JAK-STAT通路调制NF-kB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的:探讨核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB)在H2O3预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-kB的调制.方法:在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300 μmol/LH2O2)损伤细胞的实验模型.应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blotting)测定NF-kB和STAT3的表达水平.结果:用100 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并明显地上调NF-kB和STAT3的表达,NF-kB抑制剂MG-132(10 μmol/L)和JAK2抑制剂AG-490(10 μmol/L)均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-kB表达的作用.结论:JAK-STAT通路调节NF-kB介导的H2O2预处理的细胞保护作用.     

JAK—STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK—STAT通路对NF-κB的调制。方法：在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激（300μmol／LH2O2）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Westem blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用1000μmol／L H2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300panol／L H2O2作用12h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（100μmol／L）和JAK2抑制剂AG-490（10izmol／L）均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用。     

PI3K/AKT通路介导H_2O_2预处理减轻PC12细胞氧化损伤

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定AKT的表达。结果 100μmol H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300μmol H2O2引起的损伤,使细胞存活率从50.2%±4.6%升高至83.8%±3.5%,LDH活性由103%±10.2%下降至68.5%±5.3%,细胞凋亡率由65.5%±4.1%下降至37.1%±2.3%(P<0.01)。100μmol H2O2预处理诱导p-AKT的表达,PI3K抑制剂ly294002阻断了H2O2预处理引起的p-AKT表达。同时ly294002拮抗了H2O2预处理诱导的抗细胞损伤和凋亡作用。结论 H2O2预处理通过PI3K途径引起AKT的活化,PI3K/AKT通路的活化介导了H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。     

热休克蛋白参与NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用

目的探讨热休克蛋白(HSP)是否参与核因子-κB(NF-κB)介导的H2O2预处理的细胞保护作用。方法应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,免疫细胞化学染色法测定NF-κB的核转移。结果100μmol/LH2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300μmol/LH2O2引起的细胞凋亡,并可明显地上调PC12细胞NF-κB的表达及促进NF-κB的核转移,同时也能上调HSP70和HSP90的表达。NF-κB的抑制剂TPCK阻断NF-κB表达,并显著地阻断H2O2预处理的细胞保护作用及HSP70和HSP90的表达。结论HSP70和HSP90参与NF-κB介导的H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

ERK1／2-STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的:探讨ERKI/2一STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用.方法:在PCI2细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300 pmot/L H202)损伤细胞的模型.应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变;应用碘化丙啶(P1)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印记法(Western blotting)测定P-ERKI／2和P-STAT3的表达水平.结果:100μmol/L H2O2预处理PCI2细胞90 rain可明显抑制300μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并激活ERKl/2和STAT3;ERKI/2抑制剂U0126和JAK2抑制剂AG一490(10μmol/L)均可明显地阻断H2O2预处理引起的细胞保护作用;U0126(10μmol/L)亦能明显地抑制H2O2预处理对STAT3的上调作用.结论:H202预处理能激活PCI2细胞的ERKl/2-STAT3信号转导旁路,这可能是预处理的细胞保护机制之一.     

硫化氢对抗过氧化氢对PC12细胞的损伤作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对PC12细胞的损伤作用及有关机制。方法应用H2O2在PC12细胞建立氧化应激损伤的实验模型;应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体。结果200μmol和400μmolH2O2作用PC12细胞24h均使细胞的存活率明显降低及凋亡率显著增加,200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增多。当NaHS与H2O2(200或400μmol/L)共同作用于PC12细胞时,NaHS(100～400μmol/L)浓度依赖性的阻断H2O2引起PC12细胞的存活率降低及细胞凋亡率增加。400μmolNaHS明显地阻断200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP降低及ROS增多。结论H2S能明显地保护PC12细胞对抗H2O2引起的损伤,阻断MMP降低及ROS生成可能是H2S的细胞保护机制之一。     

H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应

目的研究H2O2诱导的PC12细胞（又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）氧化应激损伤中,热量限制（caloric restriction,CR）参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR＋H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。     

中成药甘舒胶囊对抗氧化应激诱导的肝细胞损伤

目的探讨中药甘舒胶囊对抗氧化应激损伤的肝细胞保护作用。方法在Chang肝细胞建立氧化应激(H2O2)损伤的实验模型,应用甲氮甲唑蓝(MTT)检测法。PI染色流式细胞仪(FCM)及Hoechst 33258染色法等检测甘舒对抗H2O2诱导Chang肝细胞的细胞毒性及凋亡的细胞保护作用。结果H2O2呈浓度依赖性地降低Chang肝细胞的存活率;在自身不影响Chang肝细胞存活率的浓度(1～100μg/ml)范围内,甘舒呈浓度依赖性地对抗300μmol/L和400μmol/LH2O2对肝细胞存活率的抑制作用;另方面,在0～800μmol/L浓度范围内,H2O2呈浓度依赖性地增加Chang肝细胞的凋亡率;100μg/ml、500μg/ml和1mg/ml的甘舒本身不影响肝细胞的凋亡率,但却能显著地抑制300μmol/LH2O2诱导的肝细胞凋亡。结论中药甘舒胶囊具有抗氧化应激作用,可显著对抗氧化应激(H2O2)诱导的肝细胞损伤。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对H2O2预处理的适应性细胞保护作用的影响

3580不影响H2O2预处理的适应性细胞保护作用.50 μmol/L H2O2具有比H2O2预处理更强的激活p38的作用,H2O2预处理能明显地抑制50 μmol/LH2O2对p38的激活作用.结论 H2O2预处理抑制高浓度H2O2对p38的激活可能是其适应性细胞保护机制之一.     

p38丝裂原活化蛋白激酶对H2O2预处理的适应性细胞保护作用的影响

3580不影响H2O2预处理的适应性细胞保护作用.50 μmol/L H2O2具有比H2O2预处理更强的激活p38的作用,H2O2预处理能明显地抑制50 μmol/LH2O2对p38的激活作用.结论 H2O2预处理抑制高浓度H2O2对p38的激活可能是其适应性细胞保护机制之一.     

ERK1/2－STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的：探讨ERK1/2-STAT3通路在H₂O₂预处理导致的适应性细胞保护中的作用。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的模型。应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变；应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；免疫印记法(Western blotting) 测定p-ERK1/2和p-STAT3的表达水平。结果：100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可明显抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并激活ERK1/2和STAT3；ERK1/2抑制剂UO126和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可明显地阻断H₂O₂预处理引起的细胞保护作用；UO126（10 μmol/L）亦能明显地抑制H₂O₂预处理对STAT3的上调作用。结论：H₂O₂预处理能激活PC12细胞的ERK1/2-STAT3信号转导旁路，这可能是预处理的细胞保护机制之一。     

JAK-STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-кB（nuclear factor-кB, NF-кB）在H₂O₂预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-кB的调制。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Western blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（10 μmol/L）和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可抑制H₂O₂预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-кB介导的H₂O₂预处理的细胞保护作用。     

PI3K/Akt signaling pathway-induced heme oxygenase-1 upregulation mediates the adaptive cytoprotection of hydrogen peroxide preconditioning against oxidative injury in PC12 cells

Both the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt pathway and heme oxygenase-1 (HO-1) create a survival signal against oxidative stress-induced injuries. Although we have demonstrated that hydrogen peroxide (H2O2) preconditioning confers adaptive cytoprotection against oxidative stress-induced injury in PC12 cells, it remains unknown whether these defense systems are involved in the protective effect of H2O2 preconditioning. In the current study, PC12 cells were preconditioned with 100 μM H2O2 for 90 min, followed by 24 h recovery and subsequent exposure to 300 μM H2O2 for further 12 h. The findings showed that preconditioning with 100 μM H2O2 upregulated HO-1 expression. Zinc protoporphyrin IX (ZnPP), a selective inhibitor of HO-1, at a concentration of 15 μM, significantly attenuated H2O2 preconditioning-elicited cytotoxicity, apoptosis, oxidative stress and mitochondrial membrane potential (ΔΨm) loss in PC12 cells. In addition, H2O2 preconditioning enhanced phosphorylation of Akt. Treatment with 25 μM LY294002, a selective inhibitor of PI3K, for 20 min before H2O2 preconditioning blocked not only H2O2 preconditioning-induced HO-1 induction, but also the protective effect of H2O2 preconditioning against cytotoxicity. The present study provides novel evidence for the effect of preconditioning with H2O2 on the induction of HO-1, which contributes to the adaptive cytoprotection of H2O2 preconditioning against oxidative stress-induced cellular injury via a PI3K/Akt-dependent mechanism in PC12 cells.     

硫化氢对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗β-淀粉样蛋白(β-amylmoid)诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学变化,罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。结果淀粉样多肽β25-35(Aβ25-35)引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增大,同时引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成率显著增加。当NaHS与Aβ25-35共同作用于PC12细胞时,NaHS浓度依赖性地阻断20μmol/LAβ25-35引起PC12细胞的存活率降低,100μmol/LNaHS显著地降低20μmol/LAβ25-35引起PC12细胞的凋亡率并阻断Aβ25-35引起的MMP降低及ROS升高。结论H2S的供体NaHS具有细胞保护作用,能对抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡,此作用可能与其阻断MMP降低及ROS生成增多有关。     

低剂量亚硝酸钠预适应对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的:研究亚硝酸钠(NaNO2)预适应对过氧化氢(H2O2)损伤鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用。方法:分别以系列浓度的NaNO2作用PC12细胞24h,细胞的增殖活性采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和活细胞计数法,用Hoechst 33258染色计数凝集和碎核细胞占细胞总数的百分比为细胞凋亡率。以3mmol/L浓度的NaNO2预适应细胞24h后,加或不加一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo),再用1.1mmol/L H2O2暴露6h,细胞存活率检测用MTT、凋亡检测用流式细胞术和Hoechst 33258/PI染色。比色法测定丙二醛(MDA)含量和酶活性。结果:NaNO2对PC12细胞增殖作用呈典型的β型曲线,最大低促效应出现在第24h,最大低促效应剂量为1.4mmol/L,最大促增殖效应为对照组的156%,未观察到不良效应水平(NOAEL)为6mmol/L,细胞增殖半数抑制率(IC50)值为45mmol/L。用3mmol/L NaNO2预适应24h,然后用1.1mmol/LH2O2暴露6h,细胞增殖活性比单纯H2O2组明显升高(P0.05)。用1.1mmol/L H2O2暴露6h,非预适应组细胞凋亡率为44.9%;3mmol/L NaNO2预适应组细胞凋亡率为19.1%,差异显著(P0.05),这种现象可以被一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo)所抑制。3mmol/L NaNO2预适应组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平升高,MDA含量降低(P0.05)。结论:低于6mmol/L NaNO2暴露能够引起PC12细胞的低促效应。低浓度NaNO2预适应,通过降低细胞脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,保护过氧化氢毒害的PC12细胞。亚硝酸盐还原为一氧化氮在细胞保护过程中起关键作用。     

热休克蛋白参与PI3K/Akt 介导H2O2 预处理的抗凋亡作用

目的: 探讨热休克蛋白(HSP)是否参与PI3K/Akt信号通路介导的H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。方法: 利用PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗高浓度H₂O₂诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2) 损伤组;(3)预处理＋损伤组; (4)LY294002＋预处理＋损伤组;(5) LY294002组;(6) quercetin＋预处理＋损伤组;(7) 17-AAG＋预处理＋损伤组;(8) 溶剂对照组。应用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3的活性,免疫印迹法(Western blotting)测定HSP的表达水平。结果: 100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂引起的细胞凋亡,使caspase-3的活性降低,同时上调HSP70和HSP90的表达。HSP70和HSP90的抑制剂quercetin和17-AAG拮抗H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。 PI3K抑制剂LY294002不仅拮抗了H₂O₂预处理抗细胞凋亡的作用,并且抑制H₂O₂预处理对HSP70和HSP90的表达上调。结论: PI3K/Akt通路、HSP70和HSP90均参与H₂O₂预处理诱导的细胞保护作用。并且HSP70和HSP90参与PI3K/Akt信号通路介导H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。