胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、IGF结合蛋白-2和LH受体mRNA在卵泡闭锁过程中的表达及调节

研究了IGF-Ⅰ、IGF结合蛋白-2(IGFBP-2)和促黄体激素受体(LHR)mRNA在卵泡闭锁过程中的表达及调节.给26日龄大鼠注射15 IU PMSG,经检测,证实PMSG处理48 h后,一些小窦状卵泡的颗粒细胞已发生凋亡;96 h在排卵前卵泡中已可检测到凋亡细胞;120 h大多数的排卵前卵泡中均出现大量的凋亡细胞.48～120 h IGF-Ⅰ主要在窦前卵泡和小窦状卵泡表达;48与96 h,窦前与窦状卵泡的膜细胞均表达高水平的IGFBP-2.在48 h,颗粒细胞中有LHR的强信号,但在96和120 h,颗粒细胞的LHR表达减弱(P＜0.001).表皮生长因子(EGF)和IGF-Ⅰ均抑制窦前和窦状卵泡颗粒细胞凋亡.同时观察到EGF促进IGF-Ⅰ mRNA表达,IGF-Ⅰ刺激排卵前卵泡表达LHR mRNA.上述结果表明,各级卵泡的闭锁可能均受EGF和IGF-Ⅰ相互作用的调节.     

草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达

 为构建草鱼 (Ctenopharyngodonidellus )胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )大肠杆菌表达质粒 ,对已克隆到的草鱼IGF Ⅰ基因进行改造 .改造后的基因去除了原cDNA的信号肽和E区序列 ,并在基因的两端分别加入起始密码子和终止密码子 .将改造后的编码草鱼IGF Ⅰ成熟肽基因亚克隆到pBV 2 2 0中 ,构建成表达质粒pBVgIGF7.转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)进行表达 .SDS PAGE显示 ,含重组表达质粒的菌株经热诱导后表达出一约 7 5kD的特异蛋白 .表达量占菌体总蛋白的2 0 0 3% ,表达产物主要以包涵体形式存在 .重组蛋白经纯化和复性后 ,采用MTT法测定其对草鱼吻端成纤维细胞PSF和草鱼卵巢细胞CO的促增殖作用 .结果表明 ,所获得的重组草鱼IGF Ⅰ具有生物活性     

虹鳟胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中的融合表达及促有丝分裂活性

The preparation of recombinant rainbow trout insulin like growth factorsⅠ(IGF Ⅰ) andⅡ(IGF Ⅱ) using the His6 fusion polypeptide technique and the mitogen ic activities of these compounds were investigated. Rainbow trout IGF Ⅰand IGF ⅡB C A D domain cDNA were subcloned into expression vector pET 15b (Nova gen, USA) and expressed in host E. coli BL21 (DE3) as fusion polypeptides co ntai ning a stretch of 6 histidines at the N terminus (referred as His6 fusion polyp e ptide). The addition of IPTG (0 4 mmol/L) induced the expression of polypeptide s with a molecular weight of about 10 0 kDa. The expressed proteins were ammoniu m sulfate fractionally precipitated and further purified using a Ni 2+ His ·Bind R esin (Novagen, USA) affinity column. The reduced SDS PAGE showed that IGF Ⅰ w as of 80% purity and IGF Ⅱ was of 90% purity. The rainbow trout IGF Ⅰ His6 fusi on polypeptide showed dose dependent mitogenic effects on BALB/NIH3T3 cells in th e serum free medium culture, and rainbow trout IGF Ⅱ His6 fusion polypeptide al s o showed this kind of activity, but with lower potency. Taken together,these re sults indicated that the rainbow trout IGF Ⅰ and ⅡHis6 fusion polypeptides pr o duced in E. coli were biologically active, with IGF Ⅰ His6 fusion polypept ide of higher potency.     

人胰岛素样生长因子Ⅰ在大肠杆菌中的表达研究

胰岛素样生长因子Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）是一种多功能细胞增殖调控因子,它对许多疾病有较好的治疗作用．为了获得大量的ＩＧＦ－Ⅰ产品,在测定了ＩＧＦ－Ⅰ全长序列的基础上,构建了ＩＧＦ－Ⅰ表达载体ｐＢＶＩＧＦ,经热诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：含有重组表达质粒的菌株可表达出７．６ｋＤ的蛋白．研究了不同菌株对ＩＧＦ－Ⅰ表达的影响．ＩＧＦ－Ⅰ的表达水平可达１５ｍｇ／Ｌ．重组蛋白主要以包涵体形式存在,进行了初步纯化和复性研究,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＧＦ－Ⅰ的抗原性．并初步建立了ＩＧＦ－Ⅰ生物活性测定方法．     

IGF-Ⅰ及其受体、IGF结合蛋白-2和LH受体mRNA在卵泡中的表达

利用原位杂交和原位DNA－3’末端标记的方法研究了胰岛素样生长因子河（IG－I）、IGF－I受体、IGF结合蛋白－2、和促性腺激素受体的信使核糖核酸（mRNA）在不同生长与闭锁阶段的大鼠卵巢卵泡中表达的变化。结果表明：IGF－I主要在正常生长的初级卵泡、窦前卵泡和小窦状卵泡中表达。在各生长与成熟阶段的卵泡中都检测到IGF－I受体mRNA,闭锁卵泡的IGF－I受体表达降低。窦前与窦状的生长和闭锁卵泡均表达IGFBP－2。促卵泡激素（FSH）受体在窦前和小窦状卵泡的表达水平比其在大卵泡中的高。窦前与小窦状卵泡仅在膜细胞中表达黄体生成素（LH）受体mRNA,大卵泡的膜细胞与颗粒细胞均表达LH受体,在闭锁卵泡中仅在膜细胞中观察到LH受体的信号。综上结果,提示IGF－I,IGF－I受体和FSH受体在窦前和小窦状卵泡中的协同表达对卵泡的早期发育有重要作用。LH受体mRNA特异地在大卵泡的颗粒细胞中表达可能与优势卵泡选择相关。     

头鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆与分析

胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)是一单链多肽。在脊椎动物中，IGF-Ⅰ通过介导生长激素达到促进生长的作用。为研究鲤科鱼类IGF-Ⅰ的结构功能及在水产养殖中的潜在应用前景，采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，从团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏的总RNA中扩增出IGF-ⅠCdna。测定了该基因序列，推导其编码的蛋白质序列。克隆 的Cdna序列编码包括信号肽和B、C、A、D、E 6个区域的161个氨基酸。E区域分析结果表明所克隆的团头鲂IGF-Ⅰ序列属于IGF-ⅠEa-2亚型。     

团头鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆与分析

胰岛素样生长因子－Ⅰ（IGF－Ⅰ）是一单链多肽。在脊椎动物中,IGF－Ⅰ通过介导生长激素达到促进生长的作用。为研究鲤科鱼类IGF－Ⅰ的结构功能及在水产养殖中的潜在应用前景,采用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法,从团头鲂（Megalobrama amblycephala）肝脏的总RNA中扩增出IGF－Ⅰ cDNA。测定了该基因序列,推导其编码的蛋白质序列,克隆的cDNA序列编码包括信号肽和B、C、A、D、E6个区域的161个氨基酸。E区域分析结果表明所克隆的团头鲂IGF－Ⅰ序列属于IGF－ⅠEa-2亚型。     

大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ基因的克隆及表达

以大鼠染色体DNA为模板,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因外显子2编码区和外显子3编码区,并使外显子2编码区的3′端与外显子的3编码区的5′端有相同的40个碱基,采用外显子拼接法,以两种扩增产物为模板再次进行PCR,得到210bp的大鼠IGF-Ⅰ基因编码序列,将此序列克隆入pUC18质粒进一步构建表达型重组粒pGEX-IGF-Ⅰ,并在大肠杆菌DH5α中进行诱导表达。表达产物经SDS－PAGE分析及Western blot检测,并经体外实验证明其具有刺激细胞增殖的生物活性。     

胰岛素样生长因子-1 受体(IGF-IR)在乳腺癌组织中的表达及其 临床意义初探

目的:检测分析胰岛素样生长因子-1受体(IGF-IR)在乳腺癌组织中的表达状况及其临床意义。方法:应用半运用半定量RT-PCR方法分析84例乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中IGF-1R基因mRNA的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征及预后之间的关系。结果:乳腺癌组织中IGF-1R基因mRNA表达水平显著高于癌旁乳腺组织,二者具有统计学差别(P<0.001)。乳腺癌组织中IGF-1R基因mRNA表达水平与肿瘤组织分化程度及乳腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况显著相关(P值分别是0.005,0.025和0.041)。另外,高表达IGF-1R的乳腺癌患者的五年总体生存率(38.3%)显著高于低表达IGF-1R的患者(49.7%;P=0.009)。多因素COX模型分析结果表明:IGF-1R基因mRNA表达水平是乳腺癌患者的一个独立预后分子(HR=2.78,95%CI:1.94-3.94,P=0.041)。结论:IGF-1R基因表达水平上调在乳腺癌发展过程中起着重要的作用。IGF-1R基因mRNA表达水平有望成为临床乳腺癌患者预后判断的一个重要分子标志物。     

胰岛素样生长因子-1受体（IGF—IR）在乳腺癌组织中的表达及其临床意义初探

目的：检测分析胰岛素样生长因子-1受体（IGF-IR）在乳腺癌组织中的表达状况及其临床意义。方法：应用半运用半定量RT-PCR方法分析84例乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中IGF—IR基因mRNA的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征及预后之间的关系。结果：乳腺癌组织中IGF-IR基因mRNA表达水平显著高于癌旁乳腺组织,二者具有统计学差别（P〈0．001）。乳腺癌组织中IGF-IR基因mRNA表达水平与肿瘤组织分化程度及乳腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况显著相关（P值分别是0．005,0．025和0．041）。另外,高表达IGF-IR的乳腺癌患者的五年总体生存率（38．3％）显著高于低表达IGF-1R的患者（49．7％;P=0．009）。多因素COX模型分析结果表明：IGF-IR基因mRNA表达水平是乳腺癌患者的一个独立预后分子（HR=2．78,95％CI：1．94-3．94,P=0．041）。结论：IGF-IR基因表达水平上调在乳腺癌发展过程中起着重要的作用。IGF-IR基因mRNA表达水平有望成为临床乳腺癌患者预后判断的一个重要分子标志物。     

胰岛素样生长因子1及其在组织和器官生长发育中的作用

胰岛素样生长因子1(IGF1),具有调节组织细胞增殖、分化、有丝分裂等功能。研究表明IGF1不仅参与众多疾病的发生,还参与了不同组织和器官的发育过程。对IGF1信号通路及其在机体发育中的作用进行了综述。     

类胰岛素生长因子-Ⅰ和胰岛素表现其功能的结构和分子基础

综述了近年来关于IGF-Ⅰ和胰岛素表现生理功能的结构基础和分子基础研究进展.IGF-Ⅰ和胰岛素是胰岛素家族中的2个重要成员, 两者的分子结构高度同源, 两者的受体相似且属同一家族, 两者的生理功能可彼此交叉, 但各自具有主要的生理功能.IGF-Ⅰ的主要生理功能是促进细胞生长, 胰岛素的主要生理功能是促进葡萄糖的摄取和代谢.生物大分子的功能及其表现的基础是分子结构及参与功能表现的诸多分子, 如受体、信号分子等等.     

胰岛素样生长因子受体Ⅰ序列结构的生物信息学分析

胰岛素样生长因子受体Ⅰ的3'UTR长度大于7 kb,结构复杂,有多种mi RNAs的结合位点,参与信号通路中MAPK及PI3K/AKT的调节和多种肿瘤的形成和发展,通过生物信息学分析知道其结构特点,为后续研究提供思路。分析表明儿童神经胶质瘤中IGF1R的3'UTR与mi RNAs结合位点突变率最高。分析IGF1R序列3'UTR的结构,mi RNAs结合位点,氨基酸序列的理化性质,亲疏水性,糖基化和磷酸化位点,二级结构和三级结构建模。IGF1R三级结构与配体IGF1的三级结构模拟分子对接,得到2种蛋白相互作用的氨基酸位置及名称。因此,通过对IGF1R 3'UTR突变,降低与mi RNAs的结合,IGF1R表达上调,同时改变与IGF1的氨基酸结合位点,降低2种蛋白的相互作用,从而抑制IGF1R的作用。     

卵巢中的胰岛素样生长因子系统

本文详细阐述了胰岛素样生长因子（IGFs)系统各个成员的结构及其在卵巢中的表达和作用机制。IGFs是这一系统的中间环节,与IGFs受体作用刺激卵巢细胞中类固醇激素的生产和DNA合成,能够介导和扩大促性腺激素对卵巢功能的作用。IGFs与胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBPs)发生高亲和性结合,卵巢中自由的IGFs的水平受IGFBPs的调节。而IGFBPs蛋白酶能够降低IGFBPs和IGFs的亲和性,从而参与调节IGFs在卵巢中的作用。深入的研究这一系统,对于进一步了解卵巢卵泡生长发育、分化以及闭锁,卵泡细胞的增殖和凋亡的内在机制,以及提高动物的繁殖力有重要意义。     

宽鳍鱲胰岛素样生长因子-Ⅰ的克隆及繁殖期前后表达分析

为探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ, IGF-Ⅰ)对宽鳍鱲(Zacco platypus)繁殖期前后生长性状的影响, 开展了宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因序列的克隆及表达定位分析。宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因全长13707 bp, 包含5个外显子、4个内含子, 其中5个外显子长度分别为222、160、182、36和829 bp; 内含子长度分别为1194、7771、254和1879 bp, 推测开放阅读框为486 bp, 编码161个氨基酸。实时荧光定量PCR(Real-time qPCR, RT-qPCR)结果显示, 宽鳍鱲IGF-Ⅰ mRNA在肝脏组织中的表达水平最高, 其次是性腺、脾脏、心脏和脑, 在肾脏中表达水平最低。在7—8月, 处于繁殖期的性成熟宽鳍鱲性腺中IGF-Ⅰ表达水平显著上升, 繁殖期过后回落至最低值。在其他组织中IGF-Ⅰ表达水平在生长发育过程和繁殖期前后波动不大, 且雄鱼大多数组织中IGF-Ⅰ基因平均表达水平高于雌鱼。荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization, FISH)定位显示, 宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因基本为胞浆阳性, 少数为核阳性, 在肝组织中呈全胞质性分布, 在性腺组织的精母细胞、卵泡膜及卵泡液中阳性表达。上述结果表明宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因表达模式具有性别差异性, 推测精巢中IGF-Ⅰ在繁殖期的高表达是宽鳍鱲雄性成体大于雌性成体的原因之一。研究结果为宽鳍鱲的性二态和人工繁育的研究提供参考资料。     

重组类胰岛素样生长因子-Ⅰ的纯化与复性

目的 获得高纯度和高活性的胰岛素样生长因子（Insulin-like growth factor, IGF-1）;方法 构建好的BL21大肠杆菌工程菌经IPTG诱导,以融合一段截短型半乳糖苷酶及His-tag形式表达IGF-1融合蛋白(约15,000Da),超声破碎,提取包涵体经镍柱亲和层析后, 用羟氨切割纯化的融合蛋白,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及GSH/GSSG的存在下复性。结果 经Ni2＋柱亲和层析, IGF-1纯度达90％以上,复性后得到有较高生物活性的IGF-1。结论 IGF-1发酵及纯化和复性方法的建立为大量生产IGF-1打下了基础。     

绒山羊表达红色荧光及转胰岛素样生长因子Ⅰ基因体细胞核移植胚胎的制备

利用含有红色荧光和Neor基因双选择标记的IGF1毛囊特异表达载体pCDsR-KI转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得具有红色荧光的IGF1转基因细胞.核移植操作前,通过比较卵母细胞体外成熟培养不同时间的成熟率以及核与极体的距离,确定20h为绒山羊卵母细胞的最佳成熟时间.比较了不同激活方法和培养体系对孤雌胚激活效率和孤雌胚早期发育的影响,结果表明：IA23187＋6-DMAP组的激活效率和囊胚率（88.7%＆21.6%）均稍高于乙醇＋6-DMAP组（86.4%＆20.4%）,但二组相应数据之间差异均不显著（P〉0.05）,选择前者作为转基因核移植胚的激活方案;SOFaa和CR1aa两种体外培养体系中,孤雌胚卵裂率（86.8%vs83.9%）和囊胚率（23.1%vs17.2%）均差异不显著（P〉0.05）,选择结果较好的SOFaa组.比较了不同电融合参数的融合效果,结果表明：190V/mm处理组结果（62.4%）显著高于130V/mm（32.8%）和200V/mm（42.9%）组（P〈0.05）.通过T-SCNT获得转基因重构胚胎203枚,48h卵裂率为79.3%（161/203）,第7~9天囊胚发育率为15.3%（31/203）.所得到的31枚囊胚中,较强表达红色荧光蛋白的囊胚数为17枚（阳性率为54.8%）.随机挑选两枚红色荧光囊胚以PCR法进行鉴定,结果全部为转基因阳性.以上结果显示：（i）表达载体的红色荧光蛋白和Neor基因可以正常表达可获取转基因细胞和阳性转基因胚胎;（ii）所制备转基因囊胚仍有部分不表达红色荧光蛋白,说明即使选择转基因阳性细胞进行核移植所得囊胚也并非全部为转基因阳性,在囊胚期进一步筛选是必要的;（iii）通过TSCNT操作及优化,成功获得了表达红色荧光并同时转有IGF1基因的绒山羊胚胎,为绒山羊的转基因研究提供基础数据.     

胰岛素样生长因子结合蛋白-7′在大鼠胚胎植入过程中的差异表达与调节

胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)已经证实在人的妊娠过程中起了重要作用,但在大鼠中尚未见报道.在过去的研究中曾利用抑制消减杂交(SSH)方法分析了植入前和植入期的基因表达谱,发现IGFBP-7存在差异表达.通过RNA印迹和原位杂交,分析了IGFBP-7部分序列(编码区531～928nt,称作IGFBP-7′)在大鼠妊娠早期子宫中的时空表达模式.用RT-PCR方法检测了其在不同组织器官及假孕、人工诱导蜕膜化和延迟着床激活大鼠子宫中的表达模式.结果显示:在大鼠妊娠第5天IGFBP-7′mRNA的表达量开始增加,第5.5和6天表达量显著高于植入前期.IGFBP-7′mRNA主要表达于子宫腔上皮和腺上皮.IGFBP-7′mRNA表达无组织特异性,在大鼠的下丘脑、垂体、卵巢、子宫、心、肝、脾、肺、肾等器官均有表达,在假孕的D1～D6大鼠子宫中均有表达,但无显著性差异,诱导蜕膜化后IGFBP-7′mRNA的表达量也无明显变化,但在延迟着床激活的大鼠子宫中表达显著增加.这些结果提示,在植入期IGFBP-7′的表达增加主要是由胚泡引起的,而非蜕膜化.在大鼠妊娠早期,IGFBP-7′的表达增加可能有利于胚胎植入的发生.     

鱼类胰岛素样生长因子-Ⅰ及其结合蛋白研究进展

鱼类胰岛素样生长因子—I(IGF—I)是一种70个氨基酸组成的蛋白质,分子量约7500D,是胰岛素样生长因子系统的重要成员,与胰岛素高度同源。本文综述了鱼类IGF—I的结构、作用模式及其IGFBPs的研究进展。