液相色谱串联质谱法分析血清中脂溶性维生素的性能评价及临床应用

目的 建立液相色谱串联质谱法定量分析血清中脂溶性维生素的方法,并进行性能分析评价以及初步临床应用。方法 采用液相色谱串联质谱法定量检测血清中脂溶性维生素含量,并检测2022年11月至2023年11月在苏州大学附属第一医院产科门诊产检的1 113例孕妇血清中的脂溶性维生素。参照《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》进行血清中脂溶性维生素高效液相色谱串联质谱检测方法的方法学验证。结果 液相色谱串联质谱法定量检测血清中脂溶性维生素,包括维生素A、维生素E、维生素D2、维生素D3、维生素K1,线性范围分别为40～4 000 ng/mL、0.5～50μg/mL、2～200 ng/mL、5～250 ng/mL、0.1～10 ng/mL,检出限分别为2.50 ng/mL、0.10 ng/mL、0.40 ng/mL、1.00 ng/mL、0.02 ng/mL,定量下限分别为10.00 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、5.00 ng/mL、0.10 ng/mL,批内变异系数(CV)和批间CV均小于15%,回收率分别为91.25%～107.18%、90.00%～105.51%...     

肿瘤坏死因子-α对内皮细胞组织因子和组织因子途径抑制物表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达TF及TFPI的影响.方法:设不同时间组,TNF-α 10 ng/mL分别培养0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h,另设不同溶度组,TNF-α 0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、20ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL分别培养6 h;ELISA法测定TF及,TFPI抗原的表达;RT-PCR检测TF及TFPI基因的表达.结果:各浓度的TNF-α对HUVECs的细胞活力无明显影响;TNF-α促进TF抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α 10 ng/mL作用6 h时最明显(P＜0.01);TNF-α促进TF mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在3 h时达到高峰(P＜0.01);TNF-α对HUVECs表达TFPI抗原及TFPI mRNA无明显影响.结论:TNF-α可以诱导HUVECs细胞表达TF:TNF-α对HUVECs细胞TFPI的表达无明显影响.     

不同孵育条件对HBsAg定性分析的影响

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）中不同孵育条件对乙肝表面抗原（HBsAg）检测结果的影响。方法采用ELISA方法分析孵育温度（25℃、37℃）、时间（30、60、90、120min）、方式（25℃振荡和静止）对检测不同浓度HBsAg（0、0．2～0．5ng／mL、1．0ng／mL）标本吸光度／临界值（S／CO）的变化。结果在同一温度下，标本从0．2～1．0ng／mL的S／CO随孵育时间延长而增加。对于0．2ng／mL标本孵育30min、60min按照判断标准结果呈阴性，而孵育90、120min结果转为阳性。孵育时间不同对阴性标本S／CO基本无影响。在同一时间、同一浓度下，25℃孵育振荡方式S／CO值较静止方式明显增加。结论不同孵育条件对ELISA定性测定HBsAg结果有影响，尤其对弱阳性标本。     

近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌ESAT-6蛋白

目的建立定量检测结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)的近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法。方法以近红外荧光染料(Dylight 800)标记靶向ESAT-6的单克隆抗体,靶向ESAT-6的多克隆抗体包被在纳米磁珠表面。采用双抗体夹心法,磁性分离结合物和游离物,采用便携式高灵敏度低噪声激发式荧光检测仪检测磁性结合物的荧光强度,从而检测待检样品中ESAT-6水平。结果该方法的检测线性范围为2.4~750.0ng/mL,最低检测限为0.48ng/mL;10ng/mL水平加样回收率为96%,50ng/mL水平加样回收率为95%;批间变异系数(CV)为5.8%,批内CV为4.3%。该方法检测胸腔积液标本ESAT-6的特异度为80%,灵敏度为95%。结论该方法检测ESAT-6的线性范围广、灵敏度高、稳定性好。     

脂肪乳治疗艾司唑仑中毒1例疗效及药代动力学观察

目的 观察脂肪乳对艾司唑仑中毒疗效及其血药浓度的影响.方法 20%脂肪乳250 mL治疗艾司唑仑中毒1例,分2次治疗,间隔时间20 h.每次治疗前即刻及治疗后0.5 h内抽血查艾司唑仑浓度,并记录患者意识变化.结果 第一次治疗前艾司唑仑血液浓度为3050.6 ng/mL,治疗后为1018.8 ng/mL.意识由浅昏迷变为呼唤睁眼.其后观察20 h,血药浓度无显著变化,意识状态无恶化.第二次治疗前艾司唑仑血液浓度为1030.0 ng/mL,治疗后为119.0 ng/mL.治疗后完全清醒.结论 脂肪乳可能作为解毒药物缓解艾司唑仑中毒症状,显著降低艾司唑仑中毒者血药浓度,其可靠性需进一步随机对照研究.     

乙型肝炎e抗原放射免疫一步法实验方法的比较

目的建立一步法测定HBeAg的检测方法.方法HBeAg＞64ncu/ml的阳性混合血清,用生理盐水作倍比稀释,以20μ、50μl、100μl三种加样量及45℃1.5h、45℃3h、20℃16h三种孵育方式分别与原法对照.结果批内CV=7.39%,配对试验t=2.010,P＞0.05,r=0.939.结论样本20μl加200μl 125I抗-HBe,45℃1.5h是最佳选择.     

3种方式检测乙型肝炎病毒前S1抗原的比较研究

目的探讨3种方式检测乙型肝炎病毒前S1(PreS1)抗原的异同,为检测方法的合理选用提供依据。方法用全自动酶免分析仪、时间分辨荧光分析法、手工酶联免疫吸附测定(ELISA)3种方式对乙型肝炎患者血清进行PreS1抗原检测;选择PreS1抗原强阳性血清和弱阳性血清分别用3种方式检测15次,对重复性进行比较;升高和降低反应孵育温度±3℃检测,对阳性率进行比较。结果 3种方式阳性检出率分别为93.53%,92.81%,92.81%;重复性自动酶免分析仪检测强阳性和弱阳性标本的变异系数(CV)分别为3.62%和13.42%;时间分辨荧光分析法检测强阳性和弱阳性标本的CV分别为5.10%和7.92%,手工ELISA检测强阳性和弱阳性标本的CV分别为11.10%和29.88%。改变反应孵育温度3℃,全自动酶免分析仪测得的所有检测标本S/CO值下降,增大了假阴性的概率,手工ELISA和时间分辨荧光分析法所有检测标本的S/CO值升高,增大了假阳性几率。结论全自动酶免分析仪的检出率和重复性较好,时间分辨荧光分析法次之,手工方法较差。     

流式荧光技术检测血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ方法学性能评价与应用评估

目的对基于流式荧光技术检测血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ/Ⅱ的方法学进行性能评价与临床评估。方法评价PGⅠ/Ⅱ定量测定试剂盒(流式荧光发光法)最低检测限、线性范围、精密度、回收率、抗干扰能力、Hook效应出现浓度、特异性,通过临床血清样本与Abbott公司化学发光法试剂盒进行方法比对,初步建立健康人群PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ比值的参考值范围。结果基于流式荧光技术的PGⅠ、PGⅡ定量检测试剂盒检测PGⅠ、PGⅡ检测低限分别为0.62 ng/mL、0.21 ng/mL。PGⅠ、PGⅡ线性范围上限分别可达到180 ng/mL、100 ng/mL。PGⅠ检测批内变异系数(CV)为2.72%~3.20%,室内CV为5.19%~5.74%。PGⅡ检测批内CV为3.47%~4.57%,室内CV为5.71%~7.43%。PGⅠ、PGⅡ的平均回收率分别为98.5%、91.7%。200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素、10 mg/mL Hb对各指标检测无显著影响。PGⅠ与PGⅡ分别在16 414ng/mL、7 281 ng/mL以下浓度未出现Hook效应。PGⅠ与PGⅡ检测间不存在彼此交叉的情况。与化学发光法进行方法学比对,存在线性关系。线性方程分别为PGⅠ:Y=0.968 4X+2.049 4,相关系数(r)=0.985 4;PGⅡ:Y=0.9736X+0.656,r=0.982 0。确定的健康人群PGⅠ与PGⅠ/PGⅡ比值第5百分位数分别为71.93 ng/mL和3.57;第1百分位数分别为54.04ng/mL和2.57。结论流式荧光技术可以实现PGⅠ、PGⅡ并行测试,方法学性能良好,能应用于临床检验并可有效提高检测效率。     

LC-MS/MS法同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度

目的建立可同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的液质联用-质谱串联法(LC-MS/MS)。方法以地西泮为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后经超高效液相色谱(Acquity UPLC)BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)分离,欧前胡素与异欧前胡素在质谱条件为正电喷雾电离(ESI~+)(m/z:271.5204.2),锥孔电压为20 V,碰撞能量为33 V,考察特异性、线性范围、定量下限、基质效应以及方法学回收率、精密度和稳定性。结果欧前胡素与异欧前胡素保留时间分别约1.5 min及2.4 min,欧前胡素浓度在0.1～20 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 2),定量下限0.1 ng/mL(信噪比S/N10)。异欧前胡素浓度在0.05～10 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 9),定量下限0.05 ng/mL(S/N10),基质效应为94.89%～110.70%,方法学回收率为94.3%～104.3%。欧前胡素与异欧前胡素的重复性以CV表示,CV分别4.91%、5.26%,期间CV分别16.39%、14.87%。冻融条件下二者CV均不大于7.21%,室温下均不大于10.44%。结论建立了同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的LC-MS/MS法,该法灵敏度高、特异性好、稳定性好。     

流式细胞术检测白细胞糖皮质激素受体-α方法的建立

目的建立流式细胞术检测糖皮质激素受体-α的方法。方法使用细胞破膜剂处理EDTA2K抗凝外周静脉血,获得已被破膜的白细胞。将纯化的兔抗人GR-ot多克隆抗体与之反应,再与FITC标记的羊抗兔二抗反应,比较在不同抗体反应浓度（0．0004～0．004μg/μL）、不同的反应条件（室温、37℃及4℃）下获得的阳性细胞率及荧光强度,并比较标本处理前后放置不同时间的检测结果。最后作重复性试验。结果以一抗浓度为0．004μg/μL时荧光信号最强,但一抗浓度为0．0004～0．004μg/μL获得的结果无统计学差异。一抗在室温或者37℃孵育30min或者4℃反应6h,结果无统计学差异。标本可于4℃保存至24h处理。标本处理后最好及时检测,随时间延迟荧光信号有所下降。重复性试验显示阳性细胞百分率及荧光强度的CV值分别为3．4％与9．8％。结论建立了稳定可靠的糖皮质激素受体-α流式细胞术检测的方法。