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比较6种大孔树脂对苋籽ACE抑制肽的吸附-解吸效果,从中筛选出合适该活性肽分离纯化的树脂,并对其吸附-解吸工艺进行优化。结果表明,DA201-C树脂最适合苋籽ACE抑制肽的纯化,在样品质量浓度10mg/mL,pH为5,上样量1BV,流速6mL/min时,树脂的吸附效果最佳,吸附率达83.69%,再用5BV体积分数75%乙醇,以5mL/min的流速进行洗脱,此时几乎把吸附的多肽全部洗脱下来,解吸率为98.69%。经树脂纯化,样品的蛋白纯度为89.47%,脱盐率为88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%。 相似文献
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采用大孔吸附树脂(MAR)和凝胶过滤色谱法(GPC)从微生物发酵豆粕生产的粗肽制品中分离纯化大豆活性肽。实验结果表明:选用DA021-CⅡ型大孔吸附树脂作为填料,径高比为1:30,活性肽液pH为3.0,浓度为45mg/mL,上样量为40mL,吸附流速为0.5mL/min,解析流速为1.0mL/min,水解析体积为2BV,经梯度乙醇洗脱可以得到4个组分;经凝胶过滤色谱纯化后共得到6个组分aⅠ、bⅠ、bⅡ、cⅠ、dⅠ、dⅡ,经凝胶渗透色谱(GPC)法分析,其分子量分别为:aⅠ:1845Da、209Da;bⅠ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;cⅠ:2314Da、197Da;dⅠ:1318Da、180Da;dⅡ:2719Da、209Da。可见,本实验所应用的活性肽在200、1000、2000、3000、4000Da左右均有分布,是分子量范围分布比较广泛的活性肽。 相似文献
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采用大孔吸附树脂(MAR)和凝胶过滤色谱法(GPC)从微生物发酵豆粕生产的粗肽制品中分离纯化大豆活性肽.实验结果表明:选用DA021-CⅡ型大孔吸附树脂作为填料,径高比为1:30,活性肽液pH为3.0,浓度为45mg/mL,上样量为40mL,吸附流速为0.5mL/min,解析流速为1.0mL/min,水解析体积为2BV,经梯度乙醇洗脱可以得到4个组分;经凝胶过滤色谱纯化后共得到6个组分a Ⅰ、b Ⅰ、bⅡ、cⅠ、d Ⅰ、dⅡ,经凝胶渗透色谱(GPC)法分析,其分子量分别为:a Ⅰ:1845Da、209Da;b Ⅰ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;c Ⅰ:2314Da、197Da;d Ⅰ:1318Da、180Da;dⅡ:2719Da、209Da.可见,本实验所应用的活性肽在200、1000、2000、3000、4000Da左右均有分布,是分子量范围分布比较广泛的活性肽. 相似文献
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本实验通过静态吸附量和吸附率的测定确定血管紧张素转移酶(ACE)抑制肽分离富集的最适操作条件,考察了pH 值、盐浓度和乙醇浓度对ACE 抑制肽吸附性能的影响。结果表明,上样pH2.0 对ACE 抑制肽的脱盐效果最佳,70% 乙醇作为洗脱剂时效果最好,并且原样液的盐浓度保持不变。因此DA201-C 大孔吸附树脂综合性能较好,适合于ACE 抑制肽的分离纯化。 相似文献
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《食品与发酵工业》2017,(6):163-168
利用碱溶酸沉法从魔芋飞粉中提取魔芋蛋白,以魔芋蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽粗品;其粗品通过超滤法除去大分子杂质,再经过Sephadex G-15柱层析分离,最后经过RP-HPLC纯化后得到纯度较高的魔芋ACE抑制肽,并且对超滤膜进行选择、Sephadex G-15柱层析分离进行条件优化;以马尿酸含量为指标,紫外分光光度法测其活性。实验结果表明:选择规格为1 kDa超滤膜;Sephadex G-15最佳分离条件为浓度为120 mg/mL、流速为0.8 mL/min、上样量为1.0 mL;经过RP-HPLC纯化后得到魔芋ACE抑制肽抑制率可达到92.85%。空白液中Hip含量为22.50 mg,反应液中Hip含量为9.22 mg,说明魔芋ACE抑制肽抑制活性较好。 相似文献
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采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示:双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400~800u。 相似文献
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利用超声辅助酶法制备燕麦ACE 抑制肽,研究超声波处理时间、超声波频率、超声波功率、超声波水浴温度、酶解时间及加酶量对ACE 抑制率和水解度的影响。通过单因素试验得到最佳条件,即超声波处理时间30min、超声频率50kHz、超声功率176W、超声温度55℃、酶解时间2h、加酶量5%(Alcalase 酶);随后选择对ACE 抑制率有显著影响的四个因素:超声波处理时间(X1)、超声波功率(X2)、超声波水浴温度(X3)和酶解时间(X4),进行四因素三水平的响应面分析试验,经过优化得到最优条件为超声波处理时间28.40min、超声波功率190.08W、超声波水浴温度55.05℃、酶解时间2.25h,在此条件下燕麦ACE 抑制肽的抑制率87.50%,多肽质量浓度8mg/ml。 相似文献
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酶膜反应器制备燕麦蛋白质ACE抑制肽的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过研究酶膜反应器系统对酶活的影响,可知酶膜反应器系统对碱性蛋白酶(Alcalase)具有很好的保留效果.蠕动泵运转过程对酶造成的破坏以及超滤膜对酶的吸附是导致碱性蛋白酶酶活损失的主要原因.通过利用Design Expert 6.0.5设计四因素三水平的响应面分析试验,求得酶膜反应器制备燕麦蛋白质ACE抑制肽的最佳工艺条件为底物质量分数3%、加酶量3.5%、料液流量45 L/h、操作压力0.07 MPa、温度61℃、pH 8,在该备件下产物的ACE抑制率可达67.86%. 相似文献
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采用超声协同稀碱对猪皮实施预处理后,酶解30 min制得的高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性水解液为原料,采用Sephadex G-15、半制备高效液相色谱分离纯化其中胶原ACE抑制肽并对其序列进行鉴定。结果表明,Sephadex G-15分离胶原ACE抑制肽的最佳分离条件为:样品浓度100 mg/m L;上样量2 m L;流速2 m L/min;洗脱剂为蒸馏水;层析柱为1 m×10 mm的层析柱。在该分离条件下,混合肽被分成AP-I、AP-II两个组分,IC50值分别为19.50、1.01 mg/m L。对抑制活性较强的AP-II进一步采用半制备高效液相色谱进行分离,得到8个组分峰,其中峰2、峰5和峰6的IC50值最小,分别为0.73、0.44和0.4 mg/m L。结合IC50值的大小及半制备收集到样品的量,对峰2和峰6采用LC-MS/MS进行序列分析。结果显示峰2的多肽序列为QGPPGPAGPR(P为Hyp),峰6的序列为AGPPGPPGPA,这两个序列位于胶原蛋白α1链中526?535、730?739位。 相似文献
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