.05。与目的质粒VEGF刺激组比较,U0126预处理可以明显抑制VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用（A570值0.50 ± 0.13,F = 42.106,P < 0.01）。蛋白免疫印迹结果提示与对照质粒转染细胞比较,目的质粒转染后VEGF对HaCaT细胞ERK1/2的促磷酸化及促PCNA表达得到明显提高,然而此作用可以被U0126有效抑制。结论 ERK1/2信号通路的激活在NRP-1蛋白介导的VEGF促HaCaT细胞增殖作用中可能发挥关键性作用。 【关键词】 神经纤毛蛋白质1; 角蛋白细胞; 血管内皮生长因子类; 糖尿病足     

姜黄素对紫外线照射后HaCaT细胞内Nrf2核转位的激活作用

目的:明确姜黄素对急性紫外线损伤的HaCaT细胞内Nrf2核转位的影响。方法:1μM、2.5μM、5μM姜黄素与细胞共培养,UVA、UVB照射后Western blot法检测各实验组HaCaT细胞内Nrf2核转位情况。结果:姜黄素预处理后照射UVA和UVB,Nrf2胞质蛋白的浓度随姜黄素的浓度升高而下降,胞核蛋白浓度则随其升高而升高(P0.05)。结论:姜黄素对急性紫外线损伤的HaCaT细胞内Nrf2核转位有激活作用。     

血管内皮生长因子受体家族在HaCaT细胞中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)家族在角质形成细胞系HaCaT细胞的表达。方法 RT-PCR法检测HaCaT细胞中VEGFR家族中VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及neuropilin (NRP)-1、NRP-2的mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测VEGFR家族蛋白质的表达,同时免疫荧光法定位VEGFR家族在HaCaT细胞中的表达情况。结果 RT-PCR发现VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及NRP-1、NRP-2 mRNA在HaCaT细胞中均有表达;蛋白免疫印迹发现VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白质相对分子质量均为180 000,NRP-1、NRP-2为140 000。HaCaT细胞膜及细胞质内检测到较强的VEGFR家族荧光信号,以细胞膜表达为强。结论 在mRNA及蛋白质水平,HaCaT细胞均表达VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及NRP-1、NRP-2。     

HaCaT细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用

目的 探讨角质形成细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用.方法 将HaCaT细胞采用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2环境下,37 ℃孵育至80%融合时,弃去培养液,加入用无血清DMEM配制的菌丝段悬液共孵育(浓度0.1×105/mL～1.0×105/mL),并以菌丝段悬液作为阴性对照.分别于4 h、8 h、16 h和24 h制备共孵育后的菌丝段悬液,进行台盼蓝染色计数和菌落计数,对真菌生长状况进行评价并计算真菌生长抑制率.结果 在细胞和菌丝段共孵育4 h、8 h、16 h和24 h,台盼蓝染色法测得的菌生长抑制百分数分别为46.8%±8.0%、64.0%±5.5%、76.3%±7.7%和39.5%±4.9%;菌落计数法测得菌生长抑制百分数分别为39.7%±4.9%、58.0%±8.9%、68.3%±7.4%和39.9%±5.5%.结论 HaCaT细胞对体外培养的红色毛癣菌有一定的抑制作用.     

Immunohistochemical analysis of keratinocyte growth factor and fibroblast growth factor 10 expression in psoriasis

The pathogenic mechanism underlying the hyperproliferation of keratinocytes in psoriasis is still not completely clarified. The production of cytokines released by activated T lymphocytes infiltrating the upper dermis probably has a crucial role. Even dermal fibroblasts can participate in the process through the secretion of growth factors, and some studies have reported an increased expression of the insulin-like growth factor 1. Few studies, however, have focused on the possible involvement of the keratinocyte growth factor (KGF/FGF-7) and the fibroblast growth factor 10 (FGF-10/KGF-2), which are secreted by fibroblasts and stimulate keratinocyte proliferation acting through a receptor specifically expressed by epithelial cells. The aim of this study was to investigate the expression of KGF and FGF-10 on the skin of patients with psoriasis by immunohistochemical analysis and to evaluate the correlation with the lymphocyte infiltrate and the epidermal proliferation. Immunostaining for KGF and FGF-10 showed that both the growth factors are upregulated in the upper dermis of psoriatic skin, and that the expression is correlated with the presence of T-cell infiltrate and with keratinocyte proliferation. Our data suggest that in psoriatic lesions activated lymphocytes can stimulate fibroblasts to produce KGF and FGF-10, which in turn contribute to sustain the hyperproliferative status of the keratinocytes.     

成纤维细胞生长因子10mRNA在脂溢性角化病皮损中的表达

目的研究成纤维细胞生长因子10 mRNA在脂溢性角化病皮损中的表达,探讨其在脂溢性角化病发病中的作用机制。方法应用原位杂交法检测FGF10 mRNA正常皮肤组织和脂溢性角化病皮损中的表达和分布。结果28例脂溢性角化病皮损表皮的全层或中下层均可见FGF10 mRNA表达(100.0%);正常皮肤表皮的基底层或个别细胞内可见FGF10 mRNA的表达(3.57%);脂溢性角化病皮损表皮中FGF10 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。结论FGF10 mRNA在脂溢性角化病皮损中表达增高。     

白细胞介素22诱导HaCaT细胞表达肝素结合表皮生长因子样生长因子的作用机制探讨

目的 探讨白细胞介素22（IL-22）诱导HaCaT细胞表达肝素结合表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）的相关作用机制。 方法 用不同浓度的IL-22（12.5、25、50、100 μg/L）干预处理HaCaT细胞,对照组选择等量磷酸盐缓冲液（PBS）处理。24 h后,提取HaCaT细胞总蛋白进行蛋白免疫印迹,检测丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节激酶1/2（MAPK-ERK1/2）通路中磷酸化ERK1/2（P-ERK1/2）的表达和转录激活因子途径（JAK/STAT）中磷酸化JAK2（P-JAK2）和磷酸化STAT3（P-STAT3）的表达。将HaCaT细胞分4组,分别用PBS、IL-22、MAPK-ERK1/2抑制剂PD98059、JAK2/STAT3通路抑制剂AG490与IL-22共同干预HaCaT细胞,24 h后,提取细胞总蛋白和总mRNA,分别用蛋白免疫印迹法和实时定量逆转录（RT）-PCR法检测不同处理组HB-EGF蛋白和mRNA水平的改变。采用SPSS16.0软件进行单因素方差分析检验组间差异,Bonferroni检验进行多重比较。结果 不同浓度的IL-22干预处理后,HaCaT细胞中P-ERK1/2、P-JAK2和P-STAT3蛋白表达均高于对照组（P < 0.05）。HB-EGF蛋白水平（HB-EGF/内参照的灰度比值）在PD98059组和AG490组分别为0.183 ± 0.020和0.199 ± 0.011,与IL-22组（0.924 ± 0.032）相比,差异具有统计学意义（F值分别为37.700、36.400,均P < 0.05）。HB-EGF mRNA水平在PD98059组和AG490组分别为1.034 ± 0.072和0.989 ± 0.038,与IL-22组（1.844 ± 0.135）相比,差异具有统计学意义（F值分别为11.271、13.429,均P < 0.05）。 结论 IL-22可以引起HaCaT细胞中MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3这两条信号通路激活。IL-22诱导HaCaT细胞产生HB-EGF蛋白的作用机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3这两条信号通路有关。