酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

鮟鱇鱼肝抗氧化肽的酶法制备及对羟自由基的清除作用

以脱脂鮟鱇鱼肝为原料,以水解度及对羟自由基的清除活性为考察指标,用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶进行单酶解筛选试验。以水解度及对羟自由基的清除作用为指标,应用二次正交旋转组合设计试验研究加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备鮟鱇鱼肝抗氧化肽工艺的影响。综合考虑水解度和对羟自由基的清除活性因素,最终确定碱性蛋白酶酶解鮟鱇鱼肝制备抗氧化肽的最佳工艺条件是:加酶量3000U/g,酶解时间6h,pH8.5,酶解温度55℃。该条件下制备的鮟鱇鱼肝抗氧化肽产物水解度和对羟自由基的清除分别为69.52%、76.74%。     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(34)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

复合酶解牦牛乳酪蛋白工艺优化及抗氧化性的研究

为了优化牦牛乳酪蛋白酶解工艺,研究其产物抗氧化活性,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适条件下酶解牦牛乳酪蛋白,以水解度(DH)、DPPH·自由基清除率和超氧阴离子清除率为评价指标,筛选出2种效果最优的单酶进行复配,采用单因素试验及L9(34)正交试验确定最优酶解工艺。结果表明:中性蛋白酶和胰蛋白酶比例为1:2效果最佳,最佳酶解工艺条件为底物浓度5%(w/v),温度42.5℃,p H值7.5,复合酶添加量3%,作用时间150 min,酶解产物抗氧化活性最高,DPPH·自由基清除率达到了64.26%±0.18%,超氧阴离子清除率达到40.34%±0.92%。     

苦荞蛋白酶解产物的抗氧化活性研究

以苦荞麦为原料,通过碱提酸沉法提取蛋白质复合物,并利用单因素试验和响应面软件优化最佳蛋白质提取工艺,优化结果为提取时间50 min,料液比1∶12(g/m L),提取温度55℃,p H 10.0。正己烷去除苦荞麦蛋白质复合物中的黄酮类化合物和脂类。碱性蛋白酶酶解苦荞麦蛋白制备酶解液,研究不同水解度的酶解液的总抗氧化能力,超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH自由基的清除能力,结果表明不同水解度的苦荞蛋白酶解液都具有抗氧化能力。但具有不同的自由基清除活力,其中超氧阴离子自由基的清除活性最大,其次是DPPH自由基清除活性,几乎不具有羟自由基清除活性。     

鹿血多肽的制备工艺及抗氧化能力研究

以新鲜鹿血为原料,利用胰蛋白酶水解制备鹿血多肽,以水解度为指标,在单因素和正交实验的基础上,确定酶解的最佳工艺条件,即加酶量为6%,pH为9,反应温度为37℃,反应时间为4h,水解度为46.72%±0.11%。并进一步对鹿血多肽进行抗氧化能力测定,在高浓度时多肽的羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力较高。     

双酶法制备红豆多肽的工艺优化及其抗氧化活性

为更好利用红豆蛋白资源,研究酶解制备红豆多肽的工艺方法,该试验以红豆蛋白为原料,选取碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶共5种蛋白酶进行水解,以蛋白水解度为指标筛选出作用较佳的复合酶。在单因素试验的基础上,利用正交试验优化红豆蛋白多肽的制备工艺,以DPPH自由基、·OH、O2-·、ABTS+自由基清除率为测定指标,评价红豆蛋白的抗氧化活性。结果表明：5种蛋白酶中,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解制备红豆多肽效果较佳,经过工艺优化后最佳水解工艺为酶活比6∶4,反应pH值7.5,反应温度52℃,底物浓度5%,加酶量800 U/g,反应时间5 h,且抗氧化活性测定结果表明红豆多肽具有一定的抗氧化活性。     

大米源硒代多肽的制备及其抗氧化活性的研究

以富硒碎米为原料,研究了大米含硒蛋白提取条件、硒代多肽的酶法制备及其抗氧化活性.结果表明:NaOH浓度为0.07 mol/L、料液比1∶20 (m/V)、40℃下提取3h时可获得蛋白含量、硒含量分别为80.18％和0.583mg/kg的大米含硒蛋白.相对于木瓜蛋白酶和胃蛋白酶,胰蛋白酶水解大米含硒蛋白可获得具有更高抗氧化活性的多肽.在胰蛋白酶与底物浓度比1∶10,底物质量浓度60g/L,pH9.0,温度50℃的最佳酶解工艺条件下,所得大米硒代多肽的DPPH自由基清除率可达78.19％.因此,碱法提取是一种比较有效的大米含硒蛋白的提取方法,胰蛋白酶水解可获得较高抗氧化活性的大米硒代多肽.     

文蛤多肽的制备及抗氧化活性的研究

通过蛋白酶解的方法制备文蛤多肽(Meretrix meretrix L. peptide,MMP),并对其抗氧化活性进行研究。以蛋白回收率和水解度为指标,对酶解条件进行优化。得到其最佳酶解条件为,胰蛋白酶加酶量0.6%、料液比1∶15(g/mL)、酶解时间6 h。此时,其蛋白回收率与水解度分别为93.55%与29.55%。体外抗氧化试验结果显示,MMP的清除DPPH自由基和羟自由基活性、以及总还原力,随浓度增加而明显增加。其中,MMP清除DPPH自由基活性和清除羟自由基活性的IC_(50)值分别为0.56、7.26 mg/mL。同时,MMP与维生素C在清除DPPH自由基作用方面表现出明显的协同增效作用。在二者质量配比为10∶1时,其协同增效作用达到最佳。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

裙带菜孢子叶仿生酶解工艺优化及酶解肽的抗氧化活性分析

以裙带菜孢子叶为原料,采用仿生酶解工艺制备生物活性肽。以多肽得率和水解度为主要指标,在单因素实验基础上采用响应面分析法优化酶解工艺条件,并评价了酶解肽对三种自由基（DPPH、ABTS、OH）的清除能力。结果表明:裙带菜仿生酶解工艺的最优条件为超声功率720 W、超声破壁时间40 min、料液比1:104 g/mL、胃蛋白酶加酶量为6.1%、酶解时间2.5 h、胰蛋白酶加酶量为5%、酶解时间3 h。在此条件下进行酶解,多肽得率为21.17%,水解度为43.07%。酶解肽对DPPH、ABTS、OH自由基具有较好的清除效果,其IC₅₀值分别为5.71、0.82、1.35 mg/mL。优化的裙带菜孢子叶仿生酶解工艺合理可行,酶解肽具有较好的自由基清除能力,说明其具有良好的抗氧化活性,可作为功能性食品开发的配料。     

蚕蛹蛋白酶解制备抗氧化肽的初步研究

将蚕蛹通过粉碎和丙酮脱脂后,得到蚕蛹蛋白粉.用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶酶解蚕蛹蛋白粉,以DPPH清除能力为指标对酶解过程进行分析,结果表明胃蛋白酶对蚕蛹蛋白有较好的酶解效果.然后通过正交优化胃蛋白酶的酶解条件,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.     

双阳梅花鹿鹿鲜胎多肽的制备及抗氧化活性研究

以双阳梅花鹿鹿鲜胎为原料,通过单因素实验和响应面法优化鹿鲜胎多肽酶解工艺;采用超滤法和凝胶过滤层析法对鹿鲜胎多肽进行分离纯化,同时对鹿鲜胎多肽抗氧化能力进行研究。结果表明:鹿鲜胎多肽最佳酶解工艺为:酶解时间5 h,酶解温度54.5 ℃,pH7.0,加酶量5100 U/g,水解度为34.97%;从鹿鲜胎多肽中分离纯化出3组分子量10 kDa以下的多肽组分:DFP1、DFP2、DFP3;抗氧化研究结果表明DFP1自由基清除能力最强,·OH自由基和O₂-自由基最高清除率分别为81.47%、79.43%。综上,通过响应面法优化的鹿鲜胎多肽酶解工艺方便可行,制备得到的多肽具有较强抗氧化活性,为双阳梅花鹿资源的充分开发利用提供理论基础。     

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。     

响应面法优化葛根蛋白酶解工艺及其体外抗氧化特性分析

目的:优化葛根蛋白酶解工艺并研究其抗氧化特性。方法:以DPPH自由基清除能力、水解度（DH）为评价指标,结合SDS-PAGE电泳结果,筛选最佳水解蛋白酶;在单因素实验基础上,利用Box-Behnken响应面法优化葛根蛋白酶解工艺,并对最佳葛根蛋白酶解物进行抗氧化特性研究。结果:葛根蛋白酶解最佳工艺条件为:酶解温度55 ℃、pH9、酶底比2%,该条件下制备的葛根蛋白酶解物清除DPPH自由基、ABTS+自由基、OH自由基的IC₅₀值分别为0.15、0.38、1.41 mg/mL,还原能力为0.553。结论:该条件下制备的葛根蛋白酶解物具有较好的抗氧化特性。     

芸豆蛋白酶解工艺的研究

以芸豆蛋白为原料研究芸豆抗氧化活性肽的酶解工艺。首先以DPPH.清除率和水解度为评价指标筛选最适用酶,并采用单因素及正交实验设计优化酶解工艺。结果表明,Alcalase碱性蛋白酶对芸豆蛋白水解能力最强,酶解产物的抗氧化能力最高;最佳酶解工艺条件为底物浓度4.0%,温度55℃,加酶量2000u.g-1,pH9.0,时间6h,该条件下水解度和DPPH.清除率分别为16.16%和74.10%,比优化前分别提高4.95%和7.63%;芸豆活性肽显示出较强的抗氧化活性。     

复合酶分步水解法制备汉麻多肽及其抗氧化特性研究

汉麻籽由于其营养丰富,且不含有胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子,近年来成为食品、医药等领域的研究热点。本研究以汉麻分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶分步酶解的方式对其进行酶解,通过响应面优化酶解参数,制取汉麻多肽。并采用分光光度计测定其DPPH自由基清除率与铁还原能力,对汉麻多肽抗氧化能力进行评价。结果表明,采用先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶的酶解方式,制得的汉麻多肽含量最高。酶解最优条件为:第一步碱性蛋白酶水解:底物浓度为5%,酶解时间2 h,pH为8.5,酶解温度为54℃,加酶量为10100 U/g;第二步木瓜蛋白酶水解:pH为6.5,温度为50℃,加酶量为5000 U/g,酶解时间1.5 h,最终获得汉麻多肽混合物的水解度为24.48%,肽含量为8.48 mg/mL;汉麻多肽的DPPH自由基清除率为82.32%,与汉麻分离蛋白相比具有较强的铁还原能力,表明汉麻多肽具备较强的抗氧化能力。本研究为汉麻多肽的开发利用提供理论基础。     

响应面法优化大豆分离蛋白提取及复合酶解制备活性肽

用碱提酸沉法从大豆中提取大豆分离蛋白,并经单因素及响应面优化法确定大豆分离蛋白最佳提取工艺为碱提时间60 min、碱提温度60℃、碱提pH值11.0、酸沉pH值5.0.使用最佳提取工艺提取大豆分离蛋白提取率为29.25％.用胰蛋白酶、糜蛋白酶分别酶解大豆蛋白产生的肽均具有抑菌活性,而采用胰蛋白酶与糜蛋白酶复合酶解大豆分...     

佛手果皮精油的提取工艺优化及其成分与抗氧化活性分析

本研究采用纤维素酶辅助水蒸气蒸馏提取法提取佛手果皮精油,在以酶解pH、酶添加量、酶解温度及酶解时间作为单因素分析的基础上,通过Box-Behnken响应面设计法进行提取工艺优化。利用气相色谱-质谱(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)法分析提取的精油的化学组成,最后以ABTS⁺·和DPPH·清除率为指标,评价佛手果皮精油的抗氧化活性。结果表明,佛手果皮精油最佳提取工艺为:酶解pH5.2、酶添加量0.7%、酶解温度52℃、酶解时间2.1 h,此条件下精油得率为3.11%。从提取的果皮精油中共鉴定出42种化合物,其中乙酸芳樟酯的相对含量最高(14.72%),其次为d-柠檬烯(14.58%)、芳樟醇(8.89%)。抗氧化活性研究结果显示:该法提取的佛手果皮精油在试验浓度范围内具有良好的抗氧化活性,并呈现明显量效关系。当精油浓度为40 mg/mL时,其对ABTS⁺·的清除率为91.20%;浓度达70 mg/mL时,其对DPPH·的清除率达93.19%。此优化工艺精油得率高,且佛手果皮精油其可作为天然抗...     

玛咖多肽的制备及抗氧化活性研究

以水解度为考察指标,在单因素实验基础上,利用正交实验优化酶解玛咖粗蛋白制备玛咖多肽的工艺,同时通过·OH、DPPH·及O₂-·清除实验研究提取过程中产生的玛咖醇提液以及在最适条件下制得的玛咖多肽的抗氧化活性,并对玛咖多肽进行氨基酸组成分析。结果表明,酶解玛咖粗蛋白的最适酶是碱性蛋白酶,酶解制备玛咖多肽的最适条件是酶解时间4 h、酶解pH为10.5、酶解温度55℃、加酶量1.6×104 U/g,在此条件下,玛咖粗蛋白的水解度为(31.55%±0.74%)。稀释一倍的玛咖醇提液对各自由基清除率为最大,对DPPH自由基的清除率为94.44%,对·OH的清除率为85.05%,对O₂-·清除率为53.85%。玛咖多肽对·OH、DPPH·及O₂-·的IC₅₀值分别为0.85、0.44、0.86 mg/mL,且表现出一定的量效关系。另外,玛咖多肽中Tyr、His、Lys、Pro四种氨基酸含量为16.98%,其氨基酸组成与抗氧化活性存在一定关系。该结果说明玛咖醇提液及玛咖蛋白均具有一定的抗氧化活性。