骨髓间充质干细胞治疗小型猪急性心肌梗死的实验研究

目的：研究自体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）经冠脉内注射治疗急性心肌梗死的效果。方法：先以球囊阻塞法制成小型猪急性心肌梗死模型。取骨髓体外培养并扩增MSC，标记后经冠脉注入，1个月后核素心肌显像检测相对心肌梗死面积、心肌灌注评分和射血分数、经导管检测左室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压（LVEDP）、压力升高最大速率（LV＋dp／dtmax）和压力下降最大速率（LV—dp／dtmin）。并以NOGA电机械标测细胞移植前和移植后心肌缺血面积，免疫荧光法分析MSC的植入和分化情况。结果：和对照组相比，细胞治疗组射血分数[（44．1±4．3）％ vs （39．0±5．2）％，P〈0．05]、心肌灌注评分[（30．0±5．3）vs（41.8±8．8），P〈0．01]、相对心肌梗死面积[（28．6±4．7）％ vs （33．5±3．4）％，P〈0．05]、LV＋dp／dtmax[（1818±117）mm Hg／s vs （1611±115）mm Hg／s，P〈0．01，mmHg=0．133kPa]、LV—dp／dtmin[（1801±89）mmHg／s vs （1618±66）mmHg／s，P〈0．01]均显著增加，LVEDP[（9．4±1．7）mmHg vs（12．6±2．8）mmHg，P〈0．05]显著降低。病理检查发现细胞移植术后1月，原梗死心肌相关区域即可见带MSC标记物的新生心肌和血管，且该部分心肌表达阳性的肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。结论：MSC体外培养扩增后经冠脉植入可在心肌梗死小型猪心肌梗死相关区域分化为具有生理功能的新生心肌和血管组织，可改善急性心肌梗死猪的心功能。     

经冠脉移植自体骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死的实验研究

目的　观察骨髓间充质干细胞 (MSC)植入急性心肌梗死 (AMI)区的转归及治疗作用。方法　通过冠脉转运的方法将幼猪自体骨髓MSC移植至AMI区 ,8周后观察MSC的分化、促血管生长情况 ,用核素门控心肌灌注显像观察心肌灌注的改善及心脏功能变化。结果　移植的细胞表达β肌球蛋白重链 (β MHC)和连接蛋白Connexin4 3,8周后 ,治疗组心肌灌注显像明显改善 ,毛细血管密度、左室射血分数均明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。结论　骨髓MSC经冠脉转运在心肌微环境下可向心肌细胞分化 ,并能促血管生成及改善心功能     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的研究进展

<正>心肌梗死(myocardial infarction,MI)是指心肌的缺血性坏死,已成为当今社会严重威胁人类健康的疾病之一。尽管临床上保守的药物治疗、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)和外科冠状动脉旁路移植手术等治疗方法的不断提高,但都无法逆转梗死期坏的心肌坏死。     

经冠脉移植自体骨髓间充质干细胞对急性心肌梗死后心功能的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)植入幼猪急性心肌梗死(AMI)区对心肌灌注及心功能的影响.方法通过冠脉转运方法,将5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的幼猪自体骨髓MSC植入心肌梗死区,8周后行99mTc-MIBI门控心肌灌注显像评价心肌灌注及心功能的变化.结果移植的MSC可通过毛细血管内膜并转化为心肌样细胞;8周后移植的MSC在心肌内微环境诱导下可心肌化及血管化;治疗组射血分数明显提高(32.75%vs49.86%,P＜0.001).结论MSC移植通过促进血管及心肌再生,改善心肌灌注及功能.     

骨髓间充质干细胞和骨髓单个核干细胞移植治疗大鼠心肌梗死的对比研究

目的观察髓间充质干细胞（MSCs）和骨髓单个核干细胞（BMMNCs）移植对急性心肌梗死后大鼠左心功能的影响及存活情况,比较两种干细胞移植的优劣性。方法雌性Lewis大鼠45只按随机抽签法分3组：对照组、MSCs组、BMMNCs组。结扎前降支制备心肌梗死模型,MSCs组和BMMNCs组均注射等数量（2×10^6）雄性MSCs和BMMNCs,对照组注射等体积的培养基。4周后超声检测左心功能、左心室前壁厚度,免疫原位杂交检测雄性鉴别基因sry片段的表达。结果MSCs组和BMMNCs组与对照组相比：左心室射血分数分别增加22．57％、24．09％（P=0．000）,MSCs组和BMMNCs组之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室前壁厚度增加（2．6±0．5）mm和（2．5±0．3）mm对（1．8±0．4）mm（P=0．000）;免疫原位杂交显示MSCs组与BMMNCs组sry表达阳性,对照组阴性。阳性细胞的数量相比较,BMMNCs组高于MSCs组（66．50±6．59比46．67±4．64,P=0．000）。结论MSCs和BMMNCs移植均能改善大鼠急性心肌梗死后左心功能,减轻左心室重构;移植4周后在受体心肌内存活干细胞数量BMMNCs优于MSCs。     

骨髓问充质干细胞移植对急性肺损伤大鼠的治疗作用

急性肺损伤（Au）是急性呼吸窘迫综合征的前期表现,严重时可发展为多器官功能障碍综合征,具有较高的发病率及病死率。目前对于ALI的治疗主要以机械通气和对症治疗为主,但病死率仍居高不下。随着干细胞研究的深入,骨髓问充质干细胞（BMSCs）对ALI的治疗作用被逐渐认可。在大量研究的基础上,本研究归纳了BMSCs通过增殖分化、抑制炎症反应、免疫调节等方面治疗ALI的机制与特点。     

心肌梗死应用骨髓间充质干细胞治疗时不同移植途径对疗效的影响分析

目的探讨采用骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死时不同移植途径对治疗效果的影响。方法选取在2005年1月至2011年12月间到我院诊治的33例心肌梗死患者,将33例患者随机分为两组,A组患者17例,B组患者16例,A组患者采用冠脉移植方法进行移植,B组患者采用心内膜移植方法进行移植,对两组不同移植途径对患者治疗的过程进行跟踪观察,并将所得实验数据记录。结果 A组17例患者中,手术成功的有13例,手术失败的有4例,B组16例患者中,手术成功的有11例,手术失败的有6例。采用心内膜移植方法的效果较为显著,对于患者的帮助较大。结论在对心肌梗死患者进行治疗的过程中,对其采用不同的移植途径,对于患者的治疗效果也有一定的差别,其中,采用心内膜移植手术的效果较为显著,对于促进患者病情的改善帮助较大,值得在临床推广应用。     

骨髓间充质干细胞移植到心肌梗死大鼠对心肝功能的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)移植到心肌梗死大鼠后在心肝脏器的分布及对其功能的影响.方法 建立心肌梗死大鼠模型,1周后将标记的MSCs通过大鼠舌下静脉注射至体内,细胞移植4周后通过组织学观察其在心肝脏器的分布,并通过心脏超声及血生化检查观察两脏器的功能情况.结果 移植细胞主要集中于心肌梗死区域,且少量迁移至肝脏组织.实验组的心功能指标LVEDD、LVESD、左心室EF、左室FS均明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组肝功能指标ALT、AST、ALP明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而2组之间ALB及TBIL并无明显差异(P>0.05).结论 MSCs经静脉注射可顺利分布于心肌梗死组织改善心脏功能,且可迁移至肝脏组织,可能对肝功能也具有一定的改善作用.     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死中血管内皮功能及心功能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的安全性和有效性,为临床应用提供些理论依据。方法收集40例急性心肌梗死的患者的临床资料,分为BMMSC移植组（ n ＝20）和PCI组（ n ＝20）,同时于本院健康体检者中选取20例为正常组（ n ＝20）。分别于干细胞移植术前、干细胞移植术后24 h、1月、3月、6月测定血管内皮功能激活的标志物ISCAM-1、SVCAM-1、SE-selection来评价内皮功能,用彩色多普勒超声仪器及6 min步行实验评定心功能。结果移植组和PCI组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著高于正常组（ P ＜0．05）,6个月后移植组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著低于PCI组（ P ＜0．05）,且2组均显著低于术前（ P ＜0．05）,高于正常组（ P ＜0．05）。6个月后移植组EF和6 min行走试验显著高于PCI组（ P ＜0．05）,且均低于正常组（ P＜0．05）。结论骨髓间充质干细胞移植对于患者心功能的恢复效果较为理想,表明骨髓间充质干细胞移植能够对心肌梗死患者的心室重构有促进作用,且显著优于冠状动脉介入方式。     

移植自体骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死

目的探讨心内膜注射导管应用于干细胞移植治疗心肌梗死的可行性。方法将移植组和观察组分别经导管注射梗死心肌内移植体外扩增的自体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）和生理盐水,移植前后、6周及3个月超声评价左心功能。结果 MSCs移植数量平均为（3.81±0.09）×10^7个;左室射血分数正常对照组为（69.3±2.5）%,心肌梗死后降为（34.9±0.9）%,移植后3个月升至（61.9±1.8）%,超声提示室壁运动增强;与观察组相比,移植组左室收缩末压、左室舒张末压及左室压力最大上升/下降速率改善更明显（均为P〈0.01）。结论进行自体骨髓干细胞经冠脉移植治疗冠心病、心肌梗死具有抑制左室重构、改善心脏功能的作用。     

微创法联合导入骨髓间充质干细胞及碱性成纤维细胞生长因子基因对急性心肌梗死心功能的影响

目的观察经冠脉联合导入骨髓间充质干细胞（MSCs）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因对急性心梗心功能的影响。方法开胸结扎法制作小猪急性心肌梗塞模型（11只），1周后行冠状动脉造影，随机分为对照组和实验组，分别经冠脉导入生理盐水10ml，含1&#215;10^7MSCs的生理盐水10ml和pcDNA3-bFGF2000ug。于心梗前、心梗后1周以及心梗后5周行心脏超声检查，心梗后5周再次测定左室舒张末压。结果所有动物均成功建立急性心肌梗死模型，心梗后1周左室射血分数明显下降，5周后实验组心功能较对照组改善。结论联合导入骨髓间充质干细胞及碱性成纤维细胞生长因子基因可改善急性心肌梗死的心功能。     

阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床研究

目的观察阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床疗效及安全性。方法将80例心肌梗死患者随机分为对照组40例和试验组40例。对照组予以阿托伐他汀钙每次20 mg,qd,口服,治疗1个月;试验组在对照组治疗的基础上,予以骨髓间充质干细胞移植。观察2组患者的临床疗效、炎症因子水平、心功能及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为92.50%(37例/40例)和82.50%(33例/40例),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组和对照组的肿瘤坏死因子-α分别为(1.36±0.85)和(2.54±0.77)μg·L^-1,白细胞介素-6分别为(5.28±0.76)和(9.86±1.22)ng·L^-1,白细胞介素-8分别为(16.38±4.69)和(21.54±5.47)ng·L^-1,高敏C反应蛋白分别为(3.64±1.08)和(5.74±1.29)mg·L^-1,左心室舒张末期内径分别为(40.26±5.29)和(45.34±5.20)mm,左心室收缩末期内径分别为(53.36±5.41)和(60.42±5.37)mm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组患者的药物不良反应均以轻度转氨酶升高为主,试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为7.50%和5.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床疗效显著,其可显著降低患者的炎症因子水平,改善心功能,且不增加药物不良反应的发生率。     

大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离与培养

目的 建立体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法.方法 应用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞传代培养.倒置显微镜下观察细胞形态及生长特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞表面标志物,取第3代细胞分别加入成骨、成脂诱导剂并采用碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力.结果 获取的大鼠骨髓间充质干细胞形态呈均一成纤维细胞样,并呈集落样生长.传至第3代细胞纯度可达97%以上,其细胞表型CD29、CD44、CD105、CD166呈阳性表达,CD34、CD80、CD86呈阴性表达.经成骨诱导后细胞碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色呈阳性,成脂诱导后细胞油红O染色呈现阳性.结论 应用全骨髓贴壁法可以分离培养出高纯度的大鼠bMSCs,培养的细胞扩增迅速、生物学特性稳定,是一种较为理想的体外分离扩增bMSCs的培养体系.     

大鼠骨髓间充质干细胞的培养及初步鉴定

目的：探讨体外获取高纯度大鼠骨髓间充质干细胞（ BMSCs ）方法以及通过形态学观察BMSCs在培养过程中是否存在自分化现象。方法应用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs ,倒置显微镜下观察细胞形态,直接荧光抗体染色法鉴定培养的细胞,免疫细胞化学方法鉴定其向神经元的诱导分化。结果原代末期及传代的BMSCs呈均一长梭形生长,第三代荧光抗体染色CD29,CD90阳性表达,神经元特异性标记物Nse（神经元特异性烯醇化酶）表达阳性,BMSCs在未加任何诱导剂时培养30d时发生了自分化现象。结论贴壁培养法是一种有效的获得高纯度BMSCs的方法,在体外培养时BMSCs可发生自分化现象。     

丹参素和克伦特罗对兔骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落的影响

目的以丹参素和克伦特罗为干预药物,观察对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法用梯度密度法分离和培养兔骨髓间充质干细胞,18只兔子随机被分到空白组、丹参素和克伦特罗组。观察形成的骨髓间充质干细胞成纤维样集落数目。并利用骨髓间充质干细胞诱导成骨法和骨髓间充质干细胞表面标志流式分析法鉴定。结果和其它浓度相比,浓度为10ug/ml的丹参素和浓度为1.0ug/ml的克伦特罗有较大生成成纤维样集落数目能力。结论丹参素和克伦特罗对兔骨髓间充质干细胞有增殖作用。     

C57BL6小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定

目的建立一种简单实用的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外分离培养方法,为BMSCs的进一步研究和应用提供实验材料和依据。方法采用直接贴壁法和分阶段更换培养基的方法分离纯化BMSCs,显微镜下观察其形态,应用流式细胞技术鉴定细胞表面标记。结果显微镜下BMSCs贴壁生长后呈梭形,形态均一,经流式细胞仪检测第2代BMSCs高表达CD34、Sca-1,不表达CD45。结论本实验方法能简单高效的获得高纯度BMSCs,且细胞生物学特性稳定,适用于对BMSCs的进一步研究和应用。