米非司酮和利洛司酮诱导异位子宫内膜间质细胞Fas及Annexin V表达的研究

目的 :观察抗孕激素米非司酮和利洛司酮在不同浓度和作用时间下 ,对异位子宫内膜间质细胞Fas和钙磷脂结合蛋白V表达的影响。方法 :应用ELISA法检测培养基上清液中Fas蛋白的浓度。应用流式细胞仪检测AnnexinV表达。结果 :抗孕激素各药物浓度组Fas表达显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且Fas浓度呈时间 剂量依赖性升高。抗孕激素10 - 6 mol/L和 10 - 5mol/L浓度组异位间质细胞AnnexinV表达显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,并呈时间 剂量依赖性增加。抗孕激素 10 - 5mol/L时培养异位子宫内膜间质细胞 4 8h和 72h ,利洛司酮组AnnexinV表达显著高于米非司酮组 (P <0 .0 5 )。结论 :米非司酮和利洛司酮以时间和剂量依赖性方式促进异位子宫内膜间质细胞凋亡。这两种药物可能通过上调Fas蛋白表达促进异位间质细胞凋亡。利洛司酮诱导异位内膜细胞凋亡的作用高于米非司酮     

抗孕激素抑制异位子宫内膜间质细胞EGF和GM-CSF表达

目的:探讨抗孕激素治疗子宫内膜异位症的作用机理。方法:分离、传代培养卵巢异位子宫内膜,培养液中分别加入不同浓度的米非司酮和利洛司酮。ELISA检测间质细胞培养上清液中表皮生长因子(EGF)和巨噬细胞集落生长因子(GM-CSF)浓度;RT-PCR检测异位间质细胞GM-CSF的表达。结果:培养72 h后,米非司酮组培养上清中EGF和GM-CSF的浓度显著高于利洛司酮组(P<0.05);异位间质细胞中GM-CSF mRNA电泳带光密度比值,米非司酮组也显著高于利洛司酮组(P<0.05);而两种抗孕激素的空白对照组EGF和GM-CSF及GM-CSF mRNA的表达均显著高于实验组的10-6 mol/L组和10-5 mol/L组(P<0.05)。结论:米非司酮和利洛司酮均可降调节异位子宫内膜间质细胞生长因子EGF和GM-CSF的表达,抗孕激素可能通过此环节抑制异位子宫内膜间质细胞的生长。     

缺氧、雌激素、孕激素对子宫内膜间质细胞VEGF表达的调节

目的:探讨缺氧、雌激素(E2)、孕激素(P)对子宫内膜间质细胞VEGF表达的调节。方法:体外分离培养正常子宫内膜间质细胞10例,传代至第3代,分为6组:常氧组(对照组),常氧+E2组,常氧+P组,缺氧组,缺氧+E2组,缺氧+P组。常氧组氧分压控制在19～21kPa,缺氧组8～11kPa;雌激素(苯甲酸雌二醇)终浓度为5×10-8mol/L,孕激素(黄体酮)终浓度为5×10-7 mol/L。培养24h后,实时荧光定量PCR检测各组细胞VEGF mRNA表达量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液VEGF蛋白水平。结果:各组VEGF mRNA表达量及蛋白水平分别为:常氧+E2组(1.68,134.68±23.62pg/ml),常氧+P组(1.58,125.05±15.48 pg/ml),缺氧组(1.41,112.88±15.50pg/ml),缺氧+E2组(1.53,122.86±24.79pg/ml),缺氧+P组(1.65,132.65±23.50pg/ml),与常氧组的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:雌激素、孕激素及缺氧共同调节子宫内膜VEGF基因及蛋白表达。     

雌、孕激素和促性腺激素对卵巢癌细胞存活率、Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究雌(E)、孕激素(P)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)对卵巢癌细胞存活率以及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采集卵巢癌患者术中切除的组织标本进行细胞培养,按药物作用不同分为3组:雌激素组(E组)、孕激素组(P组)、人绒毛膜促性腺激素组(HCG组)。MTT法和流式细胞技术检测细胞凋亡率与细胞周期;药物作用48h后,荧光定量PCR法进行相对定量,检测雌、孕激素对癌细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果:(1)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能降低癌细胞的存活率,呈时间-剂量依赖性(P0.001);低浓度(10-8mol/L)雌激素能提高卵巢癌细胞的存活率。低浓度(50U)HCG对卵巢癌细胞存活率的影响不明显。150U/ml和200U/ml HCG作用72h后,对卵巢癌细胞存活率的影响显著(P0.05)。(2)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能促进卵巢癌细胞凋亡(P0.001),但当雌激素浓度为10-8mol/L时,却抑制细胞凋亡(P0.001);HCG对卵巢癌细胞凋亡率的影响无显著差异。雌、孕激素和HCG对卵巢癌的细胞周期均无显著影响。(3)高浓度雌、孕激素(10-4mol/L)能抑制卵巢癌细胞Bcl-2的表达(P0.05),促进Bax的表达(P0.001);低浓度E(10-8mol/L)上调Bcl-2的表达(P0.001),下调Bax的表达(P0.001)。结论:高浓度雌激素与孕激素对体外培养的卵巢癌细胞有促进凋亡、降低存活率的作用,这可能与下调Bcl-2的表达和促进Bax的表达有关。     

米非司酮和孕酮对子宫内膜异位症患者子宫内膜白细胞介素6分泌的影响

目的探讨米非司酮和孕酮对子宫内膜异位症(内异症)患者异位子宫内膜(异位内膜)与正常子宫内膜(在位内膜)白细胞介素6(IL-6)分泌的影响.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测米非司酮浓度为1×10-6mol/L(米非司酮1组)、1×10-4mol/L(米非司酮2组),和孕酮浓度为1×10-7mol/L(孕酮1组)、1×10-5mol/L(孕酮2组)与体外培养的异位内膜细胞和在位内膜细胞上清液作用后的IL-6水平.结果米非司酮可降低异位内膜细胞IL-6水平,米非司酮1组和米非司酮2组的IL-6分为(1914.33±799.28)μg/L和(990.25±58.40)μg/L,两组与空白组比较(下同),差异有极显著性(P＜0.01).孕酮也可降低异位内膜细胞IL-6水平,孕酮1组和孕酮2组的IL-6分为(2575.89±119.75)μg/L和(1736.25±750.89)μg/L(P＜0.01).米非司酮还可使在位内膜细胞IL-6水平降低,其中米非司酮1组和米非司酮2组分别为(346.96±24.32)μg/L和(270.22±36.15)μg/L(P＜0.01).孕酮对在位内膜细胞IL-6水平无明显影响(P＞0.05).结论米非司酮和孕酮可抑制异位内膜和在位内膜细胞IL-6的分泌.     

米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞增殖和核因子κB表达的影响

目的　观察米非司酮和利洛司酮对体外异位子宫内膜间质细胞增殖及核因子κB(NF κB)表达的影响。方法　取卵巢子宫内膜异位囊肿的异位内膜间质细胞进行体外培养 ,根据不同的药物浓度对内膜间质细胞培养液进行分组 :米非司酮浓度为 1× 10 -6mol/L者 ,为米非司酮Ⅰ组 ,浓度为 1× 10 -5mol/L者 ,为米非司酮Ⅱ组 ;利洛司酮的浓度为 1× 10 -6mol/L者 ,为利洛司酮Ⅰ组 ,浓度为 1× 10 -5mol/L者 ,为利洛司酮Ⅱ组。对照组培养液为 0 5 %乙醇。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测米非司酮和利洛司酮对内膜间质细胞的抑制作用。应用免疫细胞化学法和原位杂交法 ,检测各组内膜间质细胞NF κBP6 5蛋白和NF κBP6 5mRNA的表达。结果　米非司酮Ⅰ组、米非司酮Ⅱ组、利洛司酮Ⅰ组、利洛司酮Ⅱ组、对照组内膜间质细胞NF κBP6 5蛋白的表达分别为 (6 3 9± 3 5 )分、(49 1± 2 6 )分、(5 6 2± 2 9)分、(35 3± 2 1)分、(78 7± 2 4 )分 ;NF κBP6 5mRNA的表达分别为 (5 7 3± 3 3)分、(43 2± 3 1)分、(48 4± 2 7)分、(2 8 6± 1 8)分、(82 8± 4 6 )分。NF κBP6 5蛋白及NF κBP6 5mRNA的表达强度 ,均为对照组 >米非司酮Ⅰ组、利洛司酮Ⅰ组 >米非司酮Ⅱ组、利洛司酮Ⅱ组 ;米非司酮组Ⅰ、Ⅱ组 >利洛司酮组     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的影响

目的:探讨Wnt信号通路在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:体外分离培养内异症患者在位内膜间质细胞,应用RT-PCR检测不同浓度(0mol/L,10-14mol/L,10-12mol/L,10-10mol/L,10-8mol/L,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用子宫内膜间质细胞48h和17β-E2(10-10mol/L)作用子宫内膜间质细胞不同时间(0h,12h,24h,48h)后β-catenin mRNA的表达水平。同法检测雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA表达的影响。结果:17β-E2体外能明显促进在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L17β-E2作用48h最明显。ICI182,780能明显抑制雌激素对在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达。结论:Wnt信号通路可能参与了EMs的发生及发展。     

月经血子宫内膜间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞分化的实验研究

目的探讨经血源子宫内膜间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞分化的情况。方法选择2018年1月至2019年6月在新疆医科大学第一附属医院妇科中心体检的健康女性,收集经血并分离经血源子宫内膜间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells, MenSCs)进行培养,未加任何诱导药物的细胞作为对照组,分别在培养液中加入TGF-β1 10 ng/ml,EGF 10 ng/ml,PDGF-BB 10 ng/m1和与不同浓度的雌激素(17-β-雌二醇1×10~(-7) mol/L、1×10~(-8) mol/L、1×10-9 mol/L),培养5 d后检测角蛋白(CK)和波形蛋白(VIM)蛋白与mRNA表达水平的变化,判断MenSCs是否向子宫内膜上皮细胞方向分化。结果经血分离原代细胞培养7 d后,长梭形纤维样细胞数目增多,细胞形成大克隆。随着传代次数的增加,细胞多呈现长梭形纤维样或纺锤状,MenSCs标记分子OCT-4表达率为(94.65±0.21)%、CD-45表达率为(1.86±0.19)%、Strol-1表达率为(94.65±0.21)%;CK mRNA在1×10-9 mol/L组的表达水平显著高于对照组且显著低于1×10~(-8) mol/L组(P 0.05),1×10~(-7) mol/L组中CK mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05)、低于1×10~(-8) mol/L组,但差异无统计学意义(P0.05);VIM mRNA与对照组相比呈现剂量依赖性上调(P0.05)。不同浓度17-β-雌二醇处理后MenSCs均呈现子宫内膜上皮细胞方向的分化。1×10~(-7)mol/L组中CK的荧光强度显著高于对照组细胞(P 0.05)。结论经血源子宫内膜间充质干细胞在适宜的条件下可诱导分化成子宫内膜上皮细胞,为妇产科疾病的研究提供了理想的实验材料与模型。     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

雌孕激素对体外卵泡黄素化颗粒细胞分泌巨噬细胞集落刺激因子的影响

目的　探讨雌、孕激素对卵泡黄素化颗粒细胞 (颗粒细胞 )分泌巨噬细胞集落刺激因子(M CSF)的调节作用。方法　抽取接受卵母细胞单精子显微注射 (ICSI)的 12例妇女的颗粒细胞 ,在不同浓度 ( 0、1× 10 - 7、1× 10 - 6 、1× 10 - 5 、1× 10 - 4、1× 10 - 3 mol L)的雌二醇或孕酮作用下培养 72h ,采用酶联免疫吸附法测定颗粒细胞培养液中的M CSF含量。结果　颗粒细胞在雌二醇或孕酮为 0mol L(即无雌二醇或孕酮作用———基础状态 )的情况下培养 72h后 ,分泌一定量的雌二醇 [( 1 0 2± 0 2 3 )×10 - 7mol L]、孕酮 [( 1 0 0± 0 12 )× 10 - 5 mol L]和少量的M CSF[( 4 7± 15)ng L] ;在 1× 10 - 6 ～ 1× 10 - 3mol L浓度的雌二醇作用下 ,M CSF分泌增加 ,其分泌随雌二醇浓度的增加而增加 ,较基础状态分别增加 2 3、4 5、6 9和 7 9倍 ;在≥ 1× 10 - 6 mol L各浓度的雌二醇作用下 ,M CSF分泌与基础状态比较 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5) ;在 1× 10 - 7mol L浓度的雌二醇作用下 ,M CSF分泌与基础状态比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;在 1× 10 - 7～ 1× 10 - 3 mol L浓度的孕酮作用下 ,M CSF分泌与基础状态比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5)。结论　雌二醇能促进颗粒细胞M CSF的分泌 ,孕酮对颗     

Effects of sex steroids on skin 5 alpha-reductase activity in vitro.

Skin 5 alpha-reductase activity is the major factor influencing the manifestation of androgen excess. Although oral contraceptives have been useful for the treatment of androgen excess, little is known of the independent effects of the various progestins and estrogens on inhibition of skin 5 alpha-reductase activity. We incubated minces of normal genital and pubic skin with physiologic concentrations of 3H-testosterone to assess 5 alpha-reductase activity by its conversion to 3H-dihydrotestosterone. In separate experiments, 5 alpha-reductase activity was assessed before and after the addition of progesterone, medroxyprogesterone acetate, levonorgestrel, norethindrone, 17 beta-estradiol, and ethinyl estradiol. Progesterone, levonorgestrel, and norethindrone demonstrated 97 +/- 5.3%, 47.9 +/- 6.3%, and 59 +/- 4.6% inhibition, respectively, of genital skin 5 alpha-reductase activity at 10(-4) mol/L (P less than .01). Medroxyprogesterone acetate, however, failed to affect 5 alpha-reductase activity at similar doses. Estradiol exhibited 40.8 +/- 14.2% inhibition at 10(-4) mol/L (P less than .01), whereas ethinyl estradiol at concentrations from 10(-8) to 10(-4) mol/L failed to inhibit 5 alpha-reductase activity. We conclude that progesterone and the 19-nor-derivatives inhibit 5 alpha-reductase activity at high doses, whereas medroxyprogesterone acetate does not. Therefore, the 19-nor-progestin component may expand the usefulness of oral contraceptives in the treatment of hirsutism by an inhibitory action on skin 5 alpha-reductase activity.     

雌、孕激素对人宫颈癌HeLa细胞体外生长影响的研究

目的 :探讨雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡的影响。方法 :体外培养人宫颈癌HeLa细胞 ,免疫组化方法 ,测定其雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的表达 ;不同浓度的E2 、P和E2 +P作用于HeLa细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观测HeLa细胞的增殖 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl 2蛋白的表达 ;光学、电子显微镜检测其形态学和超微结构变化。结果 :HeLa细胞PR表达明显高于ER(P <0 .0 1)。E2 对HeLa细胞有明显促生长作用 (P <0 .0 1) ,P和E2 +P对细胞生长有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,增殖抑制率与浓度呈正相关 (P <0 .0 5 )。FCM显示E2 组细胞周期S期比例上升 ,凋亡率下降 ,细胞内bcl 2蛋白表达上升 ;P组和E2 +P组G0 /G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,凋亡率上升 ,细胞内bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。光镜和电镜可见E2 组细胞生长良好 ,P组和E2 +P组可见细胞凋亡的形态学改变。结论 :E2 对宫颈癌HeLa细胞具有促进增殖、抗凋亡作用 ;P则抑制HeLa细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ;E2 +P显示了抑制增殖、诱导凋亡的增强作用。足量的P可拮抗E2 对宫颈癌细胞的促增殖作用。     

C19 adrenal steroids enhance prostaglandin F2 alpha output by human endometrium in vitro

Dehydroepiandrosterone sulfate significantly increased prostaglandin F2 alpha output by fragments of human secretory endometrium during the first and second 24-hour periods of incubation in Ham's F-10 medium containing 10% charcoal-treated calf bovine serum. The effects of dehydroepiandrosterone sulfate were noted at 10(-6) mol/L concentrations, which are close to the normal plasma levels of this compound. For the purpose of comparison, the effects of estradiol at 10(-8) mol/L and those of unconjugated dehydroepiandrosterone, dehydroepiandrosterone acetate, 5-androstene-3 beta, 17 beta-diol, or 5 alpha-dihydrotestosterone were evaluated at 10(-8) to 10(-8) mol/L concentrations in parallel experiments. All of the delta 5-C19 steroids tested enhanced prostaglandin F2 alpha output at 10(-6) mol/L but not at 10(-8) mol/L; 5 alpha-dihydrotestosterone was inactive at 10(-6) mol/L but showed a stimulatory effect at 10(-5) mol/L in two experiments. The stimulation of prostaglandin F2 alpha production by the adrenal steroids was significantly reduced by the antiestrogen 4-hydroxytamoxifen at 10(-6) mol/L (a finding consistent with the reported utilization of the estrogen receptor for their actions on other systems) but was not affected by the antiandrogen 4-hydroxyflutamide at 10(-6) mol/L. Progesterone (10(-7) mol/L) also lowered the effects of dehydroepiandrosterone (10(-6) mol/L) and 5-androstene-3 beta,17 beta-diol (10(-6) mol/L), as well as those of estradiol (10(-8) mol/L). delta 5-C19 steroids at 10(-6) mol/L levels did not antagonize the effect of 10(-8) mol/L estradiol, whereas 5 alpha-dihydrotestosterone reduced it by 50% at these concentrations. The significant effect of 5 alpha-dihydrotestosterone points to potential antiestrogenic effects of the C19 compounds that may be manifested in vivo at particular C19/estradiol concentration ratios. The demonstration of direct estrogenic effects of delta 5-C19 steroids, which are not significantly converted to estrogens in vivo, justifies their use in estrogen replacement preparations and indicates that aromatase inhibitors may not eliminate completely the stimulation of estrogen-responsive breast and endometrial tumors by the patient's adrenal steroids.     

孕激素对成骨细胞增殖和分化的影响

目的观察孕酮和左炔诺孕酮对正常妇女成骨细胞和成骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法,检测应用不同浓度孕酮及左炔诺孕酮刺激上述两种成骨细胞增殖的情况;并采用半定量RT-PCR及免疫组化法,测定c-fos、c-jun基因及其蛋白和骨钙素mRNA表达。结果以浓度为0mol／L的孕酮和左炔诺孕酮为对照,10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)mol／L孕酮分别增加人成骨细胞及MG-63细胞增殖达9．8％、23．0％、32．8％及7．8％、15．6％、21．8％;10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)mol／L左炔诺孕酮分别增加人成骨细胞及MG-63细胞增殖达12．5％、21．9％、32．8％及9．60h,、14．4％、23．0％;孕酮及左炔诺孕酮促进两种成骨细胞c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达,表达呈剂量依赖性;10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)mol／L孕酮和左炔诺孕酮增加人成骨细胞骨钙素mRNA表达分别为12．2％、23．7％、45．5％及18．6％、32．1％、60．30h,;孕酮和左炔诺孕酮对MG-63细胞骨钙素mRNA的表达无影响。结论孕酮和左炔诺孕酮可刺激成骨细胞增殖,增加c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达,促进骨钙素mRNA的表达。     

早期绒毛和足月分娩胎盘组织中雌二醇水平测定及其意义

目的：通过检测自然妊娠早期孕妇外周血及绒毛组织、足月分娩时孕妇外周血、胎盘组织以及脐动脉血中雌二醇（E2）水平,并体外培养滋养层细胞系BeWo细胞,探讨E2的作用。方法：本研究纳入20例非意愿妊娠行妊娠早期流产者、20例足月妊娠行剖宫产者,采用化学发光免疫分析（CLIA）检测妊娠早期流产绒毛组织、孕妇外周血以及足月分娩时孕妇外周血、脐动脉血和胎盘组织中E2水平。单层培养BeWo细胞,用0 mol/L、5×10-7 mol/L、5×10-8 mol/L、5×10-9 mol/L浓度的E2各处理1,3,6,12 h后,用Millicell ESR-2测定其跨膜电阻（TEER）,观察BeWo细胞间紧密连接的完整性。结果：妊娠早期的孕妇血清E2浓度[（3.44±1.30） nmol/L]低于足月妊娠孕妇[（509.78±197.82）nmol/L],差异有统计学意义（t=10.2,P＜0.001）;而绒毛组织中E2浓度[（30.82±13.91）pmol/mg]显著高于足月胎盘组织中E2浓度[（17.21±5.37）pmol/mg],差异有统计学意义（t=4.1,P＜0.001)）。用5×10-7 mol/L的E2处理BeWo细胞12 h后,TEER下降（P＜0.05）;5×10-8 mol/L和5×10-9 mol/L E2处理对BeWo细胞TEER无明显影响（P＞0.05）。结论：妊娠早期绒毛组织中含有高浓度的E2,足月分娩时胎盘组织中E2相对较低;在体外实验中,不同浓度雌激素可能影响胎盘滋养细胞连接功能的维持,5×10-7 mol/L可作为E2处理BeWo细胞的有效浓度。     

苯甲酸雌二醇对离体子宫内膜腺上皮细胞中热休克蛋白70及90表达的影响

目的探讨苯甲酸雌二醇对离体子宫内膜腺上皮细胞中热休克蛋白(HSP)70、90表达的影响。方法采用酶消化法,行原代子宫内膜腺上皮细胞培养。将培养的子宫内膜腺上皮细胞分为对照组(加入正常培养液)、苯甲酸雌二醇组、苯甲酸雌二醇+雌激素拮抗剂ICI182780组和ICI182780组,各组细胞分别作用6、12、18和24h。四甲基偶氮唑蓝还原法测定不同浓度的苯甲酸雌二醇及ICI182780对离体子宫内膜腺上皮细胞生长的影响,免疫组化法及图像分析法测定苯甲酸雌二醇和ICI182780对腺上皮细胞中HSP70、90表达的影响。结果苯甲酸雌二醇可刺激腺上皮细胞生长,细胞增殖率随着作用时间的延长和药物浓度升高而升高,浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,平均细胞增殖率分别为(170±9)%、(207±11)%、(231±12)%、(257±10)%,均明显高于上述各浓度苯甲酸雌二醇作用6h时的细胞增殖率[(117±13)%、(129±10)%、(146±10)%、(176±6)%],差异有统计学意义(P<0.05);浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,苯甲酸雌二醇+ICI182780组与苯甲酸雌二醇组比较,细胞平均增殖率均明显降低,分别为(137±4)%、(145±10)%、(151±9)%、(167±3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。苯甲酸雌二醇可刺激细胞中HSP90的表达,这种刺激作用同样存在药物浓度和作用时间依赖性,苯甲酸雌二醇浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L,作用24h时HSP90表达的相对不透光度分别为(64.8±10.7)%、(75.9±12.6)%、(80.4±8.2)%、(83.2±7.6)%,明显高于相同浓度、相同作用时间时对照组的(28.0±3.3)%、(29.0±5.6)%、(29.0±5.0)%和(30.0±6.4)%,差异也有统计学意义(P<0.05);浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,苯甲酸雌二醇+ICI182780组与苯甲酸雌二醇组比较,腺上皮细胞中HSP90表达明显降低,分别为(28.2±2.1)%、(29.7±3.2)%、(35.0±4.7)%、(34.7±6.5)%。ICI182780不影响雌二醇对腺上皮细胞中HSP70表达的抑制作用。结论苯甲酸雌二醇对子宫内膜腺上皮细胞增殖及HSP90表达的影响是雌激素受体依赖性的,HSP90表达可能有助于苯甲酸雌二醇刺激腺上皮细胞增殖;苯甲酸雌二醇对HSP70表达的抑制作用是非雌激素受体依赖性的,HSP70表达可能对腺上皮细胞的损伤有保护作用。