平肺复方对人肺腺癌A549细胞PPAR-γ信号通路的影响

目的研究平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖及过氧化物酶体增长因子活化受体（peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR）-γ信号通路的影响。方法运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）比色法检测平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并添加PPAR-γ特异性阻断剂GW9662,观察PPAR-γ通路阻断后平肺复方对A549细胞生长的影响。结果平肺复方生药5 mg/ml和10 mg/ml在作用24小时、48小时和72小时表现出对A549细胞增殖的抑制作用（P〈0.05）;单纯加入GW9662对细胞的生长并未产生影响;加入GW9662的平肺复方仍可对细胞生长产生抑制作用（P〈0.05）,但这种抑制作用明显弱于平肺复方（P〈0.05）。结论平肺复方的抗肿瘤作用机制可能部分涉及到PPAR-γ信号通路,但并不完全是通过这一条信号通路在发挥作用。     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞增殖的影响

目的:观察肺癌平药物血清对A549人肺腺癌细胞株增殖的作用及机制.方法:采用血清药理学方法,应用MTT比色法观察肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞株增殖的影响,通过原位杂交方法检测药物血清作用后A549人肺癌细胞端粒酶活性的变化.结果:肺癌平药物血清作用24h对A549人肺腺癌细胞有明显抑制作用,抑制率达47.83%,作用48h抑制更明显,抑制率达61.29%,抑制效应呈时间依赖性.不同时相药物血清对A549人肺腺癌细胞株增殖的影响,以3d-2t-2h组药物血清抑制作用最好,抑制率达66.41%,原位杂交法显示端粒酶表达在人肺腺癌A549细胞质内,药物血清作用后,酶活性受到抑制.结论:肺癌平药物血清具有抑制A549人肺腺癌细胞株增殖的作用,其机制是通过抑制肺癌细胞端粒酶活性实现的.     

二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用及机制研究

目的:研究二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用及机制。方法:采用血清药理学方法制得二参加芪口服液三个剂量的含药血清,培养A549细胞,同时加入顺铂和含药血清,用MTT法测定吸光度值并计算各组肿瘤细胞生长抑制率,并用ELISA法测定加入含药血清后A549细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果:各给药物组能显著抑制肿瘤细胞的增殖,与空白对照组比较,差异极显著(P0.01),尤其以加入二参加芪口服液含药血清中、高剂量组联合顺铂对A549细胞的抑制作用更明显,含药血清亦能显著提高A549细胞上清液中TNF-α和IFN-γ的含量,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞具有抑制作用,提高肿瘤细胞上清液中IFN-γ和TNF-α含量可能是其作用机制。     

化毒补虚方含药血清对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度、不同时间化毒补虚方诱导肺腺癌细胞A549的抑制增殖作用及促进凋亡作用。方法:应用四氮唑蓝比色法(MTT法)检测化毒补虚方对人肺腺癌细胞增殖的影响,同时筛选出起有效抑制作用的浓度;并应用倒置显微镜观察细胞形态的变化及荧光显微镜、透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的变化。结果:MTT实验显示化毒补虚方抑制肺腺癌细胞增殖,其中50%浓度含药血清组对A549细胞抑制作用明显,在48 h达作用高峰;观察细胞形态及超微结构发现A549细胞形态发生明显改变,并可见凋亡小体。结论:化毒补虚方通过杀伤肺腺癌细胞、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

平肺口服液抑制肺成纤维细胞生长和诱导凋亡

目的采用血清药理学方法,研究平肺口服液对人胚肺成纤维细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。方法平肺口服液10g/kg和20g/kg分别灌服大鼠,第1～7天每日一次,第8～10天每日两次,于第11天早上末次灌服后2h腹主动脉无菌采血制备含药血清。采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测平肺口服液含药血清对人胚肺成纤维细胞(CCC-HPF-1)增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果平肺口服液20g/kg灌服所得大鼠含药血清作用96h和120h分别能抑制CCC-HPF-1细胞增殖(P0.01);流式细胞术检测表明该含药血清作用96h能诱导CCC-HPF-1细胞发生凋亡(P0.05)和G1/G0期阻滞(P0.05)。结论平肺口服液能抑制肺成纤维细胞增殖,诱导细胞凋亡以及使细胞周期阻滞于G1/G0期,这可能有助于其预防放射性肺损伤。     

卷丹百合体外对肺腺癌A_(549)细胞抑制作用的实验研究

目的:研究百合对肺腺癌细胞株A549增殖作用的影响及其相关机制。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用不同浓度的百合水提物分别作用于对数期生长的A549细胞24、48和72h,MTT(甲基噻唑基四唑)比色法检测百合对A549细胞增殖的抑制率,碘化丙啶(PI)染色,荧光显微镜下观察细胞形态改变及凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示,百合水提物在1~8mg/mL浓度范围内、24~72h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系(P<0.05);PI染色荧光显微镜观察显示百合作用48h后,细胞出现凋亡的形态学改变。结论:百合具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,其可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。     

二冬膏抗NF-κB抑制介导的人肺癌细胞效应探讨

目的:探讨二冬膏的抗肿瘤效应,并研究核转录因子κB(NF-κB)在二冬膏抗肿瘤效应中的作用。方法:用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测二冬膏对A549细胞的增殖抑制效应(量效和时效关系);逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测二冬膏对A549细胞p65 mRNA表达的影响;采用免疫印迹法(Western blot)检测二冬膏对A549细胞p65蛋白表达的影响。结果:不同剂量组二冬膏含药血清均具有对肺腺癌A549细胞的明显增殖抑制作用(P0.05),且各自表现出一定时间和剂量相关性,给药干预24 h后细胞增殖均出现抑制,其中以二冬膏中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预48 h后对细胞增殖的抑制作用最明显。二冬膏中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预A549细胞24 h后明显抑制p65 mRNA的表达;中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预A549细胞后48 h对p65蛋白有显著抑制效应。结论:二冬膏可显著抑制人肺腺癌细胞系A549的增殖,通过对NF-κB的抑制介导其抗肿瘤活性。     

补中益气汤含药血清诱导A549细胞自噬性死亡的研究

目的:研究补中益气汤含药血清诱导人肺腺癌A549细胞自噬性死亡并探讨其分子机制。方法:利用血清药理学方法制备含药血清,并干预A549细胞,分别应用光学显微镜观察细胞生长状况、MTT法检测细胞增殖情况、电子显微镜观察凋亡小体、蛋白质免疫印迹方法检测自噬相关蛋白的表达水平。结果:补中益气汤含药血清能抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬性死亡。结论:补中益气汤含药血清可诱导A549细胞发生自噬性死亡。     

尖叶假龙胆醇提物含药血清对A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨尖叶假龙胆醇提物(EEGA,ethanol extract from Gentianella acuta)含药血清对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和影响细胞周期的作用。方法:采用四甲基偶氮盐(MTT)比色法检测EEGA含药血清对A549细胞作用24 h、48 h、72 h的增殖抑制率,使用流式细胞仪观察EEGA含药血清处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率和细胞周期阻滞率变化的检测。结果:MTT显示EEGA低、中、高剂量含药血清都能抑制A549细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间相关。低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后凋亡率显著高于空白组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较空白组增加(P0.01),提示EEGA含药血清可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。结论:尖叶假龙胆对人肺癌A549细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

大黄䗪丸对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响

目的基于"特发性肺纤维化(IPF)患者存在肺络干血"假说,观察大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响,探讨其防治特发性肺纤维化的作用机制。方法正常培养并取对数生长期A549细胞,5 ng/mL的TGF-β1对其干预后,Masson染色观察上皮-间充质转化(EMT)过程;选择吡非尼酮作为阳性对照药,采用血清药理学和cck-8法观察不同浓度大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响。结果成功获取发生EMT的A549细胞;24 h,OD值从高到低依次为:空白对照组(K组)、大黄?虫丸含药血清中剂量组(Z组)、大黄?虫丸含药血清小剂量组(X组)、模型组(M组)、大黄?虫丸含药血清大剂量组(D组)、西药组(P组);48 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、Z组、X组、P组、D组;72 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、D组、Z组、P组、X组。结论大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖率有影响,推测大黄?虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1诱导的EMT有关。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

肺瘤平膏通过PI3K/Akt通路抑制肺癌细胞上清诱导的骨髓源性内皮祖细胞管腔形成活性研究

目的探讨肺瘤平膏对肺癌细胞培养上清诱导的骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖、管腔形成能力以及PI3K/AKT信号通路的影响。方法采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,并进行体外诱导培养,摄取Dil-Ac-LDL与结合FITCUEA-1双染实验、免疫荧光化学鉴定其表面抗原CD133与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)等方法对其进行鉴定。分别设置浓度效应组(空白对照组、肺瘤平膏高剂量组和低剂量组大鼠血清分别处理)和时间效应组(肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清分别处理0、12、24、48 h)。利用MTT法、Matrigel法检测EPCs增殖和管腔形成能力。应用Western blot法检测各组EPCs中NF-κB、p-Akt及PI3K p85蛋白的表达量。结果骨髓单个核细胞培养7 d后,多呈圆形、短梭形等形态,贴壁生长,且95%以上的细胞呈Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-1双染阳性,且同时阳性表达CD133和VEGFR2。肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清处理EPCs 48 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组(P<0.01),且肺瘤平膏对EPCs增殖的抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性。经Matirgel实验,肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清作用48 h后EPCs管腔形成数量也少于空白对照组(P<0.05)。经Western blot法检测,肺瘤平膏高剂量组EPCs中NF-κB、p-Akt及PI3K p85蛋白表达量低于空白对照组(P<0.01)。结论肺瘤平膏含药上清可抑制A549肺癌细胞培养上清诱导的骨髓源性EPCs增殖和管腔形成活性,PI3K/AKT信号通路可能在其中发挥着一定作用。     

扶正合剂含药血清对肺癌细胞生长及耐药基因表达的影响

目的：探讨扶正合剂对肺癌细胞生长及耐药基因表达的作用。方法：选择人肺腺癌细胞株A549／DDP为模型，采用血清药理学及MTT、免疫组化及流式细胞法，进行肺癌细胞生长率、凋亡率及耐药基因LRP的表达。结果：扶正合剂荷瘤动物含药血清能够显著提高DDP抑制肺癌细胞生长的作用，促进肿瘤细胞的凋亡，与0％含药血清比较，差别有统计学意义（P〈0．05）；与0％含药血清比较，其对肺癌细胞A549／DDP肺耐药蛋白LPR表达有显著的抑制作用（P〈0．01），而正常兔血清对LRP的表达差别无统计学意义（P〉0．05）。结论：扶正合剂药物血清有抑制肺癌细胞生长，促进肺癌细胞凋亡，抑制肺癌细胞耐药基因表达的作用，正常动物含药血清无此作用，二者有显著性差异。     

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。     

肺金生方通过调控MMP-2/TIMP-2平衡抗肺癌侵袭转移研究

目的:探讨肺金生方对多种肺癌细胞株的体外抗肿瘤转移作用。方法:以肺金生方含药血清作用于肺癌A549、PG和PAa细胞,普通倒置显微镜观察各组细胞的生长特点及形态,MTT法检测细胞增殖情况,Boyden小室法观察细胞迁移,ELISA法检测25%肺金生方含药血清对MMP-2、TIMP-2表达的影响。结果:肺金生方含药血清作用于各细胞后,与正常细胞相比形态发生明显改变,明显梭形化,细胞数量减少;各浓度肺金生方组抑制率与空白组相比有差异,其中25%含药血清与空白组相比有显著性差异(P0.01),25%肺金生方含药血清组能减弱A549、PG和PAa细胞迁移,同时,各细胞肺金生方组MMP-2、TIMP-2的表达与空白血清组相比有差异(P0.05)。结论:肺金生方可以通过调控MMP-2/TIMP-2平衡达到抗肺癌转移作用。     

回药臭壳虫含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

目的:探讨回药臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞形态的影响。方法:将40只雄性SD大鼠按体重随机分为生理盐水对照组(NS)、回药臭壳虫低剂量组(CKCL)、回药臭壳虫中剂量组(CKCM)、回药臭壳虫高剂量组(CKCH)各10只,分别给予相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5天。采用血清药理学方法,制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞,将细胞分为实验组与对照组,实验组分别给予10%、20%浓度的相应组大鼠含药血清,对照组给予相同浓度对照组大鼠血清,培养24h、48h、72h后观察细胞形态变化,采用MTT法检测不同浓度含药血清对A549细胞的生长抑制率。结果:光镜下观察发现,各浓度臭壳虫含药血清组细胞形态不规则,胞膜出现不同程度的回缩,胞核固缩,细胞间距增大,其中以20%浓度臭壳虫含药血清高剂量组作用72h最为明显。MTT法检测细胞生长抑制率发现,各实验组不同浓度抑制率均高于对照组(P0.05);回药臭壳虫高剂量组72h抑制率高于低剂量组(P0.05);回药臭壳虫各剂量组72h抑制率高于24h抑制率(P0.05)。结论:回药臭壳虫含药血清可抑制A549细胞的生长增殖。     

益气养阴解毒方对5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的:观察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞增殖和凋亡的影响。方法:备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-Fu组和中药含药血清+5-Fu组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞。结果:1益气养阴解毒复方中药含药血清作用于HepG2细胞24h、48h、72h后,对细胞生长未出现明显的抑制作用(与对照组相比,P>0.05);5-FU组及中药含药血清+5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后,HepG2细胞的生长明显受到抑制(与对照组相比,P<0.05);中药含药血清与5-FU共同作用于HepG2细胞抑制作用更明显(与5-FU组相比,P<0.05)。2中药含药血清组作用24h、48h、72h后流式细胞术检测到HepG2细胞凋亡指数与空白对照组无明显差异(P>0.05);5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后检测到凋亡指数增多(与对照组相比,P<0.05;P<0.01);中药含药血清+5-FU组48h、72h细胞凋亡指数明显高于5-FU组(P<0.05)。结论:益气养阴解毒方含药血清可增强5-FU对HepG2细胞的凋亡诱导作用,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。