锌7—金属硫蛋白与镉7—金属硫蛋白抗羟自由基保护线粒 …

制备了Ｚｎ７－与Ｃｄ７－金属硫蛋白。分离出大鼠心肌线粒体。用电子自旋共振自旋标记方法测定线粒体膜脂流动性及膜蛋白构象,运动性,分析了线粒体Ｃａ＾２＋－Ｍｇ６２＋－ＭＡＴＰ酶活性及＾４５Ｃａ摄入。羟自由基损伤使线粒体膜脂流动性下降,膜蛋白构象改变及运动性降低,线粒体Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋ＡＴＰ酶活性降低及＾４５Ｃａ的摄入活性下降。     

高血压大鼠红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATP酶对Ca^2＋反应的变...

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃｕ＾２＋Ｍｇ＾２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ＾２＋浓度为１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０＾－７ｍｏｌｇ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;Ｃａ＾２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca^2＋—Mg^2＋ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ＾２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ＾２＋存在。在２００μｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟嗪（ＴＥＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的     

花生幼苗下胚轴质膜Ca2+-ATP酶及其对低温胁迫的反应

经６％－１２％ＤｅｘｔｒａｎＴ７０密度梯度离心,获得了纯度较高的７ｄ龄花生幼苗下胚轴质膜制剂,质膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ在反应系统不存在Ｍｇ＾２＋时,可正常表现水解ＡＴＰ的活性,但此活性明显低于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ不受Ｎａ３ＶＯ４抑制,不被Ｋ＾＋激活,而被Ｃｌ＾－抑制,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ的最适,ｐＨ不同于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,低温胁迫显著提高质膜Ｃ     

小麦根液泡膜上存在两种类型ATPase

采用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ柱层析的方法在小麦根液泡膜中分离出两种ＡＴＰａｓｅ,一种需Ｍｇ＾２＋存在于表现催化活性,受质子通道抑制剂ＤＣＣＤ（二环已基碳二亚胺）的抑制和Ｃｌ＾－的激活,为需Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ,另一种不需Ｍｇ＾２＋就可表现出催化活性,受Ｃａ＾２＋的强烈激活,不受ＤＣＣＤ的抑制和Ｃｌ＾－激活,可能前者与转运质子有关,后者与Ｃａ＾２＋的转运有关。     

二价金属离子和二硫键还原剂对黑鱼肝膜生长激素受体 …

二价金属离子Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋和Ｍｎ＾２＋能增加重组鱼生长激素（ｂｒＧＨ）与黑鱼肝膜生长激素受体（ＧＨＲ）的相互作用,其最适浓度为８－１２ｍｍｏｌ／Ｌ。在这一浓度范围,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋和Ｍｎ＾２＋能分别使专一结合提高到无二价阳离子存在时的２３０％、１８０％和２００％。通过Ｅａｄｉｅ－Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图对Ｃａ＾２＋结合位点进行动态学分析证明ｂｒＧＨ－受体复合物存在一个低亲和的Ｃａ＾２＋     

平滑肌肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白功能调节

在有Ｃａ＾２＋和钙调蛋白存在时,肌球蛋白轻链激酶催化肌球蛋白磷酸化,促使肌动蛋白激活的肌球蛋白（肌动球蛋白）Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性显增加,然而,肌旧白磷酸水平化与Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性显增加,然而,肌球蛋白磷酸化水平与Ｍｇ＾２＋＝ＡＴＰ酶之间的关系是非线性的,原肌球蛋白可以进一步增加Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶的活性,但仍不改变它们之间的非线性关系,肌球蛋白边激酶的分成肽抑制剂抑制了肌球蛋白磷酸化     

若干蝙蝠葛碱衍生物对人红细胞膜Ca^2＋—Mg^2＋——ATPase活力的影响

本文测定了数种蝙蝠葛碱衍生物对钙调素激活的人红细胞膜Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ和的影响,结果表明,这些化合物对该酶都有不同程度的抑制作用,其机制表现为性抑制,过量的ＣａＭ能完全逆转这些化合物所引起的抑制。当Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ被胰蛋白酶限制性酶解完全活化后,其活力不再受ＣａＭ激活,但仍被这些化合物所抑制。     

高血压大鼠红细胞膜Ca~（2＋），Mg~（2＋）─ATP酶对Ca~（2＋）反应的变化及Mg~（2＋）的作用

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃａ２＋及Ｍｇ２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ２＋浓度为１０－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０－７ｍｏｌ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０－４ｍｏｌ／Ｌ,Ｃａ２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶激动剂的Ｍｇ２＋有其最适激活浓度,在ＷＫＹ大鼠、ＲＨＲ及Ｗｉｓｔａｒ大鼠均为４．５ｍｏｌ／Ｌ;（３）高浓度Ｍｇ２＋（３６．０ｍｏｌ／Ｌ）可以逆转高浓度Ｃａ２＋对该酶的抑制作用。以上结果表明,底物Ｃａ２＋浓度的变化对Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的催化活性影响极大,该酶活性的促发及维持必须有适宜浓度的Ｍｇ２＋。高血压时此酶对Ｃａ２＋的敏感性增高,且Ｍｇ２＋对酶保护作用更为明显。本结果提示,胞内高浓度Ｃａ２＋不仅是高血压发生的原因之一,并可能与其发展及恶化有关。     

哮喘豚鼠肺内ADM表达变化及对离体气管条张力的作用

目的：通过观察肾上腺髓质素（ADM）mRNA在豚鼠哮喘模型肺内的表达及对哮喘豚鼠离体气管条张力的影响,研究ADM在支气管哮喘（简称哮喘）发病机制中的作用。方法：用原位杂交方法检测ADM mRNA在豚鼠哮喘模型肺内的表达,用组胺诱导豚鼠离体气管条收缩后,观察不同浓度的ADM对其收缩作用影响。结果：原位杂交结果显示正常及哮喘豚鼠肺内均有ADM mRNA的表达,但哮喘组较正常组明显增多（P＜0．05）,ADM可抑制组胺诱导的哮喘豚鼠离体气管条的收缩,并呈量效关系,当浓度达10^-8mol/L时抑经达到最大,而且即使加大ADM的浓度,抑制率未继续明显增加,并对致敏气管螺旋条的舒张作用明显大于正常气管螺旋条。结论：哮喘时,肺内ADM mRNA的表达明显增多,ADM可抑制组胺诱导的豚鼠离体气管条的收缩,浓度为10^-8mol/L时抑制率达到最大。提示ADM在哮喘发病过程中起重要作用。     

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号传递系统的作用

为了探讨阿片肽与细胞表面受体结合后所产生的生物效应及其机制 ,用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽 ( MENK)及抗 δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞 ( NS- 1 ) ,然后测定蛋白激酶A( PKA) ,蛋白激酶 C( PKC)活性及三磷酸肌醇 ( IP3 )含量 .研究结果表明 ,NENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .MENK对 PKC影响呈双向反应 ,0 .1 μmol/L MENK可以升高胞浆 PKC活性 ,但却明显降低胞膜 PKC活性 ;在 MENK浓度为 1 0μmol/L时则情况刚好相反 .1 μmol/L的 MENK可明显降低胞浆及胞膜 PKC活性 ,抗体可拮抗这种下调作用 .MENK可降低细胞内 IP3 的含量 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .由此可以推论 :MENK在与 δ阿片受体结合后 ,可以经过多种信号传导系统来调节细胞功能 ,从而产生不同的生物效应 .     

肾上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管和微淋巴管的作用

应用活体显微电视录象技术,观察上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管微淋巴管的作用及其对去甲肾上腺素,内皮素作用的是结果表明,ＡＤＭ直接扩张肠系膜各级微血管和向一淋巴管,拮抗ＮＥ和ＥＴ引起的微血效及微循环血流液态的异常改变。ＡＤＭ的上述作用可被一氧化氮生成抑制剂Ｎ＾９－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ－ＮＮＡ）显著抑制。     

超氧阴离子通过提高[Ca2+]cyt调节保卫细胞K+通道和气孔运动

氧化信号参与了许多生理过程的调控。用膜片钳和激光共聚焦显微镜,采用可以产生O2^ 的甲基紫精处理蚕豆(Vicia faba L)保卫细胞,测定了O2^ 对气孔运动调节过程中胞质Ca^2 离子浓度和细胞质膜K^ 通道活性的变化,结果表明甲基紫精可以促进气孔的关闭,乙二醇四乙酸酯(Ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetra-acetic acid,EGTA)、抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)和过氧化物酶(Catalase,CAT)可以消除小于10^-5mol／L甲基紫精对气孔运动的影响;10^-2和10^-5mol/L的甲基紫精可使保卫细胞胞质Ca^2 浓度有不同程度提高,并伴随有钙震荡。蚕豆气孔保卫细胞质膜内向K^ 通道可被咆外甲基紫精抑制,而这种抑制和[Ca^2 ]cyt有关。推测甲基紫精产生的O2^-对蚕豆气孔运动的调节,主要是通过O2^ 诱导的胞内游离Ca^2 浓度的升高,从而抑制了通过保卫细胞质膜K^ 内向电流。     

Phosphorylation of two sites on smooth muscle myosin. Effects on contraction of glycerinated vascular smooth muscle

Contraction of glycerinated porcine carotid artery smooth muscle in response to calcium (20 microM), calmodulin (10 microM), and MgATP was associated with phosphorylation of the 20,000-dalton myosin light chain (LC20) to an average stoichiometry of 1.47 mol of PO4/mol of LC20. Tryptic and chymotryptic phosphopeptide maps of the mono- and diphosphorylated forms of LC20 purified from skinned muscles demonstrated the presence of a single phosphopeptide in all cases. Phosphoamino acid analysis indicated that the monophosphorylated form contained primarily phosphoserine, whereas the diphosphorylated form contained both phosphoserine and phosphothreonine. Thiophosphorylation of LC20 by adenosine 5'-O-(thiotriphosphate) resulted in the incorporation of 1 mol of thiophosphate into phosphoserine. Thiophosphorylated LC20 could be subsequently phosphorylated at a threonine residue to a stoichiometry of 1.7 mol of PO4/mol of LC20 by incubation in the presence of MgATP, calcium, and calmodulin. The extent of multiple site phosphorylation of LC20 was dependent upon both the ionic strength and the free Mg2+ concentration in the muscle bath; increasing either ionic strength (0.07-0.15 M) or [Mg2+] (1-20 mM) resulted in lower stoichiometries of LC20 phosphorylation. The effect of multiple site phosphorylation on contraction was examined in muscles which were seqentially phosphorylated at serine followed by threonine. Full activation (21 degrees C) of both isometric force (1.4 newtons/cm2) and unloaded shortening velocity (0.016 L0/s) was achieved following thiophosphorylation to 1.1 mol of PO4/mol of LC20. No further activation of either isometric force (1.5 newtons/cm2) or unloaded shortening velocity (0.015 L0/s) occurred following phosphorylation to 1.7 mol of PO4/mol of LC20.     

15-KETE对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用

目的观察15-酮基二十碳四烯酸（15-ketoeicosatetraenoic acid,15-KETE）对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth cells,PASMCs）膜电压门控钾离子通道的活性的影响。方法将12只雄性SD大鼠随机分成对照组和缺氧组,每组6只。采用急性酶分离法（胶原酶Ⅰ型和弹性酶）获得SD大鼠单个PASMCs,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对两组大鼠膜电位（Em）、膜电容（Cm）、电压门控钾电流（IKv）的影响。结果 （1）慢性缺氧使大鼠PASMCs的Em显著去极化（P〈0.05,n=6）,明显地抑制了大鼠PASMCs的IKv（P〈0.01,n=6）,对大鼠PASMCs的Cm无影响;（2）较高浓度的15-KETE（1×10^-7 mol/L、1×10^-6 mol/L）可使慢性缺氧大鼠PASMCs去极化;（3）15-KETE（1×10^-8 mol/L～1×10^-6 mol/L）可浓度依赖性地抑制慢性缺氧大鼠PASMCs的IKv;（4）较高浓度15-KETE（1×10^-7 mol/L、1×10^-6 mol/L）对缺氧PASMCs IKV的平均阻抑率显著高于常氧PASMCs。结论缺氧未改变15-KETE引大鼠PASMCs去极化及浓度依赖抑止IKv的特性,且缺氧可能改变了PASMCs对15-KETE的敏感性。     

ATP/Mg2+-dependent binding of vincristine to the plasma membrane of multidrug-resistant K562 cells

To study the mechanism of active drug efflux in multidrug-resistant cells, the interaction between [3H] vincristine (VCR) and plasma membrane prepared from an adriamycin (ADM)-resistant variant (K562/ADM) of human myelogenous leukemia K562 cells was examined by filtration method. [3H]VCR bound to the plasma membrane prepared from K562/ADM cells, but not from parental K562 cells, depending on the concentrations of ATP and Mg2+. Adenosine 5'-O-(3-thio)triphosphate was not effective in the binding of [3H]VCR, indicating that ATP hydrolysis is required for this binding. Dissociation constant (Kd) of VCR binding was 0.24 +/- 0.04 microM in the presence of 3 mM ATP. In the absence of ATP, specific binding of VCR to K562/ADM membrane was also observed; however, the affinity (Kd = 9.7 +/- 3.1 microM) was 40 times lower than that observed in the presence of ATP. The high affinity VCR binding to K562/ADM membrane was dependent on temperature. The bound [3H]VCR molecules were rapidly released by unlabeled VCR added to the reaction mixture at 25 degrees C. The high affinity binding of [3H]VCR to K562/ADM membrane was inhibited by VCR, vinblastine, actinomycin D, and ADM, to which K562/ADM cells exhibit cross-resistance, whereas 5-fluorouracil and camptothecin, to which K562/ADM cells are equally sensitive as K562 cells, did not inhibit the [3H]VCR binding. Furthermore, verapamil and other agents, which are known to circumvent drug resistance by inhibiting the active efflux of antitumor agents from resistant cells, could also inhibit the high affinity [3H]VCR binding. These results indicate that ATP/Mg2+-dependent high affinity VCR binding to the membrane of resistant cells closely correlates with the active drug efflux of this resistant cell line.     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．     

生物肽SP对NK细胞NKG2D/NKG2A受体表达的影响

选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A的基因表达和膜表达。10-14～10-8 mol/L的SP在体外可明显增强NK92-MI细胞的杀伤活性。该浓度范围的SP均可上调NKG2D/NKG2A的mRNA水平;10-14～10-8 mol/L的SP均上调NKG2D/NKG2A的膜表达,较低浓度（10-14 mol/L）的SP仅使NKG2D表达上调,而NKG2A表达无明显变化;SP刺激NKG2D膜表达增加的程度高于NKG2A。生物肽SP调节NK细胞功能性受体NKG2D/NKG2A的表达,可能是SP增强NK细胞杀伤活性的一种原因。