雷帕霉素对小鼠葡萄糖代谢水平的影响

目的探讨雷帕霉素对葡萄糖代谢水平影响的特点、机制。方法选择4周龄、雄性C57BL/6小鼠,高热量、高脂饮食喂养8周后为肥胖组(HF,n=18),普通饲料喂养为正常组(NC, n =18)。两组小鼠分别给予安慰剂(n=6)、腹腔注射雷帕霉素(2 mg/kg,隔日1次, n=6)、喂饮2.37%亮氨酸水 (n =6),2周后分别行灌胃葡萄糖耐量试验(glucose tolerance test, GTT)、胰岛素耐受性试验(insulin tolerance test, ITT)以及胰岛组织病理学检查。结果正常组小鼠腹腔注射雷帕霉素后葡萄糖负荷30min血糖水平显著升高(与安慰剂组比P=0.038,与亮氨酸组比P=0.035)。肥胖组小鼠腹腔注射雷帕霉素后空腹血糖水平显著高于安慰剂组(P=0.031),葡萄糖负荷30 min血糖显著高于安慰剂组(P=0.013)、亮氨酸组(P=0.041)。仅正常组小鼠胰岛素敏感性与安慰剂组相比显著降低(P=0.039)。雷帕霉素干预后腹腔脂肪量显著减少(正常组与安慰剂组比P <0.001,肥胖组与安慰剂组比P=0.013)。 结论雷帕霉素对哺乳动物糖代谢水平有显著影响,正常小鼠与机体胰岛素敏感性下降有关;肥胖小鼠与胰岛素分泌功能受损、胰岛素抵抗相关。     

雷帕霉素对动脉粥样硬化小鼠斑块面积影响及机制探讨

[目的]探讨雷帕霉素对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块面积影响及机制。[方法]选取30只雄性ApoE基因敲除（ApoE^-/-）小鼠为研究对象,将其随机分为模型组、雷帕霉素组、阳性药物（瑞伐他汀）组。高脂饮食12周后灌胃干预4周。处死后取主动脉斑块组织油红O和苏木精-伊红（HE）染色评估斑块脂质情况、斑块面积;采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定外周血中促炎因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（INF-γ）、白介素-6（IL-6）和转化因子β（TGF-β）、白介素-10（IL-10）表达情况。[结果]雷帕霉素组斑块面积明显小于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;在炎症因子方面,雷帕霉素组能有效降低外周血TNF-α、INF-γ、IL-6表达,增加IL-10、TGF-β表达,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]雷帕霉素可通过增加抗炎因子含量、降低促炎因子含量来调控炎症反应,进而抑制斑块发展,降低血管狭窄程度。     

雷帕霉素对中枢炎症小鼠学习记忆功能的影响

目的 评价腹腔注射雷帕霉素对中枢炎症小鼠学习记忆功能的影响.方法 C57雄性成年小鼠126只,随机分为对照组(C组,n=42)、LPS脑室注射组(L组,n=42)、雷帕霉素腹腔注射组(R组,n=42),L组、R组侧脑室单次注射2 μg脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立中枢炎症的学习记忆障碍模型,R组建模前3天每天给予腹腔注射雷帕霉素0.5 mg/kg,术后l,2,3天利用条件恐惧实验检测小鼠学习记忆功能,ELISA检测小鼠海马组织炎症因子IL-1β、TNF-α蛋白表达水平.结果 LPS侧脑室注射术后第1,2,3天,L组与C组比较,小鼠的僵直比下降(P＜0.01),R组与L组比较,小鼠的僵直比R组高于L组(P＜0.01);LPS侧脑室注射术后第1,2,3天,L组与C组比较,小鼠海马组织IL-1β、TNF-α含量明显升高(P＜0.01),但R组与L组比较,小鼠海马组织IL-1β、TNF-α含量升高程度低于L组(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以抑制C57小鼠的中枢炎症反应,改善小鼠的学习记忆功能.     

雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠模型气道炎症的作用

目的探讨雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠气道炎症的作用与机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组：正常对照组、哮喘缓解组、哮喘模型组、地塞米松组和雷帕霉素组,每组10只。采用卵蛋白致敏与激发制备哮喘模型,休息3周后,采用卵蛋白再次激发1周,在小鼠休息期间治疗组采用雷帕霉素或地塞米松干预。采用Buxco无创肺功能仪检测气道高反应性;Luminex测定肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及INF-γ水平;肺组织HE染色评价观察小鼠肺组织气道炎症;Westernblot检测肺组织p-S6、S6、AKT、p-AKT（S473）蛋白含量;流式分析测定肺泡灌洗液CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率。结果与正常组及哮喘缓解组比较：哮喘模型组气道反应性升高（P＜0.01）,灌洗液IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平增加（均P＜0.01）,肺组织气道炎症评分增高（P＜0.01）,肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白增加（P＜0.01）,灌洗液Treg细胞比例上升（P＜0.01）;与模型组比较：雷帕霉素在乙酰甲胆碱浓度为6.25mg/ml时,可降低Penh值（P＜0.01）,同时降低肺泡灌洗液IL-4水平（P＜0.01）,并抑制肺组织炎症细胞浸润（P＜0.01）,而肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白下降（P＜0.01）,但雷帕霉素可降低肺泡灌洗液Treg细胞比例（P＜0.01）。结论在哮喘缓解期应用雷帕霉素,其可通过mTORC1信号通路显著抑制哮喘急性发作时气道炎症;在哮喘缓解期应用雷帕霉素,对控制哮喘再次发作具有积极作用。     

雷帕霉素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷帕霉素作用于HL-60细胞后，对细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡率的影响。方法通过细胞生长曲线、MTT检测细胞增殖情况；免疫荧光染色、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果雷帕霉素组与空白对照组细胞生长抑制率比较，差异有显著性（P〈0．05）；细胞培养72h后，雷帕霉素组与空白对照组细胞凋亡率比较，差异有显著性（P〈0．05）。结论雷帕霉素能抑制HL-60细胞增殖及促进其凋亡。     

雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响

目的利用雷帕霉素靶向抑制mTOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。方法体外分离大鼠瓣膜间质细胞后 培养并鉴定;细胞随机分为两组：雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞 仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR 检测细胞中S6、P70S6K的mRNA表达水平;Western blotting 检测细胞中S6、 P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。结果体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于 加药组细胞（P<0.05）,加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组 细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低（P<0.05）。结论雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过 改变细胞周期而是通过抑制mTOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。     

鞘内注射雷帕霉素对小鼠神经病理性痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射雷帕霉素对小鼠神经病理性痛行为的影响.方法 选择鞘内置管成功无运动障碍及严重体重减轻的成年雄性C57/BL6小鼠48只,随机分为两组:假手术组(sham组,n=24)和慢性坐骨神经损伤模型组(CCI组,n=24).建立模型后将各组随机分为3组,组-不做任何处理,组二在术后1～6 d鞘内注射雷帕霉素1μg/5μl,组三鞘内给予溶媒20％ DMS0 5μl(sham,sham+R,sham+V,CCI,CCI+R,CCI+V,n=8).在手术前1d,手术后1d,3d,5d,7d,10d,14 d,17d,21d,28 d检测小鼠双侧足底机械缩足阈值( Mechanical Withdraw Threshold,WMT)和热辐射缩足潜伏期(Thermal Withdraw Latency,TWL).结果 与sham组相比,CCI组小鼠手术侧足底MWT和TWL均明显降低[第7天,MWT:( 1.02±0.12)g,(0.42±0.12)g,F=51.01,P＜0.05;TWL:(7.03±0.71)s,(3.26±0.66)s,F=38.27,P＜0.05].而CCI后1-6d鞘内注射雷帕霉素1μg/5μL,使小鼠的MWT明显升高[第7天,(0.42±0.18)g,(0.86±0.25)g,F=6.56,P＜0.05],并且至少持续至术后10d.与之相对的,雷帕霉素对CCI小鼠的热痛觉过敏也有缓解趋势,但差异无统计学意义.sham组和对侧足底痛行为未见明显改变(P＞0.05).结论 鞘内注射雷帕霉素可以明显缓解CCI小鼠的机械痛觉异常,但对热痛觉过敏无显著作用.     

雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法 5637细胞贴壁培养于含10%胎牛血清、100 U/m L青霉素、100μg/m L链霉素的RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。处理组加入50、100、200和400 nmol/L的雷帕霉素,对照组不加药物,每天更换RPMI 1640培养液。MTT法检测处理组的生长抑制率,流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对5637细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比,雷帕霉素对5637细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。雷帕霉素可以将5637细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞的增殖,且未见明显的凋亡情况。结论雷帕霉素使5637细胞阻滞在G0/G1期,抑制了膀胱癌5637细胞的增殖,说明雷帕霉素的作用靶点参与了5637的增殖过程,其有望成为膀胱癌治疗的新靶点。     

雷帕霉素靶蛋白的蛋白信号通路及其与代谢性疾病相关性

雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamyoin,mTOR）是进化上高度保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶（plosphatidylinositol 3-kinase—related kinase,PIKK）蛋白质家族的成员。mTOR作为细胞生长的核心因子,与不同的蛋白质结合时表现出不同的生理功能,参与基因转录、蛋白质翻译起始、核糖体生物合成、细胞周期调控、DNA损伤修复、重组和端粒酶长度的维持等。PIKK家族激酶的功能异常会导致多种代谢性疾病。通过对不同的mTOR相关蛋白信号转导机制的研究,进一步探讨代谢综合征的发病机制,并为相关治疗提供分子靶标。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分组后给予雷帕霉素常规剂量(1.5mg/kg.d-1)、低剂量(0.15mg/kg.d-1)、高剂量(4.5mg/kg.d-1)腹腔注射,对照组给予相同体积生理盐水。用药21d后处死动物,称量鼠重、瘤重,计算抑瘤率;CD34标记血管内皮细胞后行肿瘤微血管密度(MVD)计数;ELISA法检测血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平。结果与对照组比较,常规剂量雷帕霉素明显抑制了肿瘤生长,并降低了肿瘤MVD及血清VEGF水平(P<0.05),低剂量、高剂量组皮下移植瘤、MVD、VEGF水平均受到一定程度抑制,但是无统计学意义(P>0.05),实验中还发现高剂量组裸鼠体重明显下降(P<0.05)。结论常规剂量雷帕霉素可抑制肿瘤血管生成,从而抑制肿瘤生长,这为肝癌肝移植术后免疫抑制剂选择提供实验依据。     

雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响

目的：研究雷帕霉素对人树突状细胞（DC）免疫功能的影响。方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM- CSF）、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。用流式细胞仪检测DC表型（CD1a、CD83、CD86、HLA- DR）;混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力;流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数;ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低（均P＜0.01）;对T淋巴细胞刺激的能力下降（P＜0.01）;细胞吞噬能力下降（P＜0.01）;凋亡细胞数增加（P＜0.01）,MLR中细胞因子（TNF-α、IL-10、IL-12）浓度降低（均P＜0.01）。结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。     

腹腔镜下卵巢囊肿手术不同止血方法对卵巢功能的影响

目的：探讨腹腔镜下卵巢囊肿剥除手术电凝和缝合两种止血方法对卵巢功能的影响。方法因双侧卵巢囊肿行腹腔镜下卵巢囊肿剥除术的40例患者随机分为2组,术中创面止血采用缝合法或电凝法,缝合组20例,电凝组20例。于术前、术后1个月及术后6个月月经期第3天上午抽血,利用放免法检测血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）及抗苗勒管激素（AMH）,并行阴道超声检查,测卵巢大小、卵巢间质动脉血流的收缩期峰值（PSV）、窦卵泡数（AFC）,以评判手术对卵巢储备功能的影响。结果2组术前一般情况和卵巢储备功能差异无统计学意义（ P＞0．05）。2组术后卵巢功能评价：缝合组术后1、6个月E2、AMH稍有下降, FSH稍升高,但与术前相比差异均无统计学意义（P＞0．05）;电凝组术后1、6个月E2、AMH明显下降,FSH明显升高,与术前相比差异均有统计学意义（P＜0．05）;术后1个月和6个月组间比较,E2、FSH、AMH差异均有统计学意义（P＜0．05）,各组术前术后LH差异无统计学意义。缝合组术前与术后各时期卵巢AFC和PSV比较,差异均无统计学意义（P＜0．05）;电凝组术后1、6个月与术前比较AFC、PSV差异均有统计学意义（P＜0．05）;术后1、6个月组间比较,AFC、PSV 差异均有统计学意义（ P＜0．05）。各组术后卵巢大小差异无统计学意义。结论腹腔镜下卵巢囊肿剔除术中用电凝法进行卵巢创面的电凝止血,可影响术后卵巢储备功能,术中应尽量减少使用电凝止血,采用缝合法进行卵巢创面的止血整形。     

腹腔镜与开腹卵巢囊肿剥除术对机体免疫功能和术后卵巢功能的影响

目的探讨腹腔镜与开腹卵巢囊肿剥除术对机体免疫功能和术后卵巢功能的影响。方法选取2012年12月～2017年12月我院收治的204例卵巢囊肿患者,随机分为对照组和实验组各102例,对照组患者给予开腹卵巢囊肿剥除术,实验组患者应用腹腔镜卵巢囊肿剥除术,比较两组患者免疫功能、卵泡储备功能、卵巢功能的差异。结果术后实验组CD3+(54.72±6.38)%、CD4+(39.96±4.95)%、CD8+(27.75±3.11)%、CD4+/CD8+(1.52±0.21)%较对照组均明显提高(P0.05);实验组患侧术后3个月窦状卵泡数量(7.26±1.56),患侧术后6个月(8.08±1.76)显著高于对照组(P0.05);术后3个月实验组FSH(7.65±0.71)nIU/mL、LH(6.87±0.95)nIU/mL、E2(122.43±16.35)pg/mL同对照组比较均明显改善(P0.05)。结论针对卵巢囊肿患者应用腹腔镜卵巢囊剥除术,可提高患者免疫功能,提高患者卵巢功能,促进患者恢复,值得推广应用。     

微波辐射对雌性小鼠卵巢功能的近期影响

背景 目前微波辐射及其生殖损伤的研究主要集中在男性,对女性的研究相对较少,微波辐射对女性生殖系统的损伤是亟须解决的一个重要问题.目的 探讨微波辐射对雌性小鼠卵巢功能的近期影响.方法 将64只性成熟雌性ICR小鼠按照辐射强度随机分为4组.对照组不进行辐射(0 w/m2);辐射组频率2 GHz,设置3个辐射梯度:0.5 w...