鸡蛋清卵铁传递蛋白的分离纯化

采用硫酸铵沉淀法和阴离子交换层析法从鸡蛋清内提取高纯度卵铁传递蛋白。结果表明：采用水稀释和硅藻土过滤澄清蛋清液,并结合微滤、超滤的预处理方法,去除蛋清中的黏蛋白等杂蛋白,然后采用不同饱和度的硫酸铵对上清液进行了定量盐析条件的试验,确定60%饱和硫酸铵为最佳试验条件;加入60%饱和硫酸铵盐析得到卵白蛋白粗品,上清液用DEAE-sepharose F.F.离子交换层析,分离得到卵铁传递蛋白,SDS-PAGE电泳检测达到95%以上纯度,凝胶过滤柱测定相对分子量为76000。该研究为实现蛋清中蛋白质的连续化提取奠定了基础。     

采用高效毛细管电泳法建立不同桑品种桑叶黄酮类化合物指纹图谱的试验

探讨了采用高效毛细管电泳(HPCE)法建立不同桑品种桑叶黄酮类化合物的指纹图谱的方法。电解质溶液由以10 mmol/L磷酸二氢钠-20 mmol/L的硼砂溶液(pH8.62)作缓冲液,在25℃,20 kV的压力下进行电泳,245nm波长处检测,线性关系良好,在20 min内完全分离。上述条件下,桑叶成分得到了较好的分离,符合定量测定和定性研究的要求。该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,可应用于桑叶质量检测。     

应用醋酸纤维膜电泳技术分离东亚钳蝎蝎毒蛋白组分

本文介绍了应用醋酸纤维膜电泳技术对东亚钳蝎蝎毒进行蛋白组分分离,并对缓冲液离子强度、电泳电流强度及电泳时间等方面进行了探索。试验结果表明,应用醋酸纤维膜电泳技术可以有效地分离蝎毒蛋白组分。在pH8.6、0.05mol/L巴比妥-巴比妥纳缓冲液中,电流强度0.6mA/cm、电泳时间90分钟与电流强度0.8mA/cm、电泳时间60分钟条件下的分离效果最佳,可获得15条电泳带,阴极端5条,点样处1条,阳极端9条。     

沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用

根据沙门氏菌fimY基因建立了用于检测沙门氏菌的通用PCR方法。对收集的A-F群标准菌株和临床分离的60株沙门氏菌分离株和11种非沙门氏菌进行PCR检测,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果所有沙门氏菌均扩增出526bp的特异性条带,而非沙门氏菌均未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中93cfu的沙门氏菌,还可检出含3cfu的样品用BP预增菌或MM增菌后的菌液。说明该方法敏感性高、特异性强。采用直接菌体加入法、热裂解、反复冻融、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒同样的效果,且操作简便快速、经济、效果好,值得推广应用。     

利用免疫沉淀法对鸡源志贺菌IpaC蛋白受体候选蛋白的初步筛选

为筛选鸡源志贺菌IpaC蛋白的受体。利用生物素标记试剂盒标记IpaC蛋白,分离培养原代鸡肠上皮细胞和。利用ProteoExtract?天然膜蛋白提取试剂盒提取鸡肠上皮细胞的膜蛋白;应用免疫沉淀、免疫磁珠法分离富集与IpaC蛋白结合的蛋白质;利用SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果获得了与IpaC蛋白特异性结合的大约在34 000~55 000之间的蛋白条带。筛选得到的SDS-PAGE蛋白条带进行LC-MS/MS测序鉴定和生物信息学分析。初步将annexin A2,37 000Laminin receptor precursor,LIM and SH3protein 1,ras-related protein Rab-43作为IpaC蛋白受体的候选蛋白。为研究志贺菌在鸡体内的致病机制奠定基础,而且可以为评估鸡源志贺菌在公共卫生方面的重要性提供参考依据。     

家蚕核型多角体病毒多角体的快速提取方法

本文采用一种新的病毒多角体提取方法,对BmNPV和PcrNPV的多角体进行了提取,提取出的多角体分别用光学和电子扫描两种显微镜进行观察并拍照.同时从提取出的BmNPV多角体中提取其基因组DNA并电泳检测.发现DNA纯度较好.结果表明,可以用此方法大量制备病毒多角体.     

可溶性玉米须多糖的提取与纯化

本试验采用水提醇沉法提取玉米须多糖,在不同的煎煮时间、提取温度、水料比条件下,探索最佳提取条件。并用不同体积的乙醇沉淀多糖,得出最佳醇沉体积比。水提后的玉米须残渣用β-葡聚糖酶和木聚糖酶酶解提取,比较用不同的酶量酶解条件下的最适提取条件,提取的粗多糖用三氯乙酸(TCA)法除多糖蛋白,用紫外扫描检验蛋白是否除尽。结果表明,玉米须多糖提取的最佳条件为:80min、80℃、18倍的水料比、2.5倍体积乙醇沉淀效果最佳;3%浓度的TCA溶液除蛋白质效果最好;通过紫外扫描检测纯化样品表明糖结合蛋白基本除尽。     

猪链球菌2型38 000蛋白主要功能区基因的克隆与表达

根据GenBank中已发表的猪链球菌2型38000蛋白基因核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用PCR方法,以四川分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增38000蛋白主要功能区基因。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接转化宿主菌DH5α,提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。将目的片段定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、0.8mmol/LIPTG条件下进行诱导表达,结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量约为35000的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western blotting)证实该重组蛋白可以与猪链球菌2型阳性血清发生特异性反应。     

禽多杀性巴氏杆菌血清型与外膜蛋白型相关性研究

为了解禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)分离菌株的荚膜血清型、菌体血清型与外膜蛋白型之间的相关性,首先对自行分离的10个菌株采用间接血凝试验和琼脂扩散试验进行鉴定(均为A:1);然后采用超声波破碎、高速离心和十二烷基肌氨酸钠提取外膜蛋白,通过SDS-PAGE电泳的方法对上述10个菌株与...     

麻疯树饼粕分离蛋白提取工艺条件的研究

为确定麻疯树饼粕分离蛋白的最佳提取工艺条件,采用等电沉淀原理,通过碱溶酸沉法对带壳压榨后的麻疯树饼粕中的蛋白进行提取。结果表明:通过单因素试验确定在温度45℃,碱溶pH值为11,酸沉pH值4.5的条件下蛋白质和干物质得率较高,制得的分离蛋白样品粗蛋白含量达87.6%;氨基酸组成方面,除赖氨酸外,其余必需氨基酸均接近豆粕。在适宜的工艺条件下,可从麻疯树饼粕中提取分离蛋白。     

乳制品中糠氨酸和乳铁蛋白常用检测方法综述

为了推动奶业振兴,2016年国家奶业科技创新联盟发起实施了推动奶业可持续发展的专项研究项目——优质乳工程,它涵盖了创建优质乳标识制度、推动奶牛养殖技术升级,全面实施乳制品加工工艺标准化监管3个方面。其中优质乳标识制度提出了以活性酶类、活性蛋白和糠氨酸为核心的优质乳制品品质的评价方法。目前,在糠氨酸和乳铁蛋白检测中常用的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、毛细管电泳质谱联用法等。高效液相色谱法是最常用的检测方法,但前处理时间长且过程复杂,对样品纯度要求较高;液相色谱质谱联用法灵敏度高,但设备昂贵,对操作人员要求较高;毛细管电泳质谱法对生物大分子具有较好分离检测效果,但是毛细管电泳和质谱接口还存在一定缺陷,维护成本较高,检测重复性差。本文阐述了优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白的检测方法,比较了方法的优缺点,旨在为进一步开发优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白检测新方法提供参考。     

毛细管区带电泳测定饲料添加剂中酪蛋白磷酸肽含量的方法研究

利用毛细管区带电泳(CZE)对饲料添加剂中酪蛋白磷酸肽(CPP)样品进行分离，结果显示，用四硼酸钠缓冲溶液(20mmmol/L,pH9.2)及50cm×70μmi.d.石英毛细管柱，在工作电压30kV、检测波长200nm、柱温25℃的条件下，CPP得到较好的分离；同时，采用外标法对饲料添加剂样品中CPP各组分的含量进行了测定。     

瘤胃细菌DNA提取方法的研究与优化

为优化出可获得完整瘤胃细菌总DNA的方法,以满足分子生物学研究需要,试验采用3种DNA提取方法对瘤胃细菌DNA进行提取并对提取效果进行了比较。结果表明:细菌基因组试剂盒法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳无杂带,DNA的提取效果最佳,PCR扩增效果较好;珠磨-CTAB法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳结果存在少量杂带;水煮法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在2.0以上,无电泳条带,DNA严重降解。推荐采用细菌基因组DNA试剂盒法和珠磨-CTAB法对瘤胃细菌进行DNA提取。     

检测日本血吸虫感染性钉螺环介导等温扩增方法的建立

为建立检测日本血吸虫感染性钉螺的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,利用PrimerExplorer V3软件设计4条扩增血吸虫尾蚴钙结合蛋白基因的LAMP引物,酚氯仿法提取血吸虫感染性钉螺、阴性钉螺及肝吸虫感染豆螺基因组DNA进行LAMP反应,LAMP产物经显色、电泳、酶切及DNA序列分析鉴定.在100个阴性钉螺中分别加入20、10、8、6、4、2、1个阳性钉螺,提取DNA后进行LAMP扩增来检测该法的群体检测效果.结果显示,感染性钉螺检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组呈棕色(阴性);感染性钉螺LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性钉螺及感染肝吸虫豆螺无扩增产物;酶切及序列分析结果显示扩增产物为目的基因;LAMP可检测到100个阴性钉螺中含有阳性钉螺的最低数为2.结果表明,检测日本血吸虫感染性钉螺的LAMP方法特异、简便及具有较好的群体检测效果.     

桑椹与叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较试验

为建立适合于桑树蛋白质组研究的双向电泳技术体系,以桑品种"大10"的桑椹与叶片为材料,探讨了桑树蛋白质不同提取方法对凝胶电泳效果的影响。结果表明,改良酚提取法与常规的SDS提取法、尿素/硫脲提取法相比,电泳图谱清晰,分离效果良好,能检测到更多的蛋白质组分,适用于桑椹与叶片蛋白质IPG-IEF/SDS-PAGE双向电泳及SDS-PAGE电泳的样品制备。     

疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索。并确定了最佳工作条件，结果表明：匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V1．5h；封闭液为3％BSA时，封闭15min，封闭效果最好；AH6的最佳稀释度为1：4000。4℃下孵育过夜。马抗鼠二抗的最佳稀释度1：1000，室温下孵育30min。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100％，特异性为99．4％．与进口试剂盒（100％，100％）无显著差异，这为国产试剂盒研制提供了条件。     

绵羊肺炎支原体黏附因子的定点突变及原核表达

本研究采用点突变PCR方法成功克隆并表达了绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoiae,M.O)内蒙古分离株(SZWQ株)的黏附因子基因(SZWQ-860)。表达产物经SDS-PAGE电泳检测,与预期目的蛋白的大小一致,将重组蛋白纯化后经Western blot检测,结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。     

结核分枝杆菌菌体蛋白、多肽的提取及其对鸡免疫功能的影响

以结核分枝杆菌为原料,提取菌体蛋白和多肽。用Lowry法检测菌体蛋白、多肽的含量,并对菌体蛋白、多肽进行Tricine-SDS-PAGE,分析其组分。将所提取的菌体蛋白和多肽分7组作用于鸡体,即菌体蛋白高、中、低剂量组,透析多肽组,未破碎全菌体组,菌体蛋白注射组和对照组,除注射组外,其余6组均采用口服给药。各组试验鸡于给药后7、14、21和28 d 4次屠宰,分别检测新城疫抗体滴度和外周血淋巴细胞转化率。结果表明:不同批次提取的菌体蛋白、多肽含量相对稳定,没有明显差异;组分分析表明,菌体蛋白由多种组分构成,分子量为6.5~66 ku;动物试验结果表明:结核分枝杆菌菌体蛋白试验组均能提高鸡体的细胞免疫和体液免疫功能,尤以菌体蛋白注射组和菌体蛋白中剂量口服组诱导机体免疫效果较好。     

高山离子芥愈伤组织总RNA的提取方法研究

为了探寻提取高山离子芥（Chorispora bungeana）总RNA的最佳方法和条件。本研究分别采用改良的Trizol法、柱式离心法和CTAB法提取高山离子芥RNA,比较其得率、纯度、完整性和反转录后的PCR扩增效果;并对RNA的保存以及去RNA酶的处理进行了优化。结果表明,改良的Trizol法提取的RNA纯度和得率高、完整性好,转录后的PCR扩增效果好;RNA提取后室温保存8 h内降解较少,-80 ℃至少保存30 d。枪头、离心管等去RNA酶处理不完全会导致大量RNA降解,电泳槽等工具及电泳液的RNA酶灭活不彻底会使RNA在电泳过程中降解。     

新一代的磁珠法核酸自动提取仪研究进展

新一代的磁珠法核酸自动提取仪采用先进的磁珠分离技术,结合相关的磁珠分离试剂盒,可以从多种样品如全血、血清、组织、细胞中分离出高纯度的核酸。文中详细介绍了核酸自动提取仪的原理及应用,并通过检测证明该仪器运动控制稳定,可靠性好,提取效果优,自动化程度高。