GDNF对多巴胺能神经元作用机制的研究进展

胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）是神经保护治疗帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）的一种神经营养因子,越来越多的在体和离体实验研究显示GDNF是中脑多巴胺（dopaminergic neuron,DA）能神经元的有效存活因子。GDNF受体是由结合在细胞质膜外的糖基化磷酯酰基（glycosyl-phosphatidylinositol,GPI）和GDNF功能性孤儿受体酪氨酸激酶Ret蛋白质组成。特异性的GDNF与其受体结合后,激活其胞内部分c-Ret,经由不同的第二信使来传递信号发挥作用。主要可能的机制有顺式作用和反式作用。而探索GDNF促进中脑黑质DA能神经元再生修复的可能机制,为进一步深入研究GDNF的作用机制提供科学依据。     

碱中毒对小鼠皮质GABA能神经元特性和编码能力的影响

目的:研究碱中毒对小鼠皮质GABA能神经元内在特性和编码能力的影响,探讨碱中毒引起大脑功能障碍的机制。方法:选择17-22天FVB-Tg小鼠行脑片体外培养,实验对象分为碱中毒组和对照组。DIC光学显微镜下选择皮层II-III层GABA神经元,运用Axo Patch 200 B放大器全细胞模式,记录并分析神经元内在特性(包括阈电位、绝对不应期)的改变;记录与去极化脉冲相对应的峰值,分析GABA能神经元的编码能力。结果:1.阈电位峰值在对照组分别是24.58±0.68,25.44±0.82,27.02±0.78,27.55±0.74和28.66±0.79毫伏,碱中毒组分别是28.32±0.78,30.10±0.91,32.22±0.80,32.88±0.76和33.54±0.74毫伏,碱中毒组阈电位升高;绝对不应期在对照组和碱中毒组分别是4.15±0.06和5.09±0.08毫秒,碱中毒绝对不应期延长。2.两组在相同去极化刺激下诱发的连续峰值波形发生明显改变,碱中毒组产生峰值的能力下降。结论:1、碱中毒使皮质GABA能神经元动阈电位升高和绝对不应期延长;2、碱中毒降低皮质GABA能神经元编码峰值能力。     

猕猴颈髓的GABA能神经元分布

应用免疫组织化学方法观察猕猴颈髓的γ-氨基丁酸（GABA）能神经元的分布,观察结果：除第X层外,在脊髓RexedⅠ-Ⅸ层可见GABA样免疫反应的胞体和纤维,标记的GABA胞体为卵圆形,三角形和多角形,可分为大、中、小型,在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ层GABA阳性胞体较多,GABA阳性纤维以后角处最多,白质内也有GABA免疫反应阳性的胶质细胞和神经纤维。结果提示GABA能神经元不仅调节感觉信息的传导而且也调节运动信息的传导。     

猫上丘浅层GABA能神经元的年龄相关性变化

目的比较青年猫和老年猫上丘浅层（superricial Superior Colliculus,sSC）GABA能神经元及其表达的年龄相关性变化,探讨老年个体视觉功能衰退的相关神经机理。方法Nissl染色显示上丘浅层结构及神经元、免疫组织化学ABC法标记GABA免疫阳性神经元。光镜下观察,采集图像,并利用图像分析软件对带状层、浅灰质层和视层神经元及GABA免疫阳性神经元及其灰度值进行分析统计。结果GABA免疫阳性神经元、阳性纤维及其终末在青年猫及老年猫上丘浅层均有分布。与青年猫相比,老年猫上丘浅灰质层、视层神经元和GABA免疫阳性神经元密度及其GABA免疫阳性反应强度均显著下降（P〈0．01）（免疫反应强度与平均灰度值成反比）;带状层神经元密度也显著下降（P〈0．01）,但其GABA免疫阳性神经元密度无显著变化（P〉0．05）。结论衰老过程中猫上丘浅层GABA能神经元的丢失和GABA表达的下降,可能是在上丘水平上导致老年个体视觉功能衰退的重要因素之一。     

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的　探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法　采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果　未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论　培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。     

BDNF和NT—3在鸡胚脊髓发育中的表达——免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养因子3（NT－3）在脊髓发育中的表达。取Hamburger 30期和40期鸡胚腰段脊髓制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF和NT－3抗体行ABC免疫组化染色。观察BDNF、NT－3样免疫阳性反应物（BDNF－IR、NT－3－IR）在两时相脊髓的分布。结果显示：30期组,BDNF－IR主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内。NT－3－IR则仅限于腹角前群神经元,胞核、胞浆均梁色;40期组,BDNF－IR除腹角染色外,还扩展至整个脊髓肖解神经元及神经突起。另外,亦见一些BDNF－IR的胶质细胞。与之类似,NT－3－IR除分布于腹角前群神经元外,中间带、背角内亦出现了些NT－3阳性神经元。结果表明：BDNF和NT－3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展。提示：BDNF和NT－3的生理作用与脊髓的发育有关。     

猫丘系层Glu与GABA表达的年龄相关性变化

为探讨青年猫和老年猫丘系层谷氨酸（Glu）与γ-氨基丁酸（GABA）表达的年龄相关性变化,利用Nissl染色显示丘系层神经元,免疫组织化学ABC法标记Glu和GABA免疫阳性神经元。光镜下观察、拍照,对Glu和GABA能免疫阳性神经元分别计数并换算成密度。利用IPE软件测量Glu和GABA免疫阳性反应灰度值（免疫阳性强度与灰度值成反比）。结果显示,Glu和GABA阳性反应神经元、阳性纤维及其终末在青年猫及老年猫丘系层均有分布。与青年猫相比,老年猫丘系层Glu能免疫阳性神经元密度显著增大（p〈0.01）,免疫阳性反应灰度值显著降低（p〈0.01）,免疫阳性反应显著增强;GABA能免疫阳性神经元密度显著下降（p〈0.01）,免疫阳性反应灰度值显著升高（p〈0.01）,免疫阳性反应显著减弱。结果提示,衰老过程中猫丘系层Glu的表达增强和GABA的表达减弱导致兴奋性神经递质和抑制性神经递质之间的平衡失调,可能是视觉、听觉、躯体感觉等单感觉功能衰退及多感觉整合功能增强的主要原因之一。     

GDNF对原代培养脊髓神经元的影响

本文研究了GDNF对体外培养各个时期的脊髓神经元的作用。通过MTT法检测GDNF对脊髓神经元存活率的影响,发现GDNF能促进培养7天及14天的神经元存活。 通过活体观察、尼氏染色、NSE免疫细胞化学染色观察GDNF对脊髓神经元生长锥数目、胞体大小、突起长度及分枝、侧棘形成的影响,发现GDNF对体外培养1—3周的脊髓神经元有明显的营养作用。     

BDNF与T2DM 及糖尿病周围神经病变的相关性研究

目的:探讨脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)与2型糖尿病(Diabetes mellitus type2,T2DM)及糖尿病周围神经病变(Diabetic peripheral neuropathy,DPN)的相关性研究。方法:纳入T2DM及DPN患者各45例,分别对两组患者血压、血糖、血脂、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、BDNF等指标进行对比分析。对两组患者BDNF表达水平变化的相关因素进行Pearson相关分析以及多因素线性回归分析。结果:DPN组病程、FBG、HOMA-IR、BDNF分别为(12.16±5.84)年、(10.24±3.93)mmol/L、(3.75±2.02)、(3.43±0.94),T2DM组病程、FBG、HOMA-IR、BDNF分别为(7.43±5.29)年、(8.19±3.35)mmol/L、(2.69±1.84)、(4.91±1.67),差异有显著性(P0.05);多因素线性回归分析显示,病程、感觉阈值与BDNF表达水平相关(P0.05);Pearson相关分析显示,BDNF表达水平与HOMA-IR存在显著负相关(P0.05)。结论:DPN患者BDNF水平明显降低,其水平与感觉阈值、病程、HOMA-IR呈现负相关。     

BDNF—TrkB信号通路与焦虑障碍的产生

BDNF-TrkB信号通路对情绪产生、认知功能和记忆能力都有重要的影响,主要通过PI3-K途径和Ras-MAP激酶途径调节神经元的再生、凋亡及重建。近年来的研究表明,BDNF基因型及其表达量和TrkB受体表达的异常与焦虑障碍的产生有非常密切的关系。本文综述了近年来BDNF-TrkB信号通路及其与焦虑障碍产生的联系等方面的研究进展。     

慢性脑低灌注大鼠海马BDNF的表达与认知功能损害

目的　观察慢性脑低灌注大鼠认知功能损害与海马脑源性神经营养因子 (Brain derivedneurotrophicfactor,BDNF)表达的关系。方法　通过结扎大鼠双侧颈总动脉 ,制成慢性脑低灌注模型 ,分缺血 6周组和 4月组及相应假手术组 ,在相应时间点用三等份MG 2Y型迷宫法测定大鼠学习记忆能力。用免疫组化S P法检测 4组大鼠海马中BDNF的表达 ,在光镜下测其平均光密度。结果　显示手术组与假手术组相比学习记忆能力明显下降 ,慢性脑低灌注大鼠缺血 4月组与缺血 6周组相比学习记忆能力也下降 (P <0 0 5 )。缺血 4月组大鼠海马BDNF表达的平均光密度值与Y型迷宫实验正确次数间存在正相关 (r=0 782 5 ,P <0 0 5 )。结论　表明在慢性脑低灌注状态下 ,大鼠学习记忆能力随海马BDNF表达的下降而下降 ,内源性BDNF可能通过对突触传递和认知功能有内在保护作用。     

新生大鼠海马分区培养神经元对缺氧反应的差异

本文以混合培养海马神经元技术为基础,通过改进解剖方法、摸索鼠龄与存活率之间的关系,成功地进行了海马神经凶的分区培养。同时采用同视野跟踪记数法、激光扫描共降焦显微镜测钙和原位杂交等技术,研究了缺氧条件下培养的海马ＣＡ１和ＤＧ神经元存在活率、细胞内游离钙和脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）ｍＲＮＡ表达水平等指标上变化的差异。结果表明,在相同的缺氧条件下,ＤＧ细胞比ＣＡ１细胞损伤轻微并且具有比ＣＡ１细胞更强     

人胎大肠氮能神经元发育的研究

用NADPH-d组织化学法对人胎大肠氮能神经元的发育进行了观察.结果表明第5个月胎龄时,肌间神经节处圆形细胞中部分细胞出现一氧化氮合酶(NOS)阳性反应,并分化成氮能神经细胞.第6个月胎龄时,氮能神经元胞体增大,突起伸长,在肌层、粘膜下层和肠腺基部出现氮能神经纤维分布.第7个月胎龄时,氮能神经元生长发育达到高峰,肌间神经节细胞数目增多,环肌层神经纤维分布密度增加,膨体结构明显.第8-10个月胎龄时,氮能神经元染色强度加深,其胞体分布以肌间神经节最多,粘膜下层和内环肌层较少.氮能神经纤维的分布密度以内环肌层最高,粘膜下层和外纵肌层次之,粘膜层较低.本研究揭示了大肠氮能神经元发育的变化规律.     

猫下丘中央核GABA能神经元年龄相关变化

目的比较研究猫下丘中央核(CIC)GABA能神经元年龄相关变化,探索老年个体听力下降的神经机制。方法Nissl染色显示下丘神经元,免疫组织化学ABC法显示γ-氨基丁酸(GABA)免疫阳性神经元。光镜下观察、拍照,对神经元和GABA能神经元分别计数并换算成密度,测量GABA能神经元直径取平均值。结果GABA阳性反应神经元、阳性纤维及其终末在青年猫及老年猫下丘中央核均有分布。与青年猫相比,老年猫下丘中央核神经元及GABA能神经元密度均显著下降(P<0.01),GABA能神经元下降幅度较大;GABA能神经元胞体直径明显减小(P<0.01),阳性反应明显减弱。结论在衰老过程中猫下丘神经元尤其是GABA能神经元有显著丢失现象,提示GABA能神经元显著减少导致下丘兴奋性和抑制性神经递质之间的平衡失调,可能是引起老年个体听觉功能衰退的重要原因。     

猫腰髓中GABA能神经元的分布及年龄相关变化

目的观察和比较GABA能神经元在青年猫和老年猫L6段脊髓的分布,探讨GABA能神经元在脊髓中分布的年龄相关变化及意义.方法免疫组织化学ABC法.结果青年猫与老年猫L6段脊髓灰质内,GABA能神经元及神经纤维分布广泛,各个Rexed板层均可见GABA-IR细胞,其中背侧灰质阳性最强,其次是腹侧灰质.标记的GABA能神经元胞体为卵圆形、三角形、多角形和星形,可分为大、中、小三种类型.经比较,老年组GABA能神经元的数量及免疫反应性均明显低于青年组.结论老年动物脊髓调节功能的减弱可能与GABA能神经元减少有少.     

神经营养因子NGF、BDNF与围绝经期妇女认知功能关系的研究进展

神经营养因子(NTFs)是近几年神经科学研究的热点,研究显示它在神经系统中发挥独特的作用,尤其是神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)在脑内功能及其表达调控方面具有重要作用。围绝经期妇女随着雌激素水平的降低会产生认知功能的减退,有研究发现去卵巢动物(OVX)雌激素水平降低可以导致某些NGF、BDNF的丢失。通过启动内源性NGF和BDNF的表达而实现对神经元的保护可能为雌激素替代治疗(ERT)脑保护作用的一种机制。本文就近几年的研究进展做一简要综述。     

猫视网膜多巴胺能神经元的形态和发育

Morphology and development of dopaminergic neurons has been studied in the kitten retina, using tyrosine hydroxylase (TH) immunocytochemistry. TH immunoreactive (TH+) cells are already presented in whole amount and sectioned retina at first postnatal day (P1). According to soma size, shape, dendritic process pattern and immunoreactivity, two classes, type I or large dark staining TH+ cells and type II or small light staining TH+ cells are recognized. The TH I cells which consisting of normal placed DA amacrine cells, displaced DA amacrine cells and DA interplex-form-like cells, gradually mature during postnatal development, while TH II cells decrease quickly and through disappear at P30. After eye opening TH I amacrine cells, especially their dendrites develop quickly. The soma diameters increase from 11.8 microns (P1) to 14.2 microns (P30). The dendritic fields increase in size and complexity. At P1 the thick radiating dendrites emerge from the cell body with small or large "spines" and many growth cones. At P13 the dendritic field is markedly enlarged and only a few growth cones can be seen on some stained dendrites. In addition, the dendritic spines are no longer apparent and they are a part of rudimentary rings. By P30 the dendritic plexus of TH+ dendrites and rings in the out most part of IPL, typical of the adult cells, are complete. The influence of light on the development of DA cells after eye opening and the possibility of neurotransmitter changing are discussed.     

人胎大肠氮能神经元发育的研究

By using histochemical methed of NADPH-diaphorse, the development of the nitrergic neurons in the large intestine of human fetus were studied. The results showed: At the fifth month of gestation, weak positive reaction of nitric oxide synthase (NOS) appeared in part of the round cells of intermuscular ganglia. The round cells differentiated into the nitrergic nerve cells. At the sixth month, the bodies of nitrergic neurons were obviously enlarged, the processes of which were lengthened. The nitrergic nerve fibers were seen in the muscle layer, the submucosa and the base of the intestinal gland. The growth and development of nitrergic neurons reached its peak at the seventh month. The number of intermuscular ganglionic cells was increased. The density of nitrergic nerve fibers was increased in the inner circular muscle layer, and have bead-like structures. At the eighth to tenth month, the staining intensity of nitrergic neurons was increased. The myenteric plexus was densely distributed with nitrergic nerve cell bodies, whereas the submucosa and the inner circular muscle layers contained only a few neurons. The nitrergic nerve fibers were observed in all layer of large intestine, the density of the distribution of nitrergic nerve fibers was by far the highest in the inner circular muscle layer, less in the submucosa and outer longitudinal muscle layer, and only a few were found in the mucous layer. To our knowledge, it is the first time that the development of nitrergic neurons in the large intestine of human fetus was demonstrated.     

创伤后应激障碍对小鼠背侧及腹侧海马谷氨酸能和GABA能神经元兴奋性的影响

本研究旨在通过检测创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder, PTSD)小鼠背侧海马(dorsal hippocampus, dHPC)及腹侧海马(ventral hippocampus, vHPC)神经元电生理特性的改变,探讨海马神经元的可塑性与PTSD后记忆之间的关系。随机将C57Thy1-YFP/GAD67-GFP品系雄性小鼠分为对照组和PTSD组,通过对小鼠施加不可逃避足底电击(foot shock, FS)建立PTSD模型,利用Morris水迷宫探查小鼠空间学习记忆的变化,在全细胞记录模式下检测dHPC和vHPC谷氨酸能神经元和GABA能神经元电生理特性的变化。结果显示：FS可显著降低小鼠平均移动速度、提高僵立次数和僵立百分比;PTSD可显著延长定位逃避训练中的定位逃避期,缩短定位探查训练中在原象限内游泳停留时间,延长在对侧象限内游泳停留时间;FS同时提高dHPC谷氨酸能神经元和vHPC GABA能神经元能障、绝对不应期和动作电位间距,降低dHPC GABA能神经元和vHPC谷氨酸能神经元能障、绝对不应期和动作电位间距。以上结果表明：PTS...     

KF核及B(o)tzinger复合体内GABA能神经元向膈神经核的投射

实验在６只成年猫上进行。将ＷＧＡ－ＨＲＰ微量注入Ｃ５膈神经核内,通过逆行追踪及ＧＡＢＡ免疫组织化学ＦＩＴＣ荧光双重标记方法,研究了脑干内ＧＡＢＡ能神经元向膈神经核的投射。结果在脑桥ＫＦ核和面神经后核周围区（即Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体）观察到ＧＡＢＡ－ＨＲＰ双标神经元。另外,在中缝大核、旁巨细胞外侧核及前庭神经核也观察到双标神经元。本实验结果表明：发自上述脑干神经核团,特别是ＫＦ核及Ｂｏｔｚｉｎｇｅ