甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用

目的探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用。方法使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100IU.L-1刺激MDA-MB-231细胞96h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异。甘精胰岛素与人胰岛素以10IU.L-1分别刺激48、72、96h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义。甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性。ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用。结论甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

黄连小檗碱对人肠癌Caco-2细胞凋亡和细胞周期的影响

目的探讨黄连小檗碱对人肠癌细胞株Caco-2细胞周期和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法,检测不同时间点不同浓度黄连小檗碱对Caco-2细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法),检测不同浓度黄连小檗碱对Caco-2细胞周期和凋亡的影响。结果不同浓度的黄连小檗碱干预肠癌细胞Caco-2不同时间后,均具有一定的增殖抑制作用,在一定浓度范围内,可以剂量和时间依赖性的抑制Caco-2细胞增殖。黄连小檗碱干预细胞24 h后,可使Caco-2细胞停滞在G2/M期,诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论黄连小檗碱可以显著抑制Caco-2细胞增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期从而诱导细胞凋亡有关。     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其机制

研究狼毒大戟中没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行探讨。采用细胞与Matrigel黏附实验,Transwell小室检测EG对人乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附、侵袭和运动能力的影响。RT-PCR检测EG对MMP-2、MMP-9的m RNA表达的影响;Western blot法检测EG对Akt-NF-κB信号转导通路蛋白表达的变化。结果显示,EG在体外可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、运动以及黏附能力(P<0.05)。EG可抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平,抑制Akt-NF-κB信号转导通路中的Akt磷酸化和NF-κB蛋白表达。因此认为EG在体外具有一定的抑制乳腺癌细胞侵袭迁移的作用,其机制与抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平、抑制Akt磷酸化过程和NF-κB蛋白表达有关。     

阳和汤含药血清对缺氧乳腺癌干细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用及其机制

目的研究阳和汤含药血清对缺氧乳腺癌干细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用及其机制。方法体外培养缺氧乳腺癌干细胞MDA-MB-231,采用阳和汤高、中、低浓度含药血清,顺铂,单药或联合HIF-1α抑制剂处理。MTT法检测细胞增殖活性,Real-time PCR法检测HIF-1α、IGF-II、L-Selectin的m RNA表达变化,Western blot检测HIF-1α、IGF-II、L-Selectin的蛋白表达变化。结果阳和汤含药血清能抑制细胞生长,而且呈浓度依赖性,阳和汤含药血清能下调HIF-1α、IGF-II、L-Selectin的m RNA及蛋白表达,且呈浓度依赖性,联合HIF-1α抑制剂效果更明显。结论阳和汤含药血清能抑制缺氧乳腺癌干细胞的增殖,可能通过调节HIF-1α/IGF-II信号通路及L-Selectin的表达抑制乳腺癌细胞的增殖转移。     

黄芩素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的：探讨植物雌激素结构类似物黄芩素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA－MB-231增殖的影响。方法：MTT法测定不同剂量黄芩素作用于MCF－7和MDA—MB-231细胞株不同时间后对细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况。结果：随黄芩素浓度增加,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率逐渐下降;随着黄芩素作用时间的延长,细胞的生存率也逐渐下降。结论：黄芩素能抑制MCF07和MDA—MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

黄连碱对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用及其机制研究

目的 探讨黄连碱对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠的治疗作用及其机制。方法 60只健康SD大鼠,♂,随机分为空白组、模型组、尿毒清组、黄连碱200,100和50 mg·kg^-1剂量组,每组10只。除空白组外,各组大鼠灌胃腺嘌吟,连续28 d,制成CRF模型。造模同时,黄连碱200,100和50 mg·kg^-1剂量组每日分别灌胃200,100和50 mg·kg^-1黄连碱。治疗后,观察各组大鼠体质量的变化、检测24 h尿量及尿蛋白含量,Elisa法检测各组大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、TGF-β1及PAI-1的含量水平、Western blot法检测大鼠肾组织TGF-β1及PAI-1蛋白的表达。结果 与模型组比较,200,100和50 mg·kg^-1剂量的黄连碱干预后,大鼠体质量及24 h尿量显著增加（P<0.05）,尿蛋白显著降低（P<0.05）,且血清中BUN、SCr、TGF-β1及PAI-1含量和肾组织TGF-β1和PAI-1表达均显著降低（P <0.05）。结论 黄连碱对CRF大鼠的肾功有一定的改善作用,其机制与降低血清及肾组织中TGF-β1和PAI-1表达有关。     

胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-543生长的增殖作用

目的探讨胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-543生长的增殖作用。方法将胰岛素直接作用于体外培养的人乳腺癌细胞株(MDA-MB-543),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期分布。结果胰岛素在1～10 mU/mL浓度范围内和作用时间2～16 h范围内,对MDA-MB-543增殖作用逐步增强,反映增殖活性的S期和G2/M期细胞比例逐渐增多,其中S期细胞比例与对照组比较有显著性差异(均P<0.05或0.01)。结论胰岛素能加快诱导MDA-MB-543细胞进入细胞周期S期增殖,呈剂量和时间依赖关系,但是短暂和可逆的。     

氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制

目的观察氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用氯喹20,40和80μmol·L~(-1)分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和CDK4,细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和自噬底物SQSTM1表达水平。结果氯喹20,40和80μmol·L~(-1)与MDA-MB-231细胞作用24和48 h后,均能有效抑制细胞增殖(P<0.01)。与细胞对照组相比,氯喹20和40μmol·L~(-1)处理24 h,G_0/G_1期细胞百分比显著增高(P<0.01);80μmol·L~(-1)组G_2/M期细胞百分比升高(P<0.01),且细胞凋亡率增加(P<0.01)。处理48 h,与细胞对照组相比,氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。氯喹3组处理24 h,与细胞对照组相比,细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低(P<0.01),活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强(P<0.01),LC3B和SQSTM1表达水平显著升高(P<0.01)。结论氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。     

RP-HPLC测定不同品种黄连中的黄连碱和表小檗碱

目的 测定不同黄连药材中黄连碱、表小檗碱的含量。方法 采用反相高效液相色谱法。结果 不同品种的黄连中黄连碱的含量均在l％以上；所有的黄连均含有黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱的五个峰，它们之间的含量比例为1．5：1：6：1．5：0．8。结论 所用方法可作为黄连药材的定量测定方法。     

索拉非尼联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞抑制作用的研究

目的观察索拉非尼联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞的抑制作用。方法不同浓度索拉非尼联合多柔比星处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞。①以CCK-8法检测处理24、48和72 h后MDA-MB-231和A549的抑制率;②以细胞划痕试验观察受试细胞的迁移能力;③以印迹试验检测处理24 h后MDAMB-231细胞内P-ERK和Bcl-2的表达情况。结果索拉非尼联合多柔比星能显著抑制人肺癌A549细胞和人乳腺癌MDAMB-231细胞的体外增殖,且具时间依赖性;人乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度索拉非尼联合多柔比星处理24 h,P-ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调并呈剂量依赖性。结论索拉非尼联合多柔比星具有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡的作用。     

Docetaxel-loaded PLGA nanoparticles to increase pharmacological sensitivity in MDA-MB-231 and MCF-7 breast cancer cells

This study aimed to develop docetaxel (DTX) loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) nanoparticles (DTX-NPs) and to evaluate the different pharmacological sensitivity of NPs to MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells. NPs containing DTX or coumarin-6 were prepared by the nanoprecipitation method using PLGA as a polymer and d-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate (TPGS) as a surfactant. The physicochemical properties of NPs were characterized. In vitro anticancer effect and cellular uptake were evaluated in breast cancer cells. The particle size and zeta potential of the DTX-NPs were 160.5 ± 3.0 nm and –26.7 ± 0.46 mV, respectively. The encapsulation efficiency and drug loading were 81.3 ± 1.85% and 10.6 ± 0.24%, respectively. The in vitro release of DTX from the DTX-NPs was sustained at pH 7.4 containing 0.5% Tween 80. The viability of MDA-MB-231 and MCF-7 cells with DTX-NPs was 37.5 ± 0.5% and 30.3 ± 1.13%, respectively. The IC₅₀ values of DTX-NPs were 3.92- and 6.75-fold lower than that of DTX for MDA-MB-231 cells and MCF-7 cells, respectively. The cellular uptake of coumarin-6-loaded PLGA-NPs in MCF-7 cells was significantly higher than that in MDA-MB-231 cells. The pharmacological sensitivity in breast cancer cells was higher on MCF-7 cells than on MDA-MB-231 cells. In conclusion, we successfully developed DTX-NPs that showed a great potential for the controlled release of DTX. DTX-NPs are an effective formulation for improving anticancer effect in breast cancer cells.     

川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭黏附能力的影响

目的观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达。方法用细胞黏附实验,检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用;用Transwell小室检测不同浓度川芎嗪干预后MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的改变;用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9 mRNA表达的抑制作用。结果川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力有明显抑制作用,对MDA-MB-231细胞的MMP-2 mRNA的表达有明显抑制作用;但对MMP-9mRNA的表达无明显影响。结论川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。     

三氧化二砷对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响

目的观察不同浓度的三氧化二砷对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μmol.L-1)的三氧化二砷作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48、72 h后的细胞增殖率,Western blot检测不同浓度的三氧化二砷作用于MDA-MB-231细胞24 h的PCNA水平。结果不同浓度的三氧化二砷作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,随着时间的推移和浓度的升高,细胞增殖抑制率增加,有浓度和时间依赖性,以1.0μmol.L-1三氧化二砷作用最明显,Western blot检测显示,与对照组比较,随着浓度的升高,PCNA蛋白降低,其中以1.0μmol.L-1三氧化二砷作用后最明显。结论三氧化二砷能促进MDA-MB-231细胞的凋亡,其机制可能与下调PCNA表达的促凋亡途径有关。     

路路通酸对乳腺癌MCF-7细胞和宫颈癌C-33A细胞增殖的影响

目的研究路路通酸(BTA)对乳腺癌MCF-7细胞及宫颈癌C-33A细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测不同浓度BTA作用不同时间后对MCF-7细胞、C-33A细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测BTA处理后细胞周期的变化。结果 BTA作用于乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h后的IC50分别为(37.62±1.72)、(27.32±0.99)、(19.19±0.90)μmol/L。BTA作用于宫颈癌C-33A细胞24、48、72 h后的IC50分别为(34.55±0.88)、(27.20±1.03)、(16.74±0.79)μmol/L,BTA对2种细胞增殖有明显抑制作用,且呈浓度时间依赖性(P<0.05),流式结果显示,BTA将MCF-7细胞阻滞在S期,并诱导其凋亡;BTA将C-33A细胞阻滞在G1-S期。结论BTA对乳腺癌MCF-7细胞和宫颈癌C-33A细胞具有较强的增殖抑制作用,其机制与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关。     

Grb2-相关蛋白2参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的机制研究

目的探讨Grb2-相关蛋白2(Gab2)在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-213迁移中的作用。方法流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK的表达。Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。免疫沉降及Western-blot检测RANKL刺激后p-Tyr-Gab2和Gab2的表达。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Tyr-Gab2表达一过性升高。结论 Gab2参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移。     

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。