癫痫持续状态大鼠海马内Notch通路对HIF-1α调控位点的研究

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及Notch信号通路下游基因HES1在发育期癫痫持续状态(SE)大鼠海马内的表达变化,探寻Notch信号通路对于HIF-1α的调控位点。方法 176只21日龄SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)致SE模型组(PTZ组)、Notch信号通路特异性抑制剂(DAPT)干预组(DAPT组)。PTZ组大鼠腹腔注射PTZ溶液制作SE模型,NS组注射等剂量的生理盐水作为对照,予安定腹腔注射终止SE发作。造模成功后分别于0.5、1、2、4、8 h断头取脑分离双侧海马组织,采用RT-PCR法检测HES 1、HIF-1αm RNA的表达;于2、4、8、12、24 h断头取海马,采用Western blot法检测蛋白的表达。DAPT组在开始造模前30 min腹腔注射DAPT溶液,分别于造模成功后2 h、8 h断头取海马组织,采用RT-PCR法检测2 h时HES1、HIF-1αm RNA的表达,用Western blot法检测8 h时蛋白的表达。结果 SE后的各个时间点,大鼠海马内HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达是增高的,与同一时间的NS组相比差异有统计学意义(P?0.05);与同一时间点的PTZ组比较,DAPT组的HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在发育期大鼠SE发作后的海马内,HES1基因可能是Notch信号通路中对HIF-1α表达的调控位点。     

持续惊厥后不同年龄大鼠海马凋亡调控基因表达的变化

目的：比较惊厥持续状态（SC）后不同年龄大鼠海马凋亡调控基因 bcl-2 和 c-Jun 表达的变化,探索未成熟脑耐受惊厥性脑损伤的分子基础。方法：制作幼年和成年 Wistar大鼠 SC 模型,同时设置正常对照组和实验对照组,每组 8 只。于 SC 后3 h,6 h,12 h,1 d,3 d和7 d分别处死动物,免疫组化、原位杂交和 RT-PCR 测定海马 bcl-2 和 c-Jun 蛋白及mRNA的表达。结果：SC 后幼年组和成年组海马 c-Jun 蛋白表达均升高,SC 后 6 h 达高峰,显著高于正常对照组（P<0.01）,12 h 后开始回落。幼年 SC 组 c-Jun 蛋白表达于 SC 后 1 d 已降至幼年正常对照组水平,而成年 SC 组直至 SC 后 7 d 仍显著高于成年正常对照组（P<0.05）。SC 后 6 h,12 h,1 d,3 d和 7 d 成年 SC 组 c-Jun 蛋白表达均显著高于幼年 SC 组（P<0.05）。SC 后幼年组和成年组海马 c-Jun mRNA 的表达与其蛋白表达规律类似。SC 后幼年组和成年组海马 bcl-2 蛋白及mRNA表达升高不明显。结论：SC诱导海马凋亡促进基因 c-Jun 表达增高,幼年鼠较成年鼠表达明显为弱,且持续时间短,这可能是未成熟脑抵抗惊厥性脑损伤的机制之一。SC 未能明显诱发凋亡抑制基因 bcl-2 的强表达,其表达受年龄影响小。     

甘珀酸对戊四氮点燃癫痫大鼠海马GFAP和Cx43表达的影响

目的探讨甘珀酸（CBX）对戊四氮（PTZ）点燃大鼠星形胶质细胞及其缝隙连接的影响。方法30只SD雄性大鼠随机分为3组：对照组（NS组），点燃组（K组），点燃后干预组（CBX组），每组10只大鼠。NS组每日腹腔注射生理盐水。K组和CBX组大鼠每日腹腔注射PTZ 35mg／kg至点燃，再分别腹腔注射生理盐水、CBX（10mg／kg）干预3d。观察三组大鼠惊厥行为的变化，以及免疫组化染色方法观察GFAP、Cx43在海马内的表达变化。结果①PTZ点燃癫痫大鼠出现自发性抽搐，CBX抑制了点燃大鼠的自发性抽搐，各组自发性抽搐次数为K组〉CBX组〉NS组（P〈0．05）。②点燃癫痫大鼠GFAP—IR星形胶质细胞增多，胞体肥大，突起丰富，Cx43的表达增加；CBX干预后，GFAP—IR星形胶质细胞无明显改变（P〉0．05），Cx43的表达减少（P〈0．05）。结论CBX对点燃大鼠星形胶质细胞的增生活化无影响，但抑制Cx43的表达和癫痫活动，提示胶质细胞及其缝隙连接在癫痫的发生发展过程中具有重要作用，CBX有潜在的抗惊厥或协助抗惊厥的作用。     

营养不良对幼鼠癫癎持续状态后海马神经发生影响的研究

目的　探讨发育期营养不良伴发癫持续状态对海马神经发生的影响。方法　采用5 溴脱氧尿苷 (BrdU)标记新生细胞 ,β微管蛋白Ⅲ ( βⅢtubulin ,TuJ1)和胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)分别标记早期神经元和胶质细胞的单、双标免疫组织化学染色 ,观察幼鼠海马的神经发生。结果　营养良好 (N)组和营养不良 (M)组幼鼠癫发作的潜伏时间差异无显著性 [( 12 4± 2 6)min与 ( 11 9± 2 9)min ,P >0 0 5 ]。组织学染色示各组幼鼠海马部位均无明显的神经元丢失。各组幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数 ,营养不良 +惊厥组 (MS组 ,3 74± 18)和营养良好 +惊厥组 (NS组 ,3 12± 2 4)分别明显高于营养不良组 (M组 ,3 0 3± 2 0 )和营养良好组 (N组 ,2 69± 18) (P均 <0 0 1) ,而M组和MS组分别明显高于N组和NS组 (P均 <0 0 1)。BrdU阳性细胞中 ,约有 60 %的BrdU阳性细胞同时表达神经元特异性标记物TuJ1,5 %～ 10 %的BrdU阳性细胞同时表达神经胶质特异性标记物GFAP。结论　早期营养不良没有改变幼鼠在海藻酸致过程中惊厥的易感性和行为表现。营养不良和癫持续状态均可促进幼鼠海马齿状回新生细胞的增殖 ,营养不良伴发癫持续状态时这种增殖将进一步加强 ,而且大多数新生细胞分化为早期     

对癫痫持续状态的新认识

癫痫持续状态（Statusepileptics,SE）属临床危症。伴有较高的病死率和致残率,其中一半以上的患者过去从无癫痫或惊厥史,而是一次急性脑部疾病的重要表现。近年来．有关SE的预后及其防治措施又增加了许多新认识．现简要介绍于后。癫痫持续状态的定义SE是指：1．痴痴持续发作超过30min,或2．两次或两次以上的间断发作,而发作间期意识状态始终不清醒超过30min者,过去对成年人的SE无明确时间概念,近年多数学者主张应与小儿一样,将超过30min的连续发作定为SE。1993年国际抗癫联盟已正式确认SE的上述30min时限。SE有多种表现形式：…     

黄芪对扩张型心肌病大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨黄芪对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法应用多柔比星腹腔注射建立DCM大鼠模型;模型组大鼠按照不同的给药方法随机分为黄芪组和模型对照组,黄芪组应用黄芪颗粒加双蒸馏水灌胃,模型对照组和正常对照组用定量的双蒸馏水灌胃,三组均1次/d灌胃4周。12周末超声测量各组大鼠心脏左心室射血分数(LVEF),逆转录聚合酶链反应法检测Cx43 m RNA,采用免疫组化方法观察Cx43分布。结果与模型对照组比较,黄芪组大鼠心肌Cx43m RNA、Cx43平均灰度值、LVEF均增高,差异均有统计学意义(P均0.05);黄芪组较模型对照组心肌Cx43的分布紊乱有改善。结论黄芪能改善DCM大鼠心肌Cx43表达和分布,并能改善其心功能。     

儿童癫痫持续状态的研究进展

癫痫持续状态(status epilepticus,SE)是一种在儿科常见的威胁生命的神经系统急症,如不及时控制,常导致脑及多器官缺氧缺血性损害,造成继发性永久性脑损伤甚至死亡.积极、迅速、有效控制癫痫发作是挽救患者生命、改善其预后的关键,在儿科领域尤为重要.SE目前最被认可的定义为:每次癫痫发作持续5min以上,或2次以上发作,发作间期神经系统功能未恢复至正常基线.2015年国际抗癫痫联盟(international league against epilepsy,ILAE)更新了SE最新定义,重新确定了各发作类型符合SE诊断及持续发作造成损伤的发作时间,使临床治疗更积极主动,减少合并症及后遗症的产生.该文从目前国内外的研究现状出发,总结了儿童SE的定义及更新、病因、分类、治疗、处置及预后,同时回顾最近几年国内外相关文献,为临床早期识别诊断和临床规范治疗儿童SE提供参考.     

新生期大鼠反复癎性发作对海马神经发生的影响

目的 探讨新生期大鼠反复痫性发作对海马神经发生的影响。方法64只生后1d的Wistar大鼠随机分为惊厥组40只和对照组24只。惊厥组新生鼠在生后1d（P1）、4d（P4）、7d（P7）给予腹腔注射匹罗卡品,制备新生鼠癫痫模型,对照组腹腔注射生理盐水。惊厥组分别在第3次致痫后即刻、第4、14、45天4个时间点处死,各时间点设相应对照组,处死前36h给予惊厥组和对照组大鼠腹腔注射BrdU,用BrdU标记新生细胞,再以NF200双标免疫荧光法标记神经元。结果对照组BrdU标记阳性细胞呈年龄依赖性变化,不同年龄组BrdU阳性细胞的差异有统计学意义（P〈0．01）,惊厥组3次发作后即刻和第4天齿状回BrdU阳性细胞数明显少于相应日龄对照组（P〈0．01）,而发作后14d和45dBrdU阳性细胞数高于相应日龄对照组,发作后14d差异无统计学意义。各时间点惊厥组和对照组大多数BrdU阳性细胞同时表达NF200。结论正常大鼠的神经发生有年龄依赖性,随着日龄增大,齿状回颗粒细胞增生减慢,而新生期反复痫性发作对大鼠不同时期影响不同,反复发作会导致幼鼠早期神经发生减少,而后期神经发生增加,这些新生细胞不仅存在于齿状回,还可见于CA3区及海马以外的某些区域,并可分化为神经元。     

不同丙戊酸负荷量对癫痫持续状态的治疗效果分析

目的了解不同丙戊酸负荷量对癫痫持续状态患儿的治疗效果。方法收集2013年1月1日至2017年12月31日在浙江大学医学院附属儿童医院重症监护室住院治疗的癫痫持续状态患儿的病例资料,根据丙戊酸负荷量进行分组,了解各组患儿癫痫持续状态的控制情况。结果(1)66例癫痫持续状态患儿,包括癫痫36例(54.5%),颅内感染16例(24.2%),缺氧窒息3例(4.5%),颅内肿瘤2例(3.0%),脑发育异常2例(3.0%),颅内出血2例(3.0%),病因不明确5例(7.6%)。(2)所有癫痫持续状态患儿根据不同的丙戊酸负荷量(0 mg/kg,10~15 mg/kg,16~39 mg/kg,40 mg/kg)分为4组,各组间的性别、年龄差异无统计学意义,癫痫持续状态控制时间和癫痫控制情况差异无统计学意义(P=0.402、0.340)。(3)所有患儿予丙戊酸钠应用后都有监测肝功能,无一例患儿出现肝功能损害的表现。结论不同丙戊酸负荷量对于癫痫持续状态患儿的治疗效果无明显差异,并且接受负荷量为40 mg/kg治疗的癫痫持续状态患儿未出现相关不良反应。     

不同剂量甘草酸苷对幼年癫痫持续状态大鼠模型海马组织的保护作用

目的研究不同剂量甘草酸苷对幼年癫痫持续状态(SE)大鼠模型海马组织的保护作用。方法出生18～21 d雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠采用腹腔注射氯化锂和毛果芸香碱制作SE大鼠模型, 按照随机数字表法分为5组:对照组、SE组、SE+低剂量甘草酸苷组、SE+中剂量甘草酸苷组和SE+高剂量甘草酸苷组, 腹腔内注入不同剂量的甘草酸苷(20 mg/kg、40 mg/kg和60 mg/kg)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SE大鼠模型血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平;定量实时PCR(qRT-PCR)检测SE大鼠模型海马组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平;蛋白印迹法检测海马组织中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色和尼氏染色观察神经元损伤情况;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测神经元的凋亡情况;透射电子显微镜观察线粒体的损伤情况。采用单因素ANOVA法进行各组之间均数检验, 然后采用Tukey法进行两两比较。结果与对照组比较, SE大鼠模型血清中TNF-α[(3...     

MicroRNA-132拮抗剂对匹罗卡品诱导的幼年大鼠癫癎持续状态的影响

目的 探讨microRNA-132 拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年Sprague-Dawley（SD）大鼠癫癎持续状态（SE）的影响。方法 将3 周龄SD 大鼠分为癫癎模型组、microRNA-132 拮抗剂组和microRNA-132拮抗剂阴性对照组,每组15 只。MicroRNA-132 拮抗剂及其阴性对照预处理在造模前24 h 进行,利用氯化锂-匹罗卡品建立幼年SD 大鼠SE 模型。通过行为学观察各组大鼠SE 发作潜伏期及SE 诱导成功率;Lado 幼鼠癫癎评分观察各组大鼠抽搐发作的严重程度;脑电图监测各组大鼠癫癎样放电的频率及波幅,并统计各组死亡率。结果 在实验各组中,SE 诱导成功率差异无统计学意义（P > 0.05）;与microRNA-132 拮抗剂阴性对照组和癫癎模型组比较,microRNA-132 拮抗剂组大鼠造模以后达到SE 的潜伏期明显延长（P P P 结论 microRNA-132拮抗剂预处理对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD 大鼠SE 发生和发展具有抑制作用,抑制microRNA-132 有可能成为SE 药物治疗的潜在靶点和新方向。     

环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对癫癎持续状态大鼠脑内主穹隆蛋白表达的影响

目的 观察环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对癫癎持续状态大鼠脑内主穹隆蛋白(MVP)表达的影响,探讨其在治疗难治性癫癎中的作用及可能机制,为难治性癫癎的新药治疗提供理论依据。方法 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为空白对照组(n=16)、癫癎模型组(n=22)和塞来昔布干预组(n=22),氯化锂-匹鲁卡品诱发大鼠癫癎持续状态模型成功后,各组均有16只大鼠纳入实验。采用免疫组化法和Westernblot法检测各组大鼠额叶皮质区及海马区MVP的表达情况。结果 癫癎模型组大鼠脑内MVP的表达水平较空白对照组显著增高(PP结论 塞来昔布可降低MVP在癫癎持续状态大鼠脑组织中的高表达,有望为治疗难治性癫癎提供新方法 。     

儿童癫(癎)持续状态治疗进展

癫(癎)持续状态(status epilepticus,SE)是小儿时期最常见的危急重症之一.近年来,对于其定义、易忽视的发作形式、药物治疗及脑电图监测的作用不断有新的认识.本文着重对于SE定义、诊断、治疗等方面的新进展进行综述,并介绍国外难治性SE的最新治疗方案.     

儿童癫痫持续状态治疗进展

癫痫持续状态（status epilepticus,SE）是小儿时期最常见的危急重症之一。近年来,对于其定义、易忽视的发作形式、药物治疗及脑电图监测的作用不断有新的认识。本文着重对于SE定义、诊断、治疗等方面的新进展进行综述,并介绍国外难治性SE的最新治疗方案。     

Ketogenic diet in 3 cases of childhood refractory status epilepticus

IntroductionRefractory status epilepticus (RSE) in children is associated with a significant risk of death or neurological morbidity. Recently attention has been drawn to the ketogenic diet (KD) as an acute treatment, as it has shown promise in controlling seizures in otherwise refractory status epilepticus in several cases. We have listed these and reviewed all cases of KD used in RSE at our centre. KD was given as 4:1 fat:carbohydrate-protein solution.ResultsA 3-year-old girl with RSE due to Hemiconvulsion-Hemiplegia Epilepsy syndrome. KD was instigated on day 6. Seizures stopped with ketosis on day 7.A 10-year-old boy rapidly developing RSE. After months a mitochondrial disorder was discovered. KD was tried twice with severe side-effects but no seizure control.11-year-old healthy boy with RSE as FIRES. On KD seizures stopped for 24 h one day after reaching ketosis. He improved over 3–4 weeks.DiscussionKD was efficient in two of three cases of RSE. The non-responder had severe side-effects and proved to have a mitochondrial disorder which is arguably a contraindication for KD.More studies are needed to prove efficacy of KD in RSE, to define optimal timing of KD and possible contraindications for KD in RSE.     

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目的探讨难治性癫癎持续状态(RSE)的临床特征,提出可能早期预测RSE的因素。方法回顾性对比分析2001-01—2004-03重庆医科大学附属儿童医院52例癫癎持续状态(SE)住院患儿的临床资料。结果(1)52例SE中,29例呈RSE。(2)23例SE中22例为强直-阵挛(GTCS)发作,1例为混合发作;29例RES中14例为GTCS发作,2例强直性发作,4例部分运动性发作,1例复杂部分性发作,8例混合性发作。(3)52例中,23例非RSE病例对安定和(或)苯巴比妥治疗有效。RSE组中,药物治疗有效19例,其中对安定和(或)苯巴比妥治疗有效15例(78·9%);安定+硫喷妥钠1例(5·3%);氯硝安定1例(5·3%);利多卡因2例(10·5%)。结论(1)在儿童SE中,RSE发生率高。(2)局限性发作、强直发作、混合性发作多提示SE可能呈RES。(3)安定静脉注射联合苯巴比妥肌注是治疗SE的首选用药。对首次使用安定不敏感的RSE,重复使用的有效率低,可尽早考虑换用二线抗癫癎药物,利多卡因不失为治疗RSE的有效方法。     

Emergency management of the paediatric patient with generalized convulsive status epilepticus

The present guideline paper addresses the emergency management of generalized convulsive status epilepticus (CSE) in children and infants older than one month of age. It replaces the previous statement from 1996, and includes a new treatment algorithm and table of recommended medications, reflecting new evidence and the evolution of clinical practice over the past 15 years. The document focuses on the acute pharmacological management of CSE, but some issues regarding supportive care, diagnostic approach and treatment of refractory CSE are discussed.