siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)％和(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01;F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力.     

siRNA沉默高迁移率族蛋白B1表达对肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究siRNA干扰高迁移率族蛋白B1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)表达对肝星状细胞(HSCs)生物学特性的影响。方法将化学合成siRNA HMGB1以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测细胞HMGB1表达。应用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡变化,应用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果转染siRNA的HSC-T6细胞HMGB1基因及蛋白表达水平明显下调,HSC-T6细胞增殖抑制明显,凋亡增加,48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(22.58±8.76)%和(39.36±6.90)%(F=47.78,P0.01),Ⅲ型胶原含量在72 h时降低(38.74±4.80)%(F=98.65,P0.01)。结论 siRNA HMGB1能高效抑制HSC-T6细胞HMGB1表达,抑制HSC-T6细胞增殖,促进凋亡,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

小分子干扰RNA沉默高迁移率族蛋白B1抑制肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成*

目的 研究小分子干扰RNA（siRNA）干扰高迁移率族蛋白B1（HMGB 1）表达对肝星状细胞（HSC） Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法 将化学合成的HMGB 1基因特异性siRNA以脂质体包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA和蛋白质,采用Western blot法检测细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达情况;采用细胞免疫荧光法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达与定位;采用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原水平。结果 转染HMGB 1基因特异性siRNA的HSC-T6细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白水平显著下调,免疫细胞化学检测也提示转染siRNA 后细胞内Ⅰ型和Ⅲ型胶原水平较对照组明显降低;在培养72 h时,上清液Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原水平分别较对照组下降了（46.36±3.82） %和（41.92±3.58） %（F=33.14,P<0.01;F=27.56,P<0.01）。结论 HMGB 1特异性siRNA能高效抑制HSC-T6细胞胶原的合成和分泌,因而可能具有预防和治疗肝纤维化的潜力。     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反...     

转化生长因子βⅠ型受体基因的靶向小干扰RNA抑制肝星状细胞合成胶原的体外研究

目的 观察大鼠转化生长因子βⅠ型受体(TβR Ⅰ)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)表达质粒对肝星状细胞(HSC)合成胶原的影响.方法 根据大鼠Tβ R Ⅰ的基因序列,设计并构建3个大鼠TβR Ⅰ基因的靶向siRNA表达质粒,以脂质体作转染试剂,将siRNA表达质粒分别转染至HSC-T6细胞中,RT-PCR和Western印迹技术分析TβRⅠ mRNA及蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,放射免疫法测HA、PCⅢ含量.采用LSD法进行统计学处理.结果 酶切证实siRNA的目的 基因片段已成功克隆入载体中.与空白对照组比较,转染siRNA表达质粒后,3组HSC-T6细胞TβR Ⅰ mRNA表达水平均抑制,其中以psiRNA2组抑制作用最强(psiRNA1组:t=7.354,P＜0.01;psiRNA2组:t=9.214,P＜0.01;psiRNA3组:t=5.967,P＜0.01).3组TβRⅠ蛋白表达水平均降低,以psiRNA2组降低最明显(psiRNA1组:t=6.324,P＜0.01;psiRNA2组:t=8.741,P＜0.01;psiRNA3组:t=4.128,P＜0.01).3组HSC-T6细胞增殖活性均下降,合成胶原均减少,以psiRNA2组最明显;而转染无关siRNA组无明显变化.结论 构建的TβR Ⅰ siRNA表达质粒可抑制HSC-T6细胞合成胶原,为肝纤维化基因治疗提供新的靶点.     

上调miR-203表达对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察上调mi R-203表达对肝星状细胞增殖活性及胶原合成的影响.方法:利用Lipofectamine?2000将miR-203模拟物(mimics)转染大鼠肝星状细胞(HSC-T6),培养48 h后,收集细胞提取总蛋白和总RNA,分别行Western blot和RT-qP CR,检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达;MTT(噻唑蓝)法检测细胞增殖活性.结果:与阴性对照组相比,mi R-203 mimics组α-SMA蛋白和mRNA表达分别下降75%和80%(均P0.01);Ⅰ型胶原蛋白表达下降56%(P0.01),mRNA表达下降48%(P0.05);Ⅲ型胶原蛋白与mRNA表达分别下降45%和60%(P0.05);HSC-T6细胞增殖活性下降20%±5%(P0.01).结论:上调mi R-203表达能显著抑制肝星状细胞增殖及胶原合成.     

IGFBPrP1 siRNA诱导的大鼠肝星状细胞凋亡及其机制

目的研究IGFBPrP1 siRNA对大鼠肝星状细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,分别设立：正常对照组,阴性对照组,IGFBPrP1 siRNA转染组。IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞,转染不同时间后,用CCK-8试剂盒检测肝星状细胞增殖的变化,AnnexinV/PI双标法流式细胞术检测肝星状细胞凋亡的变化,免疫细胞化学染色法检测P53及Bcl-2蛋白表达的变化。结果 （1）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞不同时间（24、48、72 h）后,转染组细胞增殖受到抑制且凋亡率明显增高,与正常对照组及阴性对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞48 h后,与正常对照组及阴性对照组相比,转染组P53蛋白的表达量显著增高（P〈0.01）;Bcl-2蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能显著抑制大鼠肝星状细胞增殖且能促进其凋亡;上调P53的表达,下调Bcl-2的表达可能是IGFBPrP1 siRNA诱导大鼠肝星状细胞凋亡的途径之一;推测抑制IGFBPrP1的表达有可能成为治疗肝纤维化的新靶点。     

银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞细胞因子和胶原合成及细胞增殖的影响

目的研究银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机理。方法用不同浓度(0,1,10,100,500μg·ml-1)的银杏叶提取物处理HSC-T6细胞24h和48h,采用RT-PCR法检测各组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化。结果银杏叶提取物在10,100,500μg·ml-1浓度能明显抑制TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),在一定范围内呈剂量和时间依赖性,影响HSC-T6的细胞周期,降低其增殖活性。结论银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6细胞的增殖,抑制细胞因子及细胞外基质成分基因的表达,由此发挥抗肝纤维化的作用。     

沉默结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察靶向沉默结缔组织生长因子(CTGF)表达对肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响。方法将HSC-T6细胞随机分为3组,A、B组分别转染CTGF siRNA及无义序列4~6 h,C组不转染;培养24 h,采用RTPCR法检测CTGF mRNA,MTT法检测细胞增殖速度,Annexin V/PI双染色法测算细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。结果 A组CTGF mRNA表达量(0.12±0.03)明显低于B组(0.87±0.07)和C组(0.85±0.09),细胞增殖速度(0.21±0.05)明显慢于B组(0.38±0.04)和C组(0.39±0.05),细胞凋亡率(37.5%±0.6%)高于B组(0.9%±0.3%)和C组(1.1%±0.2%),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量(29.2±0.8,26.4±2.7)均低于B组(66.7±1.7,64.7±0.9)和C组(68.4±1.7,66.1±2.2),P均<0.05。结论 靶向沉默CTGF基因可抑制HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,并显著减少Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成和分泌。     

抑制结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的观察抑制结缔组织生长因子（CTGF）表达对肝星状细胞系HSC-T6细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法构建含有靶向CGTF小干扰RNA的重组慢病毒载体并感染HSC-T6细胞,应用MTT法检测细胞增殖情况;应用PI染色和流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果抑制CTGF基因表达可抑制HSC-T6细胞增殖,同时显著增加HSC-T6细胞凋亡,凋亡细胞的百分比为17.58±5.81%,明显高于空白对照组（5.12±1.21%）和阴性对照组（1.37±0.31%）;抑制CTGF基因表达可显著升高S期细胞百分比（53.24±4.47%）,空白对照组和阴性对照组分别为44.80±4.701%和42.10±1.40%,而处于G2~M期细胞百分比（0.04±0.07%）则较空白对照组（9.03±0.45%）和阴性对照组（12.19±5.62%）显著降低,但抑制CTGF对G0~G1期细胞百分比无影响。结论抑制CTGF可促进HSC-T6细胞凋亡,抑制其活化和增殖。抑制CTGF基因表达有可能作为抗肝纤维化的新靶点。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1 小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究化学合成纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）小干扰RNA（siRNA）对肝星状细胞（HSC）PAI-1基因表达及生物学特性的影响。方法将化学合成抗PAI-1 siRNA以Lipofectamine包裹，转染HSC—T6细胞，设阴性对照和空白对照，抽提细胞总RNA及蛋白质，收集培养上清液，应用逆转录-聚合酶链反应和免疫细胞荧光法检测细胞PAI—1表达。应用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期变化，应用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果转染siRNA的HSC—T6细胞PAI-1基因表达水平明显下调，HSC—T6细胞增殖抑制明显，48h和72h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少，分别比阴性对照下降（20．71±8．40）％和（37．97±6．40）％（F=42．69。P=0．0001），Ⅲ型胶原含量于72h时降低（35．98±4．60）％（F=105．52，P=0．0001）。结论化学合成抗PAI-1 siRNA能高效抑制HSC—T6PAI-1表达，抑制HSC—T6细胞增殖，显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌，具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

siRNA抑制IGFBPrP1表达对肝星状细胞株分泌细胞外基质的影响

目的利用化学合成的siRNA抑制肝星状细胞（HSC）中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBPrP1）基因的表达,观察其对HSC产生细胞外基质（ECM）的影响,以明确IGFBPrP1在肝纤维化中的作用地位。方法 （1）化学合成2对针对IGFBPrP1基因的siRNAs,转染肝星状细胞株HSC-T6,筛选抑制率较高的siRNA用于干扰实验;（2）将HSC-T6分为3组：正常对照组、阴性对照组和IGFBPrP1 siRNA干扰组。将筛选的抑制效率较高的siRNA转染HSC-T6,Western Blot检测其IGFBPrP1、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维连接蛋白（FN）的表达。采用单因素方差分析,多重比较采用SNK-q检验。结果 （1）将2对IGFBPrP1 siRNA转染HSC,筛选出能高效抑制IGFBPrP1表达的siRNA;（2）与正常对照组和阴性对照组相比,IGFBPrP1 siRNA干扰组能明显抑制IGFBPrP1、ColⅠ和FN的表达（F=48.018、81.246、43.850,P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能特异性抑制HSC中IGFBPrP1的表达,进而使HSC中ECM的重要成分ColⅠ和FN合成和分泌减少,故IGFBPrP1可在肝纤维化中起有重要作用。     

斑蝥酸钠维生素B6对人肝星状细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨斑蝥酸钠维生素B6注射液对人肝星状细胞LX-2增殖活化的影响及其机制.方法 培养人肝星状细胞LX-2,将其分为3个观察组（斑蝥酸钠维生素B6的浓度分别为1、5、10 μg/mL）和1个空白对照组;培养24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用荧光定量PCR方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1基因表达变化.结果 与空白对照组比较,观察组人肝星状细胞LX-2增殖活化被显著抑制（P均＜0.05）,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1mRNA表达下降（P均＜0.05）.结论 斑蝥酸钠维生素B6可以抑制人肝星状细胞LX-2增殖活化,其机制可能与其抑制、转化生长因子β1信号通路有关.     

小干扰RNA沉默IKK/NF-κB信号通路对HSC-T6细胞凋亡的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默IKK/NF-κB信号通路对于肝星状细胞株HSC-T6凋亡的影响。方法根据Gen Bank数据库IKKβ的c DNA序列,设计构建合成IKKβsiRNA,采用阳性脂质体转染,设立空白对照组、阴性对照组及siRNA实验组,采用TUNEL法和流式细胞仪Annexin-V/PI双染法测定IKKβsiRNA转染后24 h、48 h和72 h细胞凋亡率,同时采用Western blotting检测NF-κB P65、Bcl-2、Bax和Caspase3的蛋白表达情况。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组24 h、48 h和72 h HSC-T6细胞凋亡率均显著增加(P0.05),且具有时间依赖性;实验组的NF-κB P65及Bcl-2蛋白的表达均明显升高,而Caspase3和Bax则显著增加,与空白对照和阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论 SiRNA沉默IKK/NF-κB信号通路能够下调NF-κB P65的表达,同时提高Bax和Caspase3的表达,促进HSC-T6凋亡,这种肝星状细胞凋亡诱导效应具有潜在的逆转肝纤维化的治疗作用。     

熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 体外观察熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的可能作用机制. 方法 将不同浓度熊果酸作用于肝星状细胞HSC-T6及肝细胞L02,分别在药物作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐法检测熊果酸对HSC-T6及L02细胞增殖的影响;流式细胞仪检测熊果酸对HSC-T6凋亡的影响;光学显微镜观察熊果酸作用后细胞形态学变化情况;免疫细胞化学法检测HSC-T6中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 各种浓度的熊果酸均可抑制HSC-T6细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性;当熊果酸浓度为25、50、75μmol/L时可促进L02细胞增殖,浓度＞75μmol/L则表现为抑制L02细胞增殖.在病理形态学方面,熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,光学显微镜下可见细胞缩小变圆、核浓缩等.25、50、75 μmol/L熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为10.30%±3.85%、21.87%±4.46%、31.33%±6.18%,比对照组(2.93%±1.60%)明显升高(P＜0.01).免疫细胞化学显示Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性,而Bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 在体外熊果酸可较明显地抑制HSC-T6细胞增殖,诱导其凋亡;对L02细胞的生长具有双向调节作用.熊果酸诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl-2/Bax比值、激活Caspase-3蛋白有关.     

Wnt抑制因子-1对肝星状细胞活化的影响

目的观察wnt抑制因子-1（WIF）对转化生长因子β1（TGF-β1）活化肝星状细胞（HSC）的影响。方法构建真核表达质粒pEGFP-C1-WIF并通过脂质体介导方法,将pEGFP-C1-WIF转染体外培养的HSC-T6细胞株,用TGF-β1刺激转染（试验组）和未转染的HSC-T6细胞株（对照组）,并用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法检测各组细胞（包括正常细胞组）smad3、β-连环蛋白（β-catenin）mRNA及其蛋白质的表达。结果试验组HSC-T6细胞株smad3、β-catenin mRNA及蛋白质表达明显低于正常组HSC-T6细胞株,更低于对照组HSC-T6细胞株（P〈0.05）。β-catenin和smad3蛋白质的表达均与α-肌动蛋白（α-SMA）蛋白质的表达显著相关（r=0.800,P〈0.01;r=0.743,P〈0.01）。结论 WIF能通过下调wnt/β-catenin以及TGF-β1/smads信号通路的生物学效应抑制HSC-T6细胞的活化,从而延缓肝纤维化的发展。     

TRAIL诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6凋亡及机制研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肝星状细胞凋亡情况及调控机制。方法用RT-PCR检测大鼠肝星状细胞（HSC-T6）中α-SMAmRNA和DR5mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞术检测外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用Western blot检测Bax、Caspase3蛋白的表达。结果培养的HSC-T6细胞表达α-SMA mRNA和DR5mRNA随作用时间的延长逐渐增加,TRAIL可以抑制其细胞增殖。TRAIL与对照组比较可以诱导活化的HSC-T6细胞凋亡明显增加（P〈0.05）,Western-blotting分析显示TRAIL作用下,HSC-T6细胞中的线粒体Bax蛋白、细胞浆Caspase3蛋白表达均上调。结论外源性TRAIL可诱导活化的HSC-T6细胞凋亡,可能与DR5及线粒体Bax表达上调有关。     

纤连蛋白对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝星状细胞凋亡的影响

目的研究纤连蛋白（FN）对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肝星状细胞fHSC）凋亡的影响及调控机制。方法MTr比色法、流式细胞术检测加入FN时,外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用WesternBlot检测粘着斑激酶（FAK）、磷酸化粘着斑激酶（pFAK）、Bax的表达。结果TRAIL可以抑制HSC-T6细胞增殖。可以诱导HSC-T6细胞凋亡,而FN的存在可以使TRAIL诱导的HSC—T6细胞凋亡明显减少（P〈0．05）,WesternBlot分析显示TRAIL诱导I-ISC-T6细胞凋亡时加入FN,细胞浆pFAK表达上调而线粒体Bax表达下降。结论FN可以使外源性TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡减,扮．棚制可能与FN但伸FAK磷酪仙．pFAK表达上调并减少线粒体Bax表达有关。     

重组转化生长因子-β3基因对大鼠肝星状细胞内、外蛋白表达的影响

目的探讨重组转化生长因子-β3（TGF-β3）基因对大鼠肝星状细胞（HSC）内、外蛋白合成及分泌的影响。方法构建质粒pcDNA3.1（＋）-TGF-β3和pcDNA3.1（＋）-TGF-β1。稳定转染：通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1（＋）-TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3.1（＋）-TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。再将pcDNA3.1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6克隆细胞,用W estern b lot法和酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-1的蛋白表达量。结果pcDNA3.1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低（P〈0.05）,MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义（P〉0.05）,而MMP-9的表达明显增高（P〈0.05）。结论重组质粒pcDNA3.1（＋）-TGF-β3能减少细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌;通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制细胞外基质的合成,促进其降解。     

积雪草酸对HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达的影响

目的检测积雪草酸对HSC-T6细胞Smad-7和PPARγ的mRNA表达的影响,探讨积雪草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法用MTT实验检测积雪草酸对HSC-T6细胞的增殖抑制作用,计算抑制率,确定积雪草酸作用浓度;设置空白对照组与积雪草酸干预组,用半定量RT-RCR检测两组HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达差异。结果积雪草酸抑制HSC-T6细胞的增殖,药物浓度为10、20、30、40、50、70、90μmol/L时,抑制率分别为7.47%、12.42%、13.97%、21.32%、47.31%、51.18%、60.36%。空白对照组和积雪草酸干预组的半定量RT-PCR的结果分别为：Smad7/GAPDH mRNA空白对照组为0.267±0.037,积雪草酸干预组为0.358±0.035;PPARγ/GAPDH mRNA空白对照组为0.157±0.054,积雪草酸干预组为0.570±0.066。两组结果间比较差异具有统计学意义,P〈0.05。结论积雪草酸可以上调HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA的表达,从而抑制HSC-T6细胞合成和分泌胶原,改善肝纤维化的病理表现。