皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究外源皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白水平的影响.方法 PH前3d对成年雄性SD大鼠进行双侧肾上腺切除术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠,抗酶mRNA及其蛋白水平的测定采用RT-PCR和Western blotting法. 结果 与对照组(n=6,以下相同)相比,去肾上腺组及10mg/kg、20mg/kg体重皮质酮处理组抗酶mRNA水平变化不明显,而40mg/kg体重皮质酮处理能显著刺激其转录.在PH后5、7、9h,去肾上腺术鼠抗酶蛋白水平显著低于相应时间点的对照组;皮质酮处理后,蛋白水平在所观察的整个实验过程中均显著上升,且剂量越高,蛋白含量越多,尤其在PH后5h,10、20和40mg/kg体重皮质酮处理组分别比同时间点对照组高43%、79%和93%. 结论 皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶蛋白的合成具有剂量依赖性促进作用.     

外源多胺对大鼠早期再生肝鸟氨酸脱羧酶蛋白水平的调节

目的 研究多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白水平的调节,分析多胺在肝再生中的作用.方法 外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～220 g),部分肝切除(PH)诱导的大鼠再生肝中ODC蛋白水平的分析采用免疫印迹(Western blotting)方法.结果 高剂量的腐胺(20 ms/kg体重)、精脒(0.15 mg/kg体重)和精胺(6 mg/kg体重)处理后,ODC蛋白水平在PH后12 h内均低于对照组,且各组间变化趋势相近;而低剂量腐胺(0.02 mg/kg体重)、精脒(0.03 mg/kg体重)及精胺(0.06 ms/kg体重)处理组在PH后4h ODC水平迅速升高,分别比对照组高15.1%、29.5%和30.3%.结论 一定剂量的多胺对大鼠早期再生肝ODC蛋白水平有反馈调节作用,其中精脒、精胺的作用较强,腐胺较弱.     

GZMA、GZMB、TSP-1、TLR和IL-15条细胞凋亡通路基因在肝再生中的表达变化

目的探讨颗粒酶A(GZMA)、颗粒酶B(GZMB)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)、Toll样受体(TLR)和白细胞介素-1(IL-1)5条细胞凋亡通路基因在肝再生(LR)过程中的表达变化。方法大鼠随机分为33组,每组6只,用Rat Genome 230 2.0芯片检测大鼠部分肝切除(PH)后不同恢复时间点5条细胞凋亡通路基因的表达情况,采用Real-time PCR和Western blotting技术对芯片结果进行验证,并用生物信息学方法对凋亡通路基因在肝再生中的表达变化进行分析。结果 Real-time PCR和Western blotting均与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果趋势一致;GZMA、GZMB、TSP-1、TLR和IL-1 5条细胞凋亡通路中9、8、24、31和34个基因与肝再生相关。它们主要在肝再生启动阶段起始表达,在细胞增殖阶段表达的基因数最多。表达的相似性分为均上调、上调占优势、均下调、下调占优势、上调和下调相近等5类,大多数基因表达加强,少数基因表达降低。它们表达的时间相关性分为13组。基因协同作用模型(Et)分析表明,GZMA介导的细胞凋亡通路在肝再生后期促进细胞凋亡;TLR介导的细胞凋亡通路几乎均在整个肝再生中促进细胞凋亡;GZMB、TSP-1和IL-1介导的细胞凋亡通路可能在肝再生中不发挥细胞凋亡作用。结论 GZMA和TLR两条通路调控肝再生中的细胞凋亡。     

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的 探讨内皮素-1（ET-1）在烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达;应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 水平的变化。结果 烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化;烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高,6h 达高峰;烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1 表达较正常对照组增强,12h 达高峰;烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高,6h 达高峰。结论 烫（烧）伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加,增加表达的ET-1可能与烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。     

p38促进尼古丁诱导的大鼠血管平滑肌细胞的细胞外基质表达

目的 探讨尼古丁对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的细胞外基质(ECM)表达的影响及可能的机制.方法 用终浓度为100μmol/L的尼古丁作用于体外培养的大鼠VSMCs 24 h,以不加尼古丁的细胞为对照组,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)方法检测ECM包括Ⅰ型胶原、纤维黏连蛋白和膜受体整合素表达的差异,以及可能参与信号转导的蛋白激酶p38的活性变化.结果 与对照组相比,尼古丁刺激组细胞的两种细胞外基质包括I型胶原和纤维黏连蛋白及膜受体整合素β1的表达均升高,分别为对照组的1.8倍、1.7倍和1.6倍,差异显著(P<0.05);尼古丁刺激组的蛋白激酶p38的活性比对照组高1.95倍,差异极其显著(P<0.01);p38的活性被特异抑制剂SB202190抑制后,尼古丁诱导的I型胶原的表达也随之下降.结论 p38参与尼古丁诱导的细胞外基质的高表达.     

四氯化碳诱导性肝纤维化大鼠肝组织骨形态发生蛋白-7的表达

目的 探讨四氯化碳(CCl4)诱导性肝纤维化大鼠的肝组织纤维化与骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的相互关系.方法 将健康雄性 Wistar 大鼠随机分为对照组和肝纤维化组.对照组大鼠每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),肝纤维化组每周一、四背部皮下注射60% CCl4橄榄油(0.3ml/100g),连续注射6、10、16 和21周.实验结束时处死大鼠,取肝中叶,石蜡包埋、切片.行天狼猩红染色,观察肝组织胶原纤维的增生情况;行BMP-7免疫组织化学染色和 Western blotting 检测,观察肝组织.BMP-7的表达.结果 天狼猩红染色显示对照组大鼠仅在肝门静脉及门管区看到少量的胶原纤维,各肝纤维化组大鼠均可见肝组织呈明显的胶原纤维增生,且随着时间的延长,肝纤维化程度逐渐加重;免疫组织化学染色显示,对照组大鼠肝组织中可见极少量的BMP-7表达阳性的细胞,6周肝纤维化组大鼠可见较多的BMP-7阳性表达细胞,但随着实验时间的延长,BMP-7阳性细胞呈递减的趋势,至21周肝纤维化组大鼠肝组织中基本呈阴性表达;Western blotting 法检测大鼠肝组织BMP-7的表达结果与免疫组织化学的结果基本一致.结论 CC14诱导性肝纤维化大鼠肝组织BMP-7的表达与肝纤维化的程度呈负相关的趋势,推测BMP-7可能对肝纤维化具有一定的保护作用.     

趋化因子2促进肝再生中脂肪的形成

目的 探讨趋化因子2（CCL2）对肝再生的影响以及作用机制。 方法 大鼠随机分为3组,每组10只。液压转基因技术将质粒转入大鼠体内,6 h后荧光显微镜下观察转染效率。称量再生肝重量,计算肝再生率和肝脏指数以观察肝脏再生情况。测量血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)与总胆红素（TBIL）的含量以评估肝脏功能情况。苏丹Ⅳ染色观测脂肪聚积情况。Real-time PCR检测脂肪代谢相关基因的表达。Western blotting检测磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶l/2(p-ERKl/2)的表达情况。 结果 转质粒后6 h各组绿色荧光蛋白表达量均大于30%。pEGFP-N1-CCL2转染组肝再生率、肝脏指数、ALT、AST和TBIL含量均高于pEGFP-N1组。随转基因时间延长,脂肪代谢相关基因表达量增加,有较多猩红色脂肪滴出现,p-MEK1/2和p-ERKl/2表达量增多。 结论 趋化因子2可能通过MEK/ERK通路增加脂肪合成,促进肝脏再生。     

酶联法和免疫印迹法检测血抗卵巢抗体的比较

为比较酶联法（ELISA）和免疫印迹法（IBT）检测人抗卵巢抗体（AOA）的灵敏度和准确性,本文以正常妇女为对照,检测不明原因性不孕症和卵巢早衰（POF）患者血清AOA。结果表明POF组AOA阳性率分别为40％（ELISA）和80％（IBT）,不孕症组AOA阳性率为20％（ELISA）和60％（IBT）。两种方法比较,同组阳性率有显著差异（P<0.01）。IBT方法可区别非致病性和致病性AOA,提高诊断的准确性、实验表明ELISA和IBT均可用于检测AOA以了解卵巢功能降低之免疫性病因,但IBT方法更灵敏,更准确。     

血管内皮生长因子在大鼠肝再生过程中的表达变化

目的通过检测血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠肝再生过程中表达量的变化,探讨VEGF在肝再生中的作用。方法300只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组。实验组大鼠切除2／3肝,分别于术后不同时段取肝组织或原位灌注分离肝实质细胞。用免疫组织化学和Western blotting技术检测肝组织和肝实质细胞中VEGF的表达变化。结果正常肝组织的VEGF阳性细胞很少;肝切除（PH）后24h阳性细胞数显著增加（P〈0．01）,主要分布于门管区周围;PH72h时阳性细胞数达到高峰,几乎遍及整个肝小叶;从PH120h起VEGF阳性细胞数逐渐减少至正常。Western blotting检测结果表明,肝实质细胞的VEGF表达量于PH0～12h较少,PH12h后增多,PH24—72h的表达量约为PH0～12h的2倍,PH72h后逐渐下降,至120h恢复正常;肝组织VEGF的表达量于PH0～12h较少,PH12h后逐渐增多,PH72h时出现高峰,约为PH0～12h的4倍;肝组织VEGF的表达量大于肝实质细胞的表达量。结论VEGF可能是参与肝脏组织结构重建的重要的生长因子：肝实质细胞是肝中VEGF的雷耍来源之一。     

大鼠肺微血管内皮细胞磷酸二酯酶mRNA表达与活性检测

目的 检测大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)内磷酸二酯酶(PDE)同功酶mRNA表达及基础酶活性,明确PMVECs存在的PDE亚型及体外活性. 方法 采用植块法分离培养PMVECs,RT-PCR法测定PDE mRNA表达,以高效液相色谱(PHLC)检测环核苷酸在酶反应前后的含量变化,计算PDE活性. 结果 检测结果 显示,PMVECs中含有PDE1A、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、10A、11A共17种PDE mRNA,而PDE1B mRNA 未见表达,酶量在5～20μl范围内与PDE活性存在良好的线性关系. 结论 PMVECs中存在17种PDE基因表达,并有较高的基础酶活性.     

Effect of hyperoxia on content of the polyamines spermine and spermidine in rat brain and liver

The effect of an increase in the oxygen pressure (6 atm) on the content of the polyamines spermine and spermidine in the rat brain and liver was investigated. During the period of oxygen convulsions and 4 h after decompression the spermidine concentration in the brain and liver was reduced. The spermine concentration in the brain also was reduced during the period of convulsions, but 4 h after decompression it was significantly increased, although, still below the control level. The spermine level in the liver was unchanged during oxygen convulsions, but rose sharply during the next 4 h. The role of polyamines in the regulation of protein biosynthesis during hyperoxia is discussed.Department of Biochemistry, Rostov-on-Don University. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. N. Chernigovskii.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 85, No. 1, pp. 28–30, January, 1978.     

Biliary lipid secretion in the regenerating liver of the rat

The effect of two-thirds hepatectomy on biliary lipid secretion was studied in fasted rats. Bile acids, cholesterol and phospholipids were determined in the bile of rats with biliary drainage. Bile acid and phospholipid concentrations were not significantly modified during liver regeneration but there was a significant decrease in cholesterol concentrations in bile at 12 h after hepatectomy, with a gradual return to normal values. The molar percentage of cholesterol and the calculated lithogenic index of bile were also significantly decreased by 12 h. The biliary secretion of bile acids and phospholipids, expressed per gram of liver, showed a tendency to increase regeneration, but cholesterol secretion was significantly decreased from 12 to 48 h following liver resection. Some possibilities to explain the uncoupling between cholesterol secretion and bile acid secretion are discussed.     

Haem and drug-metabolizing enzymes in regenerating rat liver.

Various parameters of haem and drug metabolism were measured during the course of liver regeneration after two-thirds hepatectomy. Partial hepatectomy produced a significant depression in delta-ALA synthetase and delta-ALA dehydratase, and induction in haem oxygenase at an early stage of regeneration. The values returned to normal within 7-14 days. These changes were also accompanied by a marked decline in benzo(a)pyrene hydroxylase and aminopyrene demethylase. The level of glutathione and the activity of glutathione reductase also increased during the early stage of proliferation. The increased level of glutathione with concomitant decrease in drug-metabolizing enzymes and induction in haem oxygenase could be considered as a protective mechanism for the detoxication process, although a contribution from other biotransforming mechanisms cannot be excluded.     

Biosynthesis of ubiquinone-9 in the regenerating albino rat liver

The uptake of radioactivity from acetate-1-C¹⁴ into ubiquinone-9 in thin slices of regenerating albino rat liver was investigated on the 1st, 2nd, 3rd, 6th, 9th, 12th, and 15th day after partial hepatectomy. Marked acceleration of ubiquinone-9 biosynthesis was found during the first 3 days after removal of two-thirds of the liver. The maximal increase in biosynthesis (almost eightfold) was found 24 h after hepatectomy. This increase in the rate of ubiquinone-9 biosynthesis coincides with the time of increased mitotic activity and accelerated biogenesis of the mitochondria. A very small increase in the biosynthesis of ubiquinone-9 was found on the 12th and 15th days of regeneration.