已酮可可碱对大鼠肠缺血/再灌注致肺损伤的保护作用

目的　探讨已酮可可碱对肠缺血 /再灌注致肺损伤的保护作用。方法　Wistar大鼠 4 0只随机分成 5组 :①假手术组 ;②肠缺血 /再灌注 2h组 ;③肠缺血 /再灌注 4h组 ;④肠缺血 /再灌注 2h PTX治疗组 ;⑤肠缺血 /再灌注 4h PTX治疗组。测定各组动物血清TNF -α水平 ,肺组织MPO、MDA活性及观察病理形态。结果　肠缺血 /再灌注致肺损伤组血清TNF -α水平及肺组织MPO、MDA活性明显高于假手术组 (P <0 0 5 ) ,肺组织损伤明显。PTX治疗后 ,血清TNF -α水平及肺组织MPO、MDA活性明显低于相应各时间点 (P <0 0 5 ) ,肺组织损伤减轻。结论　已酮可可碱对肠缺血 /再灌注致肺损伤有保护作用。     

血红素加氧酶1与诱导型一氧化氮合酶在肠缺血再灌注损伤大鼠肾组织中的表达

目的：探讨血红素加氧酶1与诱导型一氧化氮合酶在肠缺血再灌注致肾损伤中的表达及其作用。 方法：实验于2005—06／11在武汉大学人民医院麻醉学研究室完成。选择健康雄性Wistar大鼠66只，建立钳闭大鼠肠系膜上动脉缺血再灌注模型，随机数字表法分为正常组（6只）．假手术（0min，2，6，18，24h）组．各时相点6只，缺血再灌注（0min，2，6，18，24h）组，各时相点6只。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测肾组织中血红素加氧酶1和诱导型一氧化氮合酶的表达和分布，观察各组血清肌酐、尿素氮含量变化，同时光镜观察肾组织病理形态学改变。 结果：纳入大鼠66只，均进入结果分析。①缺血再灌注2h组血红素加氧酶1的表达（A）与假手术组相比明显增加（0．221&;#177;0．028，0．009&;#177;0．023，P〈0．05），缺血再灌注18h达到高峰（0．326&;#177;0．030）。②缺血再灌注0min组诱导型一氧化氮合酶的表达（A）比假手术组明显增加（0．172&;#177;0．024，0．075&;#177;0．036，P〈0．05）；缺血再灌注6h达到高峰（0．278&;#177;0．014）。③缺血再灌注后血清肌酐、尿素氮较正常组明显增加（P〈0．05或P〈0．01），且诱导型一氧化氮合酶表达的变化与血清肌酐、尿素氮之间呈正相关（r=0．612，0．728，P〈0．01）。④病理学检查显示肠缺血再灌注后肾组织明显损伤。 结论：肠缺血再灌注损伤时，血红素加氧酶1和诱导型一氧化氮合酶参与了远隔脏器-肾损伤／抗损伤机制。     

大鼠肠缺血／再灌注时给予谷氨酰胺和精氨酸能引起PPAR-γ和iNOS表达差异

以往的研究表明，在大鼠肠缺血／再灌注模型中，诱导型一氧化氮合酶（iNOs）有毒害作用，而过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR7）则有保护作用。美国休斯顿医学院的研究人员认为，肠缺血后给予谷氨酰胺和精氨酸可调节PPAR-γ和iNOS的表达。研究人员利用肠缺血／再灌注加空肠袋模型，于缺血60min后行再灌注6h。实验组用PPAR-γ阻滞剂G9662或iNOS阻滞剂1400W预处理。     

中性粒细胞粘附与肠缺血再灌注肺损伤

肠梗阻、低血压休克、严重多发性创伤在临床上比较常见，病程及治疗中都会有肠缺血再灌流（Ｉｓｃｈｅｍｉａ┐Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ／Ｒ）的病理生理学改变。小肠Ｉ／Ｒ在临床上也不少见，常可出现急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）、低血压和肾功能衰竭等并发症，文...     

茶多酚对大鼠肠缺血再灌注肺损伤的保护作用

目的：观察茶多酚对大鼠肠缺血再灌注肺损伤的保护作用，并了解这种作用是否有剂量依赖性。 方法：实验于2004—03／07在大连医科大学药理教研室实验室进行。①取雄性SD大鼠60只，随机分为模型组、假手术组及茶多酚100．0，50．0，25．0和12．5mg／kg组。②各茶多酚组大鼠舌下静脉注射相应剂量的茶多酚，模型组、假手术组给予等容量生理盐水；20min后通过夹闭肠系膜上动脉60min、再灌注120min，建立肠缺血再灌注损伤模型，假手术组不夹闭肠系膜上动脉。③再灌120min后，各组取血及肺组织，测定血清及肺组织中超氧化物歧化酶、丙二醛和一氧化氮浓度，以及肺灌流液中蛋白质含量，光镜下观察肺组织形态学改变。 结果：60只大鼠进入结果分析。①与模型组相比，茶多酚12．5，25．0，50．0和100．0mg／kg组大鼠血清中超氧化物歧化酶活力分别增加38．55％，125．37％，181．58％和185．34％（P〈0．05，0．01）；丙二醛浓度分别降低55．83％，63．56％，74．20％和80．61％（P〈0．01）；一氧化氮浓度分别降低11．66％，31．97％，43．24％和84．78％（P〈0．05，0．01）。（参与模型组相比，茶多酚12．5，25．0，50．0和100．0mg／kg组大鼠肺中超氧化物歧化酶活力分别增加8．12％（P〉0．05），116．89％，186．24％和233．59％（P〈0．01）；丙二醛含量分别降低34．54％（P〉0．05），72．69％，75．10％和80．72％（P〈0．01）；一氧化氮浓度分别降低30．25％，54．6l％，92．87％和92．67％（P〈0．01）。③与模型组相比，茶多酚12．5，25.0，50．0和100．0mg／kg组大鼠肺灌流液蛋白质含量分别降低55．98％，70．57％，75．03％和82．00％（P〈0．01）。④镜检发现模型组肺有明显组织形态学损伤，茶多酚各组较模型组呈剂量依赖性减轻肺部改变。 结论：茶多酚对肠缺血再灌注所致肺损伤有剂量依赖性的保护作用，可能与其自由基消除作用，减轻中性粒细胞聚集及活化，抑制大量一氧化氮释放有关。     

磷脂酶A2激活介导肠缺血—再灌注后的急性肺损伤

目的：探讨肠缺血再灌注（ＩＲ）损伤对远隔器官肺脏的损伤机制。方法：采用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成肠ＩＲ损伤模型，收集动物损伤前后血和肺组织灌注液，利用放射免疫分析法测定样品中降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及６酮前列腺素Ｆ１α（６ｋｅｔｏＰＧＦ１α）含量，同时经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果：ＩＲ损伤组动物４小时后全部死亡，而假手术组动物在２４小时内全部存活。肺部光镜和电镜发现损伤后肺小血管和介质中白细胞明显增多，肺泡内炎性分泌物增加，肺泡腔关闭，肺泡壁明显增厚。ＩＲ损伤后，肺灌洗液中６ｋｅｔｏＰＧＦ１α明显高于假手术组，而血中ＣＧＲＰ明显高于伤前水平；使用磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）抑制剂或其代谢产物合成的阻断剂可以明显延长动物存活时间，并明显减少肺内白细胞的数量，同时还对６ｋｅｔｏＰＧＦ１α和ＣＧＲＰ有不同的影响。结论：ＰＬＡ２激活及其代谢产物的释放在肠ＩＲ急性肺损伤中发挥重要作用。     

肢体缺血再灌注致肺损伤及丹参的保护作用

目的 通过动物实验方法观察丹参对肢体缺血再灌注所致肺损伤的保护作用。方法110只Wistar大鼠随机分成正常对照、缺血3h和缺血3h用丹参三个组。实验组于缺血、再灌注1、2、3和24h取材,光镜下对比观察和组织学评估。结果肢体缺血和再灌注后,实验组肺泡隔增厚、水肿,毛细血管扩张、充血,大量多核白细胞浸润、贴壁,部分肺不张。用丹参组的病理改变明显轻于未用丹参组。结论丹参能有效地减轻肢体缺血再灌注所致的肺损伤。     

纳洛酮在大鼠肠缺血再灌流致肺损伤中保护作用的初步研究

目的 探讨纳洛酮在大鼠肠缺血再灌流致肺损伤中的作用。方法 成年雄性SD大鼠,随机分为以下四组：假手术组、肠缺血再灌流组及分别用生理盐水和纳洛酮干预后的肠缺血再灌流组。分别测各组大鼠血浆β-内啡肽及肺组织丙二醛含量、髓过氧化酶活性和肺毛细血管通透性。结果 肠缺血再灌流组血浆β-内啡肽及肺组织丙二醛含量、髓过氧化酶活性和肺毛细血管通透性高于假手术组,而用纳洛酮干预后各指标测定值较生理盐水对照组明显降低。结论 纳洛酮对肠缺血再灌流时肺损伤有明显的保护作用。     

犬肠缺血/再灌注时小肠对早期肠内营养耐受能力的实验研究

目的研究肠道低灌注状态下实施早期肠内营养(EEN)时小肠功能指标及耐受能力的变化。方法健康雄性杂种犬24只,夹闭肠系膜上动脉(SM A)1 h后恢复灌注造成肠缺血/再灌注(I/R)损伤,复流后4 h实施EEN,将瑞代营养液(4 m l.k-g 1.-h 1)经肠黏膜张力计管持续滴注3 h,如果动物出现肠道不能耐受症状(如呕吐、腹泻等)则停止,间隔6 h后再次实施EEN,直至动物肠道能够耐受为止。按随机数字表法将动物分成单纯EEN组、单纯I/R组、I/R后EEN组(I/R+EEN组),每组8只。检测小肠黏膜二氧化碳分压(P iCO2)、D木糖吸收量、小肠腔内压力判定小肠灌注和功能变化。结果肠I/R+EEN组肠道不能耐受发生率(87.5%)和严重程度均显著高于单纯EEN组(0)和单纯I/R组(12.5%)。实施EEN后,与单纯I/R组和单纯EEN组相比,I/R+EEN组小肠腔内压力及肠P iCO2均显著升高,而血浆D木糖吸收量显著降低(P均<0.01)。结论肠I/R能显著降低小肠对EEN的耐受能力,肠I/R后过早(<12 h)实施EEN能加重小肠I/R损伤,并进一步抑制小肠吸收和运动功能。     

NO和iNOS在内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的作用及大黄对其影响

目的 主要探讨一氧化氮（ＮＯ）和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）在内毒素（ＬＰＳ）诱导的大鼠急性肺损伤（ＡＬＩ）的作用机制及大黄对其影响。方法 在雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠利用舌下静脉注射ＬＰＳ复制ＡＬＩ动物模型,动物分为４组：ＬＰＳ组,对照组,大黄治疗组,地塞米松组。观察大体标本,组织病理以及生物学标志：肺湿／干重比,肺泡灌洗液中性粒细胞比,蛋白含量,肺血管通透性和肺泡通透性指数。同时测定血浆ＮＯ和肺组     

Th1/Th2类细胞因子失衡和一氧化氮合酶在内毒素休克性肺损伤中的作用机制

目的　观察内毒素 (LPS)诱导的急性肺损伤 (ALI)大鼠血Th1/Th2类细胞因子浓度以及肺组织一氧化氮合酶 (NOS)活性和NOS基因表达 ,以探讨它们在ALI中的发病机制。方法　采用颈静脉注入LPS复制大鼠急性肺损伤模型 ,用ELISA法检测其外周血单个核细胞产生IFN -γ、IL - 4水平及IFN -γ/IL - 4比值 ;用放射免疫 (RIA)的方法测定LPS注射后大鼠肺组织NOS活性 ;采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测LPS注射大鼠肺组织内源型一氧化氮合酶 (eNOS)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达情况。结果　与正常对照组相比 ,急性肺损伤组外周血PBMC产生IFN -γ水平、IFN -γ/IL - 4比值明显升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 0 1) ,而IL - 4水平差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,同时伴随NOS活性 [( 0 30± 0 0 5 )U/mgpro]明显高于对照组 [( 0 2 4± 0 0 3) ,P <0 0 5 ]。iNOSmRNA表达( 0 70± 0 2 0 )显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,eNOSmRNA表达未见明显变化 (P >0 0 5 )。肺组织病理切片显示大鼠发生ALI。结论　LPS休克肺损伤时 ,体内存在Th1/Th2类细胞因子水平失衡 ,同时伴有NOS活性增高 ,而NOS的主要来源为iNOS基因表达增强     

辛伐他汀纳米粒对脓毒症致急性肺损伤小鼠肺组织iNOS/eNOS平衡的调节及对预后的影响

目的分析辛伐他汀纳米粒对脓毒症致急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(i NOS)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)平衡及预后的影响。方法取45只健康雄性C57/BL6小鼠,随机分为假手术组(开腹,但不结扎穿孔)、模型组(经盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型)和干预组(脓毒症小鼠模型+尾静脉注射辛伐他汀纳米粒制剂),每组各15只。造模后24 h,通过苏木精-伊红染色观察三组小鼠病理形态学改变,采用免疫组织化学法测定三组小鼠肺组织中i NOS和e NOS表达水平,记录小鼠造模1周时的生存状况。结果经苏木精-伊红染色结果发现,假手术组小鼠肺组织无明显病理改变;模型组小鼠肺组织细胞排卵紊乱、局部肺组织完整性受破坏、肺泡间中隔增厚、肺泡腔缩小、肺间质弥漫性水肿、弥漫性中性粒细胞浸润;相比模型组,干预组小鼠肺组织中性粒细胞渗出明显减少、肺组织损伤程度较轻、肺泡完整性较好。模型组肺组织中i NOS表达水平明显高于假手术组,干预组i NOS表达水平明显低于模型组(P<0.01);模型组肺组织中e NOS表达水平明显低于假手术组,干预组e NOS表达水平明显高于模型组(P<0.01)。模型组造模1周时的生存率(6.67%)低于假手术组(93.33%),干预组生存率(66.67%)高于模型组,差异均有显著性(P<0.05)。结论辛伐他汀纳米粒可保护脓毒症致ALI小鼠肺组织损伤,调节i NOS/e NOS平衡,可能是脓毒症致ALI具有保护效应的潜在处理位点。     

米力农吸入对急性肺损伤家兔肺iNOS和eNOS表达的影响

目的:观察米力农吸入对急性肺损伤(ALI)家兔肺iNOS和eNOS表达的影响并探讨其保护机制。方法:将45只家兔随机分为对照组(A组),肺损伤组(B组)和米力农吸入组(C组),每组15只,B和C组采用特制多功能撞击机制成急性肺损伤模型,C组经气管给予米力农雾化吸入,分别在0、1、2、3、4h时间点行血气分析,4h后处死动物,测定肺湿干比(W/D)、血清NO、肺组织丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)含量,免疫组化法检测肺组织iNOS和eNOS表达。结果:与A组相比,B组损伤后PaO2、SaO2显著降低(P<0.05),肺iNOS表达显著增强,eNOS表达明显降低(P<0.05),肺W/D、血清NO、肺MDA和MPO含量显著增高(P<0.05)。C组米力农吸入后,与B组比较,PaO2、SaO2明显升高(P<0.05),肺iNOS表达显著降低,eNOS表达明显升高(P<0.05),肺W/D、血清NO、肺MDA和MPO含量明显降低(P<0.05)。结论:米力农通过抑制肺iNOS异常高表达和增加eNOS表达对急性肺损伤有保护作用。     

Effect of valproic acid on acute lung injury in a rodent model of intestinal ischemia reperfusion

Objectives

Acute lung injury (ALI) can develop during the course of many clinical conditions, and is associated with significant morbidity and mortality. Valproic acid (VPA), a well-known anti-epileptic drug, has been shown to have anti-oxidant and anti-inflammatory effects in various ischemia/reperfusion (I/R) models. The purpose of this study was to investigate whether VPA could affect survival and development of ALI in a rat model of intestinal I/R.

Methods

Two experiments were performed. Experiment I: Male Sprague-Dawley rats (250-300 g) were subjected to intestinal ischemia (1 h) and reperfusion (3 h). They were randomized into 2 groups (n = 7 per group) 30 min after ischemia: Vehicle (Veh) and VPA (300 mg/kg, IV). Primary end-point for this study was survival over 4 h from the start of ischemia. Experiment II: The histological and biochemical effects of VPA treatment on lungs were examined 3 h (1 h ischemia + 2 h reperfusion) after intestinal I/R injury (Veh vs. VPA, n = 9 per group). An objective histological score was used to grade the degree of ALI. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to measure serum levels of interleukins (IL-6 and 10), and lung tissue of cytokine-induced neutrophil chemoattractant (CINC) and myeloperoxidase (MPO). In addition, the activity of 8-isoprostane was analyzed for pulmonary oxidative damage.

Results

In Experiment I, 4-h survival rate was significantly higher in VPA treated animals compared to Veh animals (71.4% vs. 14.3%, p = 0.006). In Experiment II, ALI was apparent in all of the Veh group animals. Treatment with VPA prevented the development of ALI, with a reduction in the histological score (3.4 ± 0.3 vs. 5.3 ± 0.6, p = 0.025). Moreover, compared to the Veh control group the animals from the VPA group displayed decreased serum levels of IL-6 (952 ± 213 pg/ml vs. 7709 ± 1990 pg/ml, p = 0.011), and lung tissue concentrations of CINC (1188 ± 28 pg/ml vs. 1298 ± 27 pg/ml, p < 0.05), MPO activity (368 ± 23 ng/ml vs. 490 ± 29 ng/ml, p < 0.05) and 8-isoprostane levels (1495 ± 221 pg/ml vs. 2191 ± 177 pg/ml, p < 0.05).

Conclusion

VPA treatment improves survival and attenuates ALI in a rat model of intestinal I/R injury, at least in part, through its anti-oxidant and anti-inflammatory effects.     

内毒素耐受大鼠肺部iNOS和NO表达的动态变化和意义

目的 研究内毒素血症时内毒素耐受大鼠肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)的动态变化.方法 72只SD大鼠随机分为对照组(NC组)和内毒素耐受组(ET组).腹腔注射小剂量内毒素(LPS),第1天0.1 mg/只;第2～5天0.5 mg/只,建立内毒素耐受模型.NC组腹腔注射同等剂量生理盐水.最后一次注射LPS 72 h后,两组均腹腔注射大剂量LPS(10 mg/kg).各组按注射LPS前(0 h),注射后2、4、6、12、24 h分为六小组(n=6).通过比色法(即Griess法)测量肺组织iNOS、NO、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)含量.同时在第6、12 h取大鼠左下肺组织行组织病理形态学观察.用SPSS13.0统计软件进行统计分析.结果 NC组大鼠在大剂量LPS刺激后肺组织iNOS和NO在4 h开始升高,6～12 h达到高峰(P＜0.05);MDA和MPO含量在2 h即开始升高,4～12 h达到高峰(P＜0.05).ET组大鼠在大剂量LPS刺激前肺组织iNOS、NO、MDA和MPO即有微量升高(P＞0.05),大剂量LPS刺激后肺组织iNOS、NO、MDA和MPO亦有升高,但与NC组相比明显降低(P＜0.05).病理学检查显示,ET组肺组织损伤明显较NC组减轻.结论 内毒素耐受时,大剂量内毒素血症引起的大鼠肺部损伤减轻与肺部iNOS、NO低表达有关.     

脊髓损伤后细胞凋亡及iNOS的表达

目的研究大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的特点与诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达规律以及两者之间的关系。方法成年SD大鼠随机分为 3组 ,分别造成轻、中、重度脊髓急性损伤模型 ,于损伤后不同时间点 (4h、8h、1d、3d、7d、1 4d、2 1d)处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化 ,用免疫组化染色检测iNOS、Bax阳性细胞 ,TUNEL法标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变随着损伤程度的增加而加重。免疫组化结果显示正常对照组及单纯椎板切除组神经元、神经胶质细胞、室管膜细胞、血管内皮细胞极少量表达iNOS ;损伤后 8小时上述细胞iNOS表达增加 ,7天达高峰 ,1 4天仍较明显 ,2 1天降低。Bax表达及TUNEL标记阳性细胞的时间分布特点与iNOS相似 ,7天达高峰 ,阳性细胞以白质中胶质细胞为主。iNOS表达与脊髓损伤程度及神经细胞凋亡指数间存在正相关 (r=0 41 4 ,P <0 0 1 ;r=0 854 ,P <0 0 1 )。结论大鼠脊髓损伤后iNOS和Bax表达增强 ,凋亡神经细胞大量出现。iNOS表达与脊髓原发损伤程度及损伤后神经细胞凋亡指数间存在正相关     

甘草酸二铵对百草枯中毒大鼠肺组织TLR -4 mRNA 表达的影响

目的探讨甘草酸二铵（ DG）对百草枯中毒（ PQ）致急性肺损伤（ ALI）大鼠肺Toll样受体4（TLR-4） mRNA、NF-κB mRNA表达及对血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）浓度的影响。方法将50只SD大鼠采用随机数字表法分为PQ组（n＝20）、DG治疗组（n＝20）和正常对照组（S组,n＝10）,PQ组和DG治疗组予百草枯100 mg/kg灌胃1次,DG组于灌胃后立即腹腔注射DG 50 mg/kg（1次/d）,S组和PQ组注射等剂量的生理盐水,观察至48 h。取肺组织检测肺湿干质量比（ W/D）;采用RT-PCR法检测肺组织TLR-4 mRNA、NF-κB mRNA的表达情况;ELISA法测定血清IL-6、IL-17浓度。另选择健康SD大鼠50只,分组及各组处置方法同上,观察其7 d内死亡率。结果与S组比较,PQ组W/D、TLR-4 mRNA、NF-κB mRNA表达均明显升高（P＜0．01）,血清IL-6、IL-17亦升高（P＜0．01）;DG组干预后,W/D降低, TLR-4 mRNA、NF-kB mRN、AIL-6及IL-17有所降低,与PQ组比较差异有统计学意义（ P＜0.01或P＜0．05）。 PQ组大鼠7 d死亡18只（死亡率90％）,DG组死亡8只（死亡率40％）,NS组无死亡（死亡率0）。结论甘草酸二铵可抑制PQ致ALI大鼠肺组织TLR-4 mRNA、NF-κB mRNA及血清IL-6、IL-17浓度的过度表达,从而减轻肺损伤程度。     

高氧所致小鼠急性肺损伤时一氧化氮合成酶的表达

目的探讨一氧化氮合成酶(INOS,eNOS)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用.方法将54只小鼠置于密闭的氧气室暴露于＞95%的高氧,另18只小鼠呼吸正常空气作为对照组;分别于24、48 h和72 h取出小鼠,评价肺损伤程度同时进行支气管肺泡灌洗液细胞分类和计数;免疫组织化学测定肺组织iNOS和eNOS的表达及组织分布.结果高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺汽灌洗液细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞数均明显增加;免疫组织化学研究显示iNOS和eNOS蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和巨噬细胞的胞浆中,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高.结论在高氧环境下一氧化氮合成酶通过促进肺组织中一氧化氮合成从而在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.