大麦黄花叶病毒(BaYMV)的提纯

 本文提出了一个改进了的大麦黄花叶病毒提纯方法。病大麦叶片在高浓度(0.5M)磷酸钾缓冲液pH7.0(内含0.1% ME,0.01M EDTA)中匀浆,经1/4体积四氯化碳澄清后,病汁液用6% PEG,3% NaCl和1% TritonX-100混合物沉淀,高浓度(0.5M)同种缓冲液(含0.5M尿素,0.1% ME和0.01M EDTA)悬浮,接着进行20%蔗糖垫(含0.3% Triton X-100)超迷离心去除寄主细胞成分,10-40%蔗糖密度梯度离心进一步纯化。所获得的BaYMv提纯制剂A260/A280,A260/A240比值分别为1.20和1.04,纯病毒产量约为5.5-8.0mg/kg病叶。提纯病毒制剂在电镜下看不到有寄主杂质存在。     

应用A蛋白免疫电镜技术快速检测病株中大麦黄花叶病毒

 用A蛋白免疫电镜技术,检测大麦病汁液中的大麦黄花叶病毒(BaYMV),其捕获抗血清的适宜工作浓度范围很宽,320-20,480倍均能达到满意的结果;抗原孵育条件以室温(约25℃)下30分钟或冰箱(约4℃)中3小时,捕获到的病毒粒子数量较多。应用这项技术,在稀释3,125倍的病汁液中还能检测到BaYMV粒子,比普通免疫电镜方法的灵敏度至少高5倍。BaYMV在病株中的分布以症状明显的花叶中含量最高,黄化叶中较少,茎和根中找不到病毒。利用该技术可以快速而灵敏地进行大麦品种抗病性的鉴定与筛选。本文最后还讨论了BaYMV的稳定性。     

我国大麦黄花叶病毒主要分离物对大麦品种致病性的研究

 大麦黄花叶病是我国长江中下游和东部沿海大麦的重要病害,造成严重减产。我们以往初步研究认为,我国各地大麦黄花叶病毒对大麦品种的致病性存在差异。     

大麦黄花叶病的综合防治

大麦黄花叶病是大麦的主要病害,为害大,并且在田间不易判断。介绍了大麦黄花叶病的症状、生理特性,并提出相应的防治措施。     

大麦感染黄花叶病毒后过氧化物酶、酯酶同工酶的变化

大麦黄花叶病毒(BYMV)是一种多粘菌介体传播的土传病毒,筛选抗病品种及建立简便有效的检测方法是选育工作中急需解决的问题。利用等电聚焦凝胶电泳技术分析同工酶的变化,可为育种学家提供生化分析参考。     

大麦黄花叶病的分子生物学与基因工程研究——Ⅱ.大麦黄花叶病毒抗性突破株系的分子分析

大麦山黄花叶病毒抗性突破株系的出现克服了已有大麦抗性基因的作用。本研究通过对大麦黄花叶病毒原株系和抗性突破株系RNA1中包含NIa蛋白酶基因的1Kb区段进行克隆和序列分析,比较两株系的序列差异。表明两者间核苷酸水平的同源性为97.2％,氨基酸水平的同源性为97.3％。根据存在的这些微小差异,人工合成具有株系特异性的聚合酶链式反应(PCR)引物,建立PCR检测系统,以期在大田黄花叶病毒株系鉴定中应用。     

大麦黄花叶病的分子生物学与基因工程研究:Ⅱ.大麦黄花叶病毒抗性突破株系的分子分析

 大麦山黄花叶病毒抗性突破株系的出现克服了已有大麦抗性基因的作用。本研究通过对大麦黄花叶病毒原株系和抗性突破株系RNA1中包含NIa蛋白酶基因的1Kb区段进行克隆和序列分析,比较两株系的序列差异。表明两者间核苷酸水平的同源性为97.2%,氨基酸水平的同源性为97.3%。根据存在的这些微小差异,人工合成具有株系特异性的聚合酶链式反应(PCR)引物,建立PCR检测系统,以期在大田黄花叶病毒株系鉴定中应用。     

大麦品种对白粉病抗病性鉴定及抗源筛选

通过田间初筛和病圃复筛,对6515份国内外大麦品种进行了白粉病抗性鉴定。重点材料结合苗期、分蘖期鉴定和异地鉴定,筛选出免疫或高抗材料52份,慢白粉病抗性材料59份,并发现具有Mla、Mla6单基因和Mla Mlat、Mla Mlh Mlp多基因组合的国外已知抗病基因品种,在浙江舟山和福建莆田表现抗病。统计分析表明,二棱大麦抗病性较多棱大麦强;抗病品种发病较感病品种迟;抗性材料大多来自国外,英、德、瑞典、叙利亚、澳大利亚、墨西哥等国品种,筛出率较高。     

应用单克隆抗体检测大麦黄花叶病毒

作者应用已建立的大麦黄花叶病毒(BaYMV)的4F_(10)单克隆抗体杂交瘤细胞株,经小白鼠腹水生产单克隆抗体,用过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的酶标单克隆抗体。并由此建立了检测大麦黄花叶病毒的标准的双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)。其检测提纯病毒的灵敏度为3.0μg/ml左右,感病大麦叶片汁液的最大稀释度为1:2560,病茎稀释度为1:160。对采自我国7个主要BaYMV发病区感病的样品进行了检测,绝大多数均显示强阳性,只有宝山样品例外。本项试验为BaYMV诊断的标准试剂盒的建立进行了有益的尝试。     

大麦品种对BYMV的抗性与过氧化物酶、酯酶的关系研究

4个不同生育期的叶片过氧化物酶活力测定呈两峰两谷现象。感病品种早期叶片过氧化物酶活力大于抗病品种,感病严重度与酶活力呈正相关。三叶期叶片同工酶电泳表明,抗病品种过氧化物酶在快带区比感病品种多1条酶带,酯酶同工酶在慢带区多1条酶带,这些酶带可作为抗性品种的特异性生化指标。分蘗期叶片过氧化物酶中有1条酶带与抗性有关。拔节期叶片有3条酯酶同工酶带、根材料中有2条分别与感病性有关。本文初步探讨了同工酶与抗病性的关系。     

大麦黄花叶病抗源筛选

研究比较分析了“青华矮6号”等水稻抗病新品种对我省稻白叶枯病〔Xan-thomonas campestris pv.orvzae(Gshiyama 1923)Dye,1978〕Ⅰ—Ⅳ菌群的抵抗性,它们的抗感性按照品种×菌株的互作反应,可划分为6个类型,以中抗品种“华竹40”为亲本杂交育成的新品种均表现不同程度抗病。其中尤以“青华矮6号”的抗病性最好。“青华矮6号”是采用多系杂交育成的一个纯晚型中迟熟、丰产抗病、米质好的品种,测试证明对广东Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ菌群表现高抗,对优势菌群的抗病等级为1.3～1.4,CK_1(IR_(26)抗病)为0.84～1.2,CK_2(二白矮感病)为6.0,抗性差异达到显著水平,L.S.D=0.77(P=0.05),主要抗性基因为Xa_4。该品种经3年多点大面积验证试验结果,它的丰产抗病性表现一致。     

大麦黄花叶病毒(BaYMV)机械接种的初步研究

 大麦黄花叶病毒的机械接种一般发病率较低,为提高其发病率,我们进行了缓冲液种类、用量,接种源种类,接种时苗龄,按种后苗培育时的温度、光照强度和时数等因素的研究。     

大麦品种对黄花叶病抗病性的鉴定

1979～1984年在萧山县和上海县等8个县重病田,经9～16点次,自然诱发鉴定了国内、外大麦品种(系)3822个,其中于潜六棱大麦和嵊县无芒六棱等12个品种均不发病,用电镜检查也未见到病毒质粒,这些品种可作为抗源,其中有2个品种已用于抗病育种。大麦品种抗性以二棱最弱,四棱中等,六棱较强,无芒六棱类型品种的抗性最强。至今在二棱大麦中还未找到高抗品种。上海病土的致病性远比浙江病土强,认为黄花叶病毒可能存在不同株系。同品种年间抗病程度差异不大,即年度间抗性较稳定。发病始期与大麦品种的生育期早、迟无关,而与品种感病性有关。     

大麦黄花叶病的综合防治研究

大麦是江苏、浙江一带的主要夏熟粮食、饲料及酿造原料作物。江苏省扬州市种植面积达205万亩以上,占三麦面积的37.4%。近年来随着耕作制度的变化和品种的更换,原来广为种植的六棱大麦和元麦均基本被淘汰,改种了二棱大麦早熟三号。由于这个品种容易感染黄花叶病,一般发病后减产1～2成,重者达5成以上。自1975年以来利用抗病品种、轮作换茬和适当推迟播期及病田深翻等,能有效地控制病害达到持续高产的目的。目前这一措施已在大面积推广示范应用。经济效益和社会效益均较明显。