库德毕赤酵母FJZ固态发酵产乙酸乙酯工艺的优化

基于风味导向技术从山西传统清香型白酒酒醅中分离获得1株能赋予白酒清香风格且高产乙酸乙酯的库德毕赤酵母FJZ.采用固态发酵技术,以乙酸乙酯和总酯含量为检测指标,通过单因素及响应面试验优化发酵工艺,确定库德毕赤酵母FJZ固态发酵产乙酸乙酯发酵工艺条件为:发酵温度30℃,发酵时间7 d,接种比例3％,辅料添加量4％,该条件下...     

基于非靶向代谢组学研究砷酸盐胁迫下库德毕赤酵母代谢物的变化

砷酸盐[arsenate, As(Ⅴ)]作为水体中砷的主要存在形态之一,通过食物链影响食品安全。微生物砷脱除技术以其安全经济的优势成为解决食品砷污染途径之一。对砷的脱除能力是微生物脱砷技术的前提和基础。库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)作为一种多抗性酵母,可耐盐、高温和重金属(镉、锌和铜)等。该文研究了As(Ⅴ)对P.kudriavzevii A16生长的影响,并运用非靶向代谢组学技术研究了砷酸盐胁迫与正常培养条件下P.kudriavzevii A16之间的差异表达代谢物及代谢通路的变化。砷酸盐胁迫与正常培养相比,正离子模式下检测到317个差异代谢物,169个显著上调表达,148个代谢物显著下调表达;负离子模式下,检测到差异代谢物329个,其中171个显著上调表达,158个代谢物显著下调表达;差异代谢物的KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集通路主要涉及谷胱甘肽代谢、氨酰tRNA合成等代谢通路,As(Ⅴ)促进了酵母细胞能量代谢,增强了其抗氧化性能。该文从代谢组学水平解析了砷酸盐胁迫下库德毕赤酵母代谢物的变化,为...     

果香风味导向的库德毕赤酵母FJZ的分离鉴定及生物学特性研究

通过嗅闻试验从清香型白酒新鲜酒醅中筛选到一株产生浓郁苹果清香风味的菌株,通过HS-SPME-GC-MS分析发现该菌株在小米固体培养基中能产生大量的乙酸乙酯,占风味物质的37.71％.通过菌落菌体观察、生理生化及分子生物学试验,确定该菌株属于毕赤酵母属的库德毕赤酵母,命名为库德毕赤酵母FJZ.对菌株FJZ的生物学特性研究...     

基于培养基优化提高过表达MET14基因的重组库德毕赤酵母M48脱镉能力的研究

对一株具有高镉抗性和镉脱除率的过表达MET14基因的重组库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii) M48进行培养基优化研究,以其脱镉率和生物量的综合值为评价指标,通过单因素实验、25-1部分析因设计和中心组合设计优化培养基成分,为后期将重组菌株M48做成脱镉制剂提供研究基础。结果表明,最优培养基成分为:葡萄糖23.42 g/L,酵母浸粉27.72 g/L,磷酸二氢钾2.04 g/L。在此条件下得到的M48脱镉率为79.63%,生物量为9.95 g/L,分别是未优化前的2.70倍和1.16倍。本研究通过优化重组菌株M48的培养基成分,有效提高了其脱镉率和生物量。     

山羊乳-FOS/GOS库德毕赤酵母DS8-1微胶囊的制备及体外评价

前期从新疆传统乳制品酸驼乳中筛选得到一株具有潜在益生特性的库德毕赤酵母DS8-1(Pichia kudriavzevii DS8-1),为增加菌株对体外环境的抗性,以海藻酸钠为壁材使用锐孔法制备酵母菌微胶囊.将干燥的藻酸盐(SA)微胶囊外包山羊乳或在微胶囊壁材中添加低聚果糖(fructooligosaccharides...     

低水势胁迫对粉状毕赤酵母3-磷酸甘油脱氢酶酶活力的影响

一定浓度的盐或山梨醇胁迫可促使粉状毕赤酵母(Pichiafarinosa)过量表达3 磷酸甘油脱氢酶(Glyc erol 3 Phosphatedehydrogenase) ,从而合成出大量甘油抵御胁迫。研究中发现,在5 %盐胁迫下,粉状毕赤酵母粗酶液3 磷酸甘油脱氢酶酶活提高30 % ,在6 %盐胁迫下,甘油产量提高了9倍。在1 5mol/L的山梨醇胁迫下,3 磷酸甘油脱氢酶酶活提高了14 %。     

逆境对GST基因过表达库德毕赤酵母G43生长及脱镉能力的影响

目的 探究逆境对GST基因过表达Pichia kudriavzevii G43生长及脱镉能力的影响。方法 以一株高镉抗性和镉脱除率的谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)基因过表达的重组P. kudriavzevii G43为研究对象, 从生物量和脱镉率两方面评价盐、低pH、乙醇及高温逆境条件对其生长和脱镉能力的影响。结果 逆境培养条件对G43的生长和脱镉能力影响较大。与原始菌株P. kudriavzevii A16(CK)相比, G43对盐、酸、乙醇及热的耐受力均有显著提升: 可耐受质量浓度为120 g/L的NaCl, pH 2.5时仍可正常生长, 培养基乙醇体积分数10%时仍可生长, 可耐受43 ℃高温。在不同逆境条件下, G43的脱镉能力与原始菌株相当或者有明显提升。结论 重组菌株G43具有优异的耐受性, 不同培养条件对其脱镉效果有很大影响, 为后续P. kudriavzevii等微生物的镉抗性和脱镉机理研究提供基础数据, 也为将其应用在食品体系镉脱除领域奠定理论基础。     

基于蛋白质组学探究西兰花抗氧化系统对高氧胁迫的响应机制

为了研究高氧胁迫下西兰花抗氧化系统的响应机制,本实验基于同位素相对与绝对定量蛋白质组学结合生理生化指标分析,探究不同O2体积分数（5% O2＋5% CO2、20% O2＋5% CO2和40% O2＋5% CO2）下西兰花抗氧化系统及相关蛋白表达的变化。基因本体论注释、同源蛋白簇功能分析、京都基因与基因组百科全书通路分析结果表明,本研究共鉴定和筛选出76 个与抗氧化系统相关的差异表达蛋白,分别涉及抗坏血酸-谷胱甘肽循环、硫代葡萄糖苷降解、多酚及类黄酮等抗氧化物质代谢、抗氧化酶代谢等途径。蛋白质组学分析结果表明,相比于5% O2＋5% CO2处理,40% O2＋5% CO2处理抑制了1 种抗坏血酸过氧化物酶活力和3 种谷胱甘肽过氧化物酶活力,抑制了西兰花的抗坏血酸-谷胱甘肽循环;同时40% O2＋5% CO2处理明显增加了16 种黑芥子酶活力,促进了硫代葡萄糖苷降解。此外,40% O2＋5% CO2处理莽草酸脱氢酶的表达差异倍数仅为5% O2＋5% CO2处理的0.77 倍,抑制了莽草酸合成和多酚及类黄酮积累。本研究揭示了高氧导致西兰花黄化衰老的原因,可为西兰花保鲜技术的开发及高氧胁迫的缓解提供理论依据。     

重组毕赤酵母中腺苷甲硫氨酸的纯化

腺苷甲硫氨酸(S-Adenosy-L-methionine,SAM)是人体中重要的中间代谢物,具有重要的生理功能。从重组毕赤酵母中生产SAM是一个有应用潜力的方式。该研究报道了一个完整的从具有重组SAM合成酶的毕赤酵母中纯化SAM的工艺。首先利用1 mol/L乙酸乙酯和1 mol/L硫酸的混合溶液破碎细胞,然后利用弱酸性阳离子大孔树脂吸附SAM,最后以流速为0.2 m L/min的100 mmol/L的硫酸洗脱SAM。SAM的收率达到80.03%,纯度为92%。     

定点突变提高毕赤酵母产葡萄糖氧化酶的氧化稳定性

通过定点突变的方法,将来源于黑曲霉Aspergillus niger的葡萄糖氧化酶的甲硫氨酸替换为亮氨酸,以期提高葡萄糖氧化酶的耐氧化性。野生型的葡萄糖氧化酶和突变酶M305L、M524L、M556L和M582L的基因分别在巴斯德毕赤酵母中分泌表达,对突变酶与野生型葡萄糖氧化酶纯化后进行性质比较。结果表明:突变酶的耐氧化性与野生型葡萄糖氧化酶相比均有不同程度的提高,其中,突变酶M556L在100 mmol/L和500 mmol/L过氧化氢存在下的氧化稳定性是野生型葡萄糖氧化酶的近2倍,且催化效率(kcat/Km)提高至野生型葡萄糖氧化酶的2.08倍。定点突变后,突变酶的最适反应温度为35℃,与野生型葡萄糖氧化酶基本保持一致,同时,突变酶M524L的p H稳定范围由4.0~6.0扩展到3.0~7.0。     

强化曲中毕赤酵母与地衣芽孢杆菌的相互作用研究

以实验室分离得到的毕赤酵母FBKL2.0008与产酱香风味的细菌FBKL1.0199作为主要菌种,用于强化麦曲的制备。设置了5个接种比例,30℃发酵14 d后,确定了最佳的接种比例为地衣芽孢杆菌∶毕赤酵母=1∶10。监测强化曲发酵过程中微生物生物量,酸性蛋白酶活,淀粉酶活变化情况,可知毕赤酵母的加入对地衣芽孢杆菌的生长与代谢产物的生成情况没有明显影响。强化麦曲风味物质中吡嗪类物质相对百分含量为19.286%,其中四甲基吡嗪相对百分含量为16.365%。     

小麦品种对库德里阿兹威氏毕赤酵母风味代谢特性影响的研究

研究不同小麦品种对库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）MT-Y01风味代谢特性的影响,并对小麦中的游离氨基酸与酵母代谢产生的挥发性风味物质进行典型关联分析（CCA）。结果表明,8种小麦的基本理化指标存在差异,游离氨基酸组成相似,但含量差异较大。小麦品种对酵母MT-Y01代谢产生挥发性风味物质有重要的影响,主要为高级醇和酯类物质（占比80%以上）。酵母MT-Y01以小麦品种鄂麦596为基质时代谢产生的挥发性风味物质总含量最高（568.5 mg/L）;以郑麦1769为基质时代谢产生的挥发性风味物质总含量最低（96.8 mg/L）;以百农201、淮麦32、徐麦35为基质时代谢产生的最高含量风味物质分别为3-甲硫基丙醇、己酸乙酯及苯甲醛。小麦品种对酵母发酵风味的影响与氨基酸关联,3-甲基丁醇、苯乙醇分别与缬氨酸、苯丙氨酸相关性强,3-甲基丁酸与天冬氨酸和天冬酰胺相关性强,苯乙醛受精氨酸影响大,丙酸乙酯、乙酸异戊酯、乙酸-2-苯乙酯受亮氨酸、半胱氨酸和赖氨酸影响大。     

Optimization of Tannase Production and Improvement of Nutritional Quality of Two Potential Low-Priced Plant Feedstuffs under Solid State Fermentation by Pichia kudriavzevii Isolated from Fish Gut

An autochthonous tannase yielding yeast strain Pichia kudriavzevii (GU939629), isolated from the gut of an Indian major carp (mrigal), Cirrhinus cirrhosus, has been used for extracellular tannase production and subsequent processing of two plant feedstuffs, Groundnut oil cake (GOC) and Pistia leaves (PL), under solid state fermentation (SSF). Of the two plant materials studied, GOC supported maximum tannase activity (0.82 ± 0.024 U/gds) degrading 94.1% of the initial tannin content, whereas SSF resulted in 0.68 ± 0.02 U/gds tannase activity and 89.1% tannin degradation through the use of PL as substrate. Following SSF for 15 d with optimized culture conditions, analysis of proximate composition revealed that there was significant increase (t-value significant at P < 0.05) in the contents of crude protein, lipid, minerals (Na, K, Ca, Mg, Zn, Fe, Cu, Mn, P), free amino acids and fatty acids; along with reduction in the contents of the other antinutritional factors, for example, crude fiber, phytic acid, and trypsin inhibitor. The results indicate that there is ample scope for further research to appraise potential application of gut microbiota for tannase production, as well as processing of low-cost plant feedstuffs for prospective use as feed ingredients for improved fish protein production.     

双向电泳技术在副干酪乳杆菌盐胁迫应激反应研究中的应用

对耐盐副干酪乳杆菌在盐胁迫下的应激反应进行研究,比较其在含有6g/dL NaCl和未含有NaCl的培养基中生长至对数生长中期的蛋白质组双向电泳图谱差异。结果表明:有20个蛋白质点表达发生明显变化,经过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定,其中热休克蛋白质GroEL和DnaK在盐胁迫下表达上调,参与脂肪酸合成的3-氧酰基-(酰载体蛋白)合酶FabG表达下调,可能与该菌应对盐胁迫密切相关。     

适应性进化提高淀粉酶产色链霉菌T17自发酸胁迫抗性的生理机制

考察ε-聚赖氨酸产生菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes)T17,及其经酸性适应性进化得到的3株进化菌株(S. diastatochromogenes AE41、S. diastatochromogenes AE51和S. diastatochromogenes AE56)应对自发酸胁迫的生理响应。比较2个胁迫时间下原始菌株和进化菌株相关生理指标的变化。结果显示,在第0小时(pH 6.5),原始菌株和进化菌株的各生理指标无明显区别;在第48小时(pH 3.2),相较于原始菌株,进化菌株的耐酸能力更强,胞内pH值、ATP含量和H+-ATPase活性均明显提高,胞内天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸以及脯氨酸浓度明显增加,细胞膜脂肪酸的不饱和度明显增加从而提高流动性。进化菌株能够实现对自发酸胁迫的制衡。     

多胺对毕赤酵母合成S-腺苷甲硫氨酸的影响

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是一种需求量巨大的活性氨基酸。SAM生产主要是利用过表达甲硫氨酸腺苷转移酶(methionine adenosyltransferase,MAT)的毕赤酵母(Pichia pastoris)进行胞内合成,但较高密度培养条件下甲醇诱导会造成一定程度的细胞死亡。本研究首先揭示甲醇对P.pastoris造成过氧化损伤,然后分析了添加多胺(腐胺和亚精胺)对SAM合成影响及机制。结果揭示多胺可提高H2O2酶活力,从而缓解细胞氧化损伤,此外还改善了MAT酶活力和细胞生长,最终SAM的积累水平提高19.2%。     

植物乳杆菌FS5-5在盐胁迫下的转录组学分析

以分离自东北自然发酵大酱中的一株耐盐植物乳杆菌FS5-5(Lactobacillus plantarum FS5-5)为实验对象,在转录水平上对该菌株盐胁迫相关基因表达进行了研究。结果表明:在对数生长期,表达显著下调的共29个基因,分别为参与碳水化合物转运和代谢的4个基因,氨基酸转运和代谢的9个基因,维生素代谢的3个基因,核苷酸代谢的6个基因,遗传信息翻译、核糖体结构和形成的7个基因;表达显著上调的有参与碳水化合物转运和代谢的4个基因。这些变化可能与L.plantarum FS5-5的盐胁迫机制密切相关。选取参与维生素代谢的3个基因和核苷酸代谢的1个基因,通过实时定量聚合酶链式反应对转录组学结果进行验证,结果表明两种方法中基因表达趋势一致。实验对L.plantarum FS5-5的盐胁迫反应进行了比较全面的分析,为提高工业生产中菌株的耐受性提供了理论依据。     

改进QuEChERS-气相色谱-三重四级杆质谱法测定水果中吗啉脂肪酸盐的残留

该研究建立了水果中吗啉脂肪酸盐果蜡的气相色谱-三重四极杆质谱(gas chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS/MS)分析方法.样品使用改进QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)方法,经1％甲酸-乙腈提取...