Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的 考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔.观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活力值.结果 与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为(53.1±5.5)%(P<0.01),并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为(39.9 4±2.9)U/g Prot (P<0.01);Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为(69.3±5.9)%(P<0.01)、(52.7±3.0)%(P<0.01)和(33.2±1.8)%(P<0.01),Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为(23.5±1.4)U/g Prot和(24.7±1.3)U/g Prot(P>0.05),Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为(38.8±2.0)U/g Prot(P<0.01),与Glu组相当(P>0.05).结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1 μmol/L Aβ25-35剂量组处理24 h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立.     

Aβ（25-35）对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸（glutamate,Glu）组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔。观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活力值。结果与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为（53.1±5.5）%（P〈0.01）,并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为（39.9±2.9）U/gProt（P〈0.01）;Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为（69.3±5.9）%（P〈0.01）、（52.7±3.0）%（P〈0.01）和（33.2±1.8）%（P〈0.01）,Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为（23.5±1.4）U/gProt和（24.7±1.3）U/gProt（P〉0.05）,Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为（38.8±2.0）U/gProt（P〈0.01）,与Glu组相当（P〉0.05）。结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1μmol/LAβ25-35剂量组处理24h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立。     

新生小鼠大脑皮层神经元的原代培养

目的：建立一种简便易行的体外原代培养新生小鼠大脑皮层神经元的方法。方法：采用低浓度．短时间的酶分离细胞培养法和含B-27的特殊培养基培养新生小鼠大脑皮层神经元。结果：神经元结构特征明显，生长好、得率高。结论：通过本方法可以稳定地获得较高纯度的新生小鼠大脑皮层神经元。     

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

大鼠原代神经元的培养及操作技巧

目的:建立一种实用体外原代培养新生大鼠皮层神经元的方法.方法:取24h内的SD乳鼠两侧大脑皮层,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮层神经元悬液,进行培养.利用免疫细胞化学进行鉴定.结果:培养的细胞贴壁生长,胞体饱满,突起较长;经神经元特异性鉴定,培养的神经元纯度可达90%以上.结论:该技术是一种可靠、稳定的获得神经元的方法,可以用于实验.     

新生大鼠大脑皮层神经元的原代培养

目的成功建立简便易行的原代神经元培养模型的方法。方法无菌操作条件下,培养皿或培养板经L-多聚赖氨酸包被过夜,用15%完全培养液混悬神经元,以细胞密度为5×104细胞/mL的浓度种植,24h后倒置相差显微镜观察神经元贴壁后即用阿糖胞苷(10μmol/L)以抑制神经胶质细胞及非神经细胞的增殖,每48h进行每皿或每孔半量换液。结果神经元贴壁生长较多,神经胶质或成纤维细胞被抑制,在半量换液中可清除,获得相对单纯的神经元。结论简便易行的原代皮层神经元培养方法,可以得到相对单纯体外培养的神经元模型。     

新生大鼠原代皮质神经元细胞差数贴壁培养法的优化

神经元的培养是神经细胞生物学、神经药理、毒理学及神经电生理研究的重要手段,但要获得纯度较高,生长状态较好的神经元并非易事.神经元属于终末分化细胞,给培养带来一定难度,传统的方法多用胎鼠进行神经元的原代培养,因其细胞分化程度低利于存活,但胎鼠取材需处死孕鼠,费用较高且操作繁琐,本实验利用细胞的贴壁时间不同,筛选了一种简便、经济、可行的大鼠原代神经元差数贴壁培养方法[1～4].     

新生大鼠大脑皮层神经元原代培养与鉴定

目的:建立一种较理想的新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法.方法:体外原代培养新生大鼠大脑皮质神经元,应用免疫细胞化学法鉴定神经元.结果:用神经基础培养基(Neurobasal-A)+B27培养的神经元纯度可达70%,生长状态较佳.结论:该培养技术是大鼠皮层神经元体外培养的一种较理想的方法.     

糖皮质激素诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡

目的探讨糖皮质激素(GC)对大鼠杏仁核神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠杏仁核神经元,首先采用免疫荧光技术对培养的原代神经元及其是否存在丰富的糖皮质激素受体分别进行了鉴定,并用流式细胞术检测不同浓度的人工合成糖皮质激素地塞米松(10~(-9)~10~(-6)mol·L~(-1))对杏仁核神经元细胞凋亡的影响。然后将实验分为4组:对照组(CON)、地塞米松(DEX)刺激组、地塞米松和米非司酮(受体抑制剂)共同刺激组(DEX+MIF)、米非司酮刺激组(MIF)。用TUNEL原位技术检测各组的凋亡情况,并用RTPCR技术检测各组Bax mRNA的表达变化。结果 (1)与CON组相比,不同浓度的DEX作用于神经元后,神经元凋亡率明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;(2)TUNEL染色结果显示,DEX组细胞凋亡率明显高于CON组(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组凋亡率明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05);(3)与CON组相比,DEX组Bax mRNA的表达量明显升高(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组的Bax mRNA的表达量明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05)。结论糖皮质激素可以通过其受体诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡。     

木瓜蛋白酶联合DNA酶法提取乳鼠原代皮层神经元及鉴定

目的 采用木瓜蛋白酶联合DNA酶法提取24 h内新生SD大鼠皮层神经元,改进体外原代培养方法。方法取24 h内新生SD大鼠,剥离脑血管膜分离出大脑皮层,采用木瓜蛋白酶和DNA酶顺序消化、纯化后,以含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为神经元接种液,4 h后更换为预热的含有B27的Neurobasal-A神经元培养液,连续培养7 d。分别以1×105、5×105、1×106细胞/mL接种于L-多聚赖氨酸浸泡后的6孔板内,并在显微镜下观察细胞的生长状态。取培养7 d后的神经元,采用β-Tubulin免疫荧光法和神经元特异性核蛋白（Neun）抗体免疫组化法鉴定神经元,神经元微管相关蛋白2抗体（MAP2）免疫荧光法鉴定神经元纯度。结果 神经元以密度为5×105细胞/mL接种最为合适,接种24 h后,皮层神经元部分贴壁;接种3 d后,贴壁细胞逐渐增多,神经元突触进一步生长并延长,交联成稀疏网络;接种7 d后,神经元仍大量生长,胞体丰满,并形成更为紧密的神经元网络系统。经β-Tubulin免疫荧光法和Neun抗体免疫组化法鉴定,提取培养细胞为神经元,并经神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定神经元...     

新生大鼠海马和皮层神经元的原代培养及鉴定

目的建立一种条件简单易存活,适用于生理、药理学研究的原代神经元培养方法。方法应用新生(48 h以内)大鼠采用急性分离、胰酶消化的方法培养海马和皮层神经细胞,并结合膜片钳及RT-PCR技术鉴定所培养的神经元电压依赖性离子通道的表达情况。结果体外培养的神经细胞生长状态良好,免疫荧光染色鉴定结果表明该方法培养的神经元纯度可达90%以上;全细胞电压依赖性离子通道表达情况良好。结论应用该方法培养神经细胞操作简单并保持了良好的生理特性,可用于神经元生理特性考察及药理实验研究,是体外培养神经元较理想的方法。     

新鲜分离的新生大鼠皮层神经元的钙振荡

目的:研究新鲜分离的新生大鼠皮层神经元胞内钙离子浓度([Ca~(2 )]_i)发生振荡的机制。方法:采用酶解结合机械分离法从6—7日龄大鼠分离皮层神经元,用M40钙离子测量系统(PTI)测量细胞内钙离子浓度的变化。用Fura-2作为钙离子指示剂。结果:在观察到的82个神经元细胞中,47个产生了自发钙振荡。自发钙振荡依赖于胞外钙离子浓度。去除外钙后自发钙振荡立即停止。四乙铵1mmol/L引起钙振荡振幅增大,频率变快。CsCl 1mmol/L主要引起频率增加。BaCl_2 1mmol/L可使振幅、频率增高,并有明显的高台样基线增加。结论:皮层神经元在无突触联系的情况下具有产生自发[Ca~(2 )]_i振荡的特性,K~ 通道在决定钙振荡的幅值和频率方面起重要作用。     

复方沙棘颗粒对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的 :研究复方沙棘颗粒对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸 (Glu)损伤的保护作用及机理。方法 :分离培养新生 (1d)大鼠大脑皮层神经细胞 ,加入Glu模拟兴奋性损伤 ,MTT法测定细胞存活率 ,比色法测定上清中乳酸脱氢酶 (LDH)含量 ,细胞中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 (GSH Px)活性、丙二醛 (MDA)含量。结果 :细胞经Glu损伤后 ,上清LDH含量、细胞中MDA含量显著增加 ,SOD和GSH Px活力明显下降。复方沙棘处理组可有效防止上述改变。结论 :复方沙棘颗粒可有效保护由Glu引起的大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。其机理可能与抗脂质过氧化、清除自由基有关     

维药恰玛古的性状和显微鉴别

目的对维药恰玛古的生药学特征进行研究,为进一步研究和利用恰玛古奠定基础。方法对恰玛古原植物进行性状鉴别和显微鉴别。结果根的次生构造较发达,茎中维管束为外韧型,叶中有分泌腔存在。粉末中有较多方晶散在,气孔为不等式。结论本研究结果为该药的鉴别、质量标准制定及开发利用提供依据。     

大脑皮层神经细胞低密度原代培养

本文探讨了大脑皮层神经细胞低密度原代培养方法，利用此方法培养了１５批大脑皮层神经细胞，建立了稳定的低密度培养模型，并对低密度培养各阶段的神经细胞形态特征进行了系统观察，同时对低密度培养神经细胞的细胞选择，形态特征、底物的作用及低密度培养的神经细胞在突出构建、离子通道、神经元通讯研究等方面的作用进行了讨论。     

柿蒂化学成分的分离与鉴定

目的对柿蒂的化学成分进行分离和鉴定。方法利用反复硅胶柱色谱对柿蒂中的化学成分进行分离纯化,利用理化性质和MS1、H-NMR1、3C-NMR、HMQC及HMBC等光谱学分析方法进行结构鉴定。结果分离得到4个化合物,分别鉴定为24-羟基齐墩果酸(24-hydroxyloleanolic acid,1)、19α,24-二羟基乌苏酸(19,α24-dihydroxy ursolic acid,2)、白桦酸(betulinic acid,3)和barbinervicacid(4)。结论以上4个化合物均为首次从柿蒂中分离得到。     

瓜蒌化学成分的分离与鉴定

目的研究葫芦科栝楼属植物栝楼果实体积分数为90%乙醇提取物的正丁醇部分,对其中的化学成分进行分离鉴定。方法利用硅胶柱色谱,凝胶柱色谱(Sephadex LH-20),反相中低压柱色谱,制备高效液相色谱(PRE-HPLC)等手段进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据对化合物进行了结构鉴定。结果从瓜蒌的正丁醇萃取部分分离得到10个化合物,分别鉴定为:甲基-β-D-吡喃果糖苷(methyl-β-D-frucopyranoside,1)、乙基-β-D-吡喃果糖苷(ethyl-β-D-frucopyranoside,2)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyranoside,3)、乙基-β-D-呋喃葡萄糖苷(ethyl-β-D-glu-cofuranoside4,)、正丁基-α-D-呋喃果糖苷(n-butyl-α-D-fructofuranoside5,)、正丁基-β-D-呋喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructofuranoside,6)、bluemenol A(7)、cucumegastigmanesⅠ(8)、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural9,)5、5,'-双氧甲基呋喃醛(5,5'-oxybis(methylene)difurfural1,0)。结论化合物1-8均为首次从该植物中分离得到。     

京大戟化学成分的分离与鉴定

目的对京大戟的化学成分进行研究。方法采用硅胶、凝胶柱色谱和制备高效液相色谱等分离方法对京大戟的体积分数为95%乙醇溶液提取物进行成分分离,通过谱学分析方法结合理化性质进行结构鉴定。结果共分离得到9个化合物,分别鉴定为环阿尔廷醇(cycloartenol,1)、月腺大戟素C(yuexiandajisu C,2)、helioscopinolide E(3)、3,3'二甲氧基鞣花酸(3,3'-di-O-methylellagicacid,4)、3,3'二甲氧基鞣花酸4'OβD吡喃木糖苷(3,3'-di-O-methylellagic acid-4'-O-β-D-xy-lopyranoside,5)、3,3'二甲氧基鞣花酸4'OβD吡喃葡萄糖苷(3,3'-di-O-methylellagic acid-4'-O-β-D-glucopyranoside,6)、鞣花酸(ellagic acid,7)、没食子酸甲酯(methyl gallate,8)、没食子酸(gallic acid,9)。结论化合物1 3、7为首次从京大戟中分离得到。     

知母脂溶性化学成分的分离与鉴定

目的研究知母的化学成分。方法利用各种色谱法进行分离,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物结构。结果从知母的体积分数为70%的乙醇提取物中分离得到6个已知成分,分别鉴定为十七烷酸-1-甘油酯(2,3-dihydroxypropyl heptadecoate,1)、大黄酚(chrysophanol,2)、大黄素(emodin,3)、构树宁B(broussonin B,4)、单甲基-顺-扁柏树脂酚[monomethyl-Z-(-)hinokiresinol,5]、顺-扁柏树脂酚[Z-(-)hinokiresinol,6]。结论化合物1-4为首次从该属植物中分离得到。     

大脑皮层神经元原代培养方法的改良及一种体外缺氧缺糖简易模型的建立

目的改进SD胎鼠大脑皮层神经元体外原代培养方法及其一种缺氧缺糖(OGD)简易模型建立。方法用温和的TrypLE胰酶消化得到单个皮层神经细胞,用含有B27的Neurobasol培养基进行培养。培养7 d后,将其培养液换成无糖DMEM培养液,放入缺氧装置中分别培养4、5及6 h,利用MTT法检测细胞存活率,并用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH的释放量。结果分离和培养的神经元生长状态良好,免疫荧光方法证明该方法培养的大脑皮层神经元纯度可达到(93.2±1.3)%,能够达到实验研究的要求。细胞OGD 4、5及6 h后,细胞存活率分别为(52.7±1.3)%、(26.5±3.3)%及(20.8±1.1)%;LDH的释放量分别为(52.9±4.8)%、(89.3±1.3)%及(93.2±1.1)%。结论改良后的培养方法能够稳定地获得高纯度的SD胎鼠大脑皮层神经元,用厌氧发生装置替代三气培养箱建立了一种OGD简易模型,同时选择OGD 4 h作为缺氧缺糖模型最佳时间点。