丙肝患者外周血单个核细胞分离方法的改进

据陈良标等报道 ,丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)可感染慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞并在其中复制。但从外周血中提取单个核细胞 (ＰＢＭＣ)进行免疫组化染色时 ,常有血小板的干扰 ,影响观察结果 ;另外 ,在检测ＨＣＶ抗原 (ＨＣＶ Ａｇ)过程中 ,还存在血浆中ＨＣＶ对ＰＢＭＣ的污染问题。为此 ,我们对分离方法进行了改进取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1　材料　选抗 ＨＣＶ抗体和ＨＣＶ ＲＮＡ均阳性的丙肝患者血清共 96例 ,均来自本院肝病研究所门诊及住院患者。肝素由山东省莱阳生物化学制药厂生产 ,12 5Ｕ/支 ;淋巴细胞分…     

浓缩外周血单个核细胞查肿瘤细胞

浓缩外周血单个核细胞查肿瘤细胞廖军鲜马一盖王银平王质彬蒋玉玲钟明华（中日友好医院血液科，北京１０００２９）关键词外周血单个核细胞浓缩肿瘤细胞在实体瘤病人的外周血中可存在微量的循环肿瘤细胞〔１〕，尽早发现这些肿瘤细胞不仅能为诊断和分期提供线索，而且有利...     

外周血单个核细胞端粒酶活性与寻常型银屑病患者焦虑抑郁状态的关系

目的 观察寻常型银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性变化,探讨其与寻常型银屑病患者焦虑、抑郁的关系.方法 100例寻常型银屑病患者为银屑病组,同期100例体检健康者为对照组.银屑病组于就诊时、对照组于体检日采集外周静脉血,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞端粒酶活性;2组行医院焦虑抑郁量表(Hospital ...     

大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响

目的探讨大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响.方法选取32例非胰岛素依赖型糖尿病伴肾损害患者和健康对照24例,PBMC提取采用Ficoll梯度密度离心法,细胞被分成4组,观察4种不同浓度的大黄素(0、10、50、100μg/ml)对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响,MCP-1测定采用ELISA法.结果糖尿病肾病外周血单个核细胞MCP-1水平高于正常对照(78.40±35.67vs 29.30±17.31pg/ml,P＜0.05),且与24h尿蛋白定量、尿白蛋白水平呈正相关关系(r=0.633,P＜0.05;r=0.701,P＜0.05;).大黄素(30～100μg/ml)均明显降低了糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平(78.40±35.67 vs 61.00±28.90,P＜0.05;78.40±35.67 vs 41.00±18.00,P＜0.01;78.40±35.67vs 21.00±6.90,P＜0.01),大黄素浓度越大,抑制效应越明显(P＜0.01).结论糖尿病肾病尿MCP-1水平是增高的,大黄素能抑制糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平,大黄素下调MCP-1的表达可能是其降低蛋白尿、改善肾功能的重要环节.     

泛发性脓疱型银屑病患者外周血单个核细胞甲基化酶及甲基化CpG结合蛋白mRNA的表达水平

  目的  观察泛发性脓疱型银屑病(generalized pustular psoriasis,GPP)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNA甲基转移酶及甲基化CpG结合蛋白(methyl-CpG binding protein,MeCP)mRNA的表达情况,初步探讨DNA甲基化在GPP中可能的作用机制。  方法  回顾性收集2015年12月至2016年12月在北京协和医院皮肤科门诊或住院治疗的9例GPP患者临床资料;随机选取10例同期在医院接受健康体检的健康人做为对照,年龄和性别与GPP患者相匹配。分别留取10 ml肘正中静脉血,采用密度梯度离心法分离PBMC,应用Trizol法提取PBMC总RNA,采用实时PCR法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4及MeCP2的mRNA表达水平,并分析年龄及病情严重程度与mRNA表达水平的相关性。  结果  GPP患者PBMC中DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD4的mRNA表达水平较健康对照组升高[DNMT3a:0.000 17(0.000 06, 0.001 15)比0.000 03(0.000 02,0.000 04);DNMT3b:0.000 04±0.000 02比0.000 02±0.000 01;MBD1:为0.001 01±0.000 45比0.000 46±0.000 15;MBD2:0.002 61±0.000 39比0.001 85±0.000 52;MBD4:0.004 29±0.001 60比0.001 57±0.000 55, P均＜0.05], 年龄及疾病严重度与上述因子mRNA的相对表达水平无相关性(P均＞0.05)。  结论  GPP患者体内甲基化相关调控基因表达异常,但与年龄和疾病严重程度不相关。     

外周血单个核细胞DNA提取方法的研究进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件.外周血作为一种常用的临床检测材料,如何从外周血单个核细胞中快速、高效的分离提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要.目前,DNA的抽提方法有很多,如酚-氯仿法、盐析法、离心吸附柱法等人工方法,以及磁珠法等半自动方法及试剂盒法.本文就从外周血血液中提取DNA方法的原理、具体操作步骤及方法评估等给予简要的综述.     

肝癌患者外周血单个核细胞HLA-G表达研究

目的了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原G（HLA—G）的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应（PCR）和流式细胞术（FCM）检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94．7％、84．0％和87．5％,差异无统计学意义（P=0．359）;HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义（P=0．002）。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^＋细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞p170和CD38的表达及意义

我们检测了17例多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞p170和CD(38)的表达,以期探讨二者表达的相关性及其意义。材料和方法1 研究对象1.1 实验组:17例MM住院患者,根据Durie和Salm-on标准诊断,无急性感染,形态学未发现外周血中有浆细胞,其中男性14例,女性3例,初治9例,复发8例,年龄40～73岁,平均年龄60岁,Ⅱ期5例,Ⅲ期12例。1.2 对照组:11名健康献血员,男性9名,女性2名,年龄31～48岁,平均年龄39岁。1.3 化疗方案:检测患者p170和CD_(38)后,无论初治和     

FQ-PCR技术对慢性乙肝患者血清与外周血单个核细胞HBV-DNA定量的对比分析

目的探讨慢性乙肝患者血清和外周血PBMC的HBV-DNA定量间的关系。方法采用FQ-DNA技术检测90例慢性乙肝患者血清和外周血单个核细胞的HBV-DNA含量。结果HBeAg阳性时,血清和PBMC的HBV-DNA阳性率均为100%,HBeAg阴性时,血清HBV-DNA阳性率为60.9%,PBMC阳性率为66.7%。另外当HBeAg( )、HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为100%,HBeAg(-),HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为85.7%,HBeAg(-),HBV-DNA(-)时,PBMC阳性率为48.1%。结论同时进行HBV-DNA的血清学以及PBMC内检测十分重要,其检测结果在临床上对慢性乙肝患者的病情判断,治疗措施以及治疗效果的评价具有举足轻重的作用。     

慢性乙型肝炎患者 HBV 感染外周血单个核细胞的研究进展?

乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV)感染是一个全球性的公共卫生问题,全世界约3.5亿人受该病毒感染影响。近年来,国内外研究发现,HBV 不仅存在于肝细胞中,也可以存在于外周血单个核细胞(PBMC)。由于 PBMC 在机体免疫过程中发挥非常重要的作用,HBV 在 PBMC 中的发现,以及 HBV 对PBMC 免疫功能的影响越来越受到国内外学者的关注。本文就慢性乙肝(CHB)患者中 PBMC 相关的研究进展作简要的综述。     

介绍一种外周血单个核细胞RNA提取方法

分子生物学实验中RNA提取纯化影响因素较多 ,由于RNA核糖残基 2 / 和 3/ 位上的羟基存在 ,使其更易受自然界中广泛存在的RNA酶降解。目前常用的RNA提取方法有酸性酚 硫氰酸胍 氯仿提取法、oligo 纤维素层析法等[1] 。组织和细胞单相裂解液也有商品化供应 ,如Trizol、Isogen、RN     

外周血单个核细胞在精神分裂症中的作用

精神分裂症是一种复杂且病因未明的慢性精神疾病,目前诊断主要依据患者的临床表现、医生对症状的观察及评估,缺乏客观的生物学指标,导致临床诊断存在一定困难。近年来,有研究发现免疫炎症反应在精神分裂症的发病机制中发挥作用,通过抗炎治疗后部分患者的精神分裂症症状可在一定程度上缓解,免疫细胞在精神疾病诊疗中的作用逐渐受到重视。本文主要综述外周血单个核细胞作为探索精神分裂症生物标志物的载体在疾病发病机制中的作用及潜在的诊断意义,以期增加对精神分裂症免疫表型理解。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞mIL—2R的检测

用生物素－链霉亲和素免疫细胞化学法检测慢性乙型肝炎（ＣＨ－Ｂ）患者外周血单个细胞（ＰＢＭＣ）静息状态及ＰＨＡ诱导后膜白介素－２受体表达水平，结果显示ＣＨ－Ｂ患者Ｔ淋巴细胞处于部分激活状态，其对ＰＨＡ的应答能力未见明显低下。ＣＨ－Ｂ患者ＰＨ诱导后ｍＩＬ－２Ｒ的表达水平可作为评价病情和考核疗效的指标之一。     

慢性肝病患者外周血单个核细胞白蛋白基因表达的临床意义

目的：探讨慢性肝病患者外周血单个核细胞（PBMC）白蛋白mRNA表达的临床意义。方法：50例慢性乙型病毒性肝炎患者（CHB组）、40例肝炎后肝硬化患者（肝硬化组）和40名肝功能正常的健康人（健康对照组）予荧光定量PCR检测血清HBVDNA,采用逆转录巢式荧光定量PCR检测PBMC白蛋白mRNA表达。结果：CHB组50例患者中,血清HBVDNA阳性30例（60％）;PBMC白蛋白mRNA阳性19例（38％）。肝硬化组40例患者中,血清HBVDNA阳性31例（78％）;PBMC白蛋白mRNA阳性14例（35％）。健康对照组PBMC白蛋白mRNA阳性2例（5％）。CHB组及肝硬化组的HBVDNA及PBMC白蛋白mRNA阳性率均明显高于健康对照组（P〈0．01）。CHB组活动期和肝硬化组失代偿期患者PBMC白蛋白mRNA阳性率明显升高。结论：PBMC白蛋白mRNA的阳性表达与肝细胞的损害程度有关,且具无创性,可考虑作为慢性肝病进展的辅助参考指标之一。     

B细胞成熟抗原在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的检测B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平,探讨BCMA在SLE发病中的意义。方法纳入2006年1-11月收治的36例SLE患者,同期17例健康志愿者作为对照组,采用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中BCMA mRNA的表达,并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者组BCMA mRNA表达水平（0.598±0.230）均明显高于正常对照组（0.411±0.309）（P〈0.05）。SLE患者BCMA mRNA表达水平与SLEDAI评分无相关性（P=0.590）。结论 SLE患者BCMA mRNA表达水平的增高,可能在SLE的发病机制中具有一定的作用。     

利用外周血单个核细胞生产成熟红细胞

体外制备红细胞的方法大多使用脐血、骨髓或外周动员的CD34＋细胞或胚胎干细胞作为起始材料.本研究利用外周血单个核细胞为原料在体外生产成熟红细胞.以血液滤涂白细胞后剩余的白膜层为原料,从中分离出单个核细胞,然后通过4步培养法制备成熟的红细胞.结果表明：经过不同细胞因子组合的诱导以及小鼠基质细胞系MS-5的支持培养,外周血单个核细胞的扩增倍数达到约1 000倍,其中约90％的细胞是与正常红细胞形态相似的无核成熟红细胞.集落形成能力分析显示,本研究培养体系可使单个核细胞中的祖细胞增殖并且只向红系方向分化.结构和功能分析结果表明,体外培养出的红细胞的平均细胞体积（MCV）为118±4fl,比正常红细胞（80-100 fl）稍大.平均血红蛋白含量（MCH）为36±1.2 pg,比正常的红细胞水平（27-31 pg）稍高.红细胞的最大变形指数（DImax）为0.46,接近正常红细胞水平.葡萄糖6磷酸脱氢酶及丙酮酸激酶的含量与年轻红细胞的特性一致.结论：利用外周血白膜层中含有的造血干祖细胞,通过体外培养能够生产出成熟红细胞,它是一种取材方便、成本低廉的红细胞生产原料,本研究培养体系适于利用单个核细胞生产成熟红细胞.     

多脏器功能障碍综合征患者外周血单个核细胞凋亡的意义研究

目的观察多脏器功能障碍综合征(MODS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞凋亡。方法采用流式细胞仪法、电子显微镜、荧光显微镜测定25例MODS患者PBMCs的细胞凋亡,并与18例健康志愿者比较。结果电镜、吖啶橙—溴化乙锭染色荧光显微镜均观察到MODS患者PBMCs出现细胞凋亡的典型形态学改变;MODS组和健康对照组的PBMCs凋亡率分别为(25.4±9.21)%、(15.9±6.75)%(P<0.01),凋亡细胞数分别为1.040±0.096、0.235±0.028个/HPF(P<0.05)。结论MODS患者PBMCs细胞凋亡异常增高。     

胃癌患者外周血单个核细胞HLA基因表达研究

目的探讨胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因的表达水平及对胃癌的临床应用价值。方法设计HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系,在ABI7500实时荧光定量PCR仪上检测43例胃癌患者和22例健康人PBMC内基因表达水平并分析其差异。结果(1)胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G的mRNA相对表达量分别为0.71±0.26、0.61±0.37、0.91±0.33、0.90±0.38、0.77±0.27。健康组分别为1.23±0.60、1.17±0.60、1.07±0.68、1.12±0.55、0.98±0.37。与健康组相比,胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-G表达水平降低,差异有统计学意义。HLA-DP和HLA-DR则无明显差异。(2)在不同分化的胃癌患者中,HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR和HLA-G的mRNA表达水平无明显差异。胃癌Ⅰ期+Ⅱ期的HLA-G表达水平高于Ⅲ期+Ⅳ期,差异有统计学意义。不同分期的HLA-A和H...     

冠心病患者外周血单个核细胞YKT6基因表达及其临床意义

目的：研究YKT6在冠心病（coronary heart disease,CHD）患者外周血单个核细胞中的表达及其与疾病发生、发展的关系.方法：分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westen blot检测40例CHD患者和37例健康者YKT6 mRNA和蛋白表达.结果：CHD患者外周血单个核细胞中YKT6 mRNA和蛋白表达均明显高于健康者（P＜0.05）.结论：YKT6表达与CHD发生存在一定相关性,在CHD发病过程中可能起重要作用,为CHD的诊断和预防提供了新线索.     

哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子检测及意义

目的探讨共刺激分子在哮喘发病免疫学机制中的作用。方法选取28例哮喘患者和15名对照者,采用三色标记的流式细胞术检测哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子的表达水平。结果与对照组相比,哮喘患者T细胞各亚群所占比例及B细胞、单核细胞占外周血单个核细胞的比例差异未见显著性,但CD4/CD8明显高于对照组(P<0.05)。CD4和CD8阳性T细胞表达的CD28及CTLA-4分子在两组间差异无显著性。哮喘组单核细胞(CD14阳性)CD80表达水平低于对照组(P<0.05)。而B细胞(CD19阳性)表面表达的CD86低于对照组(P<0.05)。结论哮喘患者体内存在的T淋巴细胞功能紊乱可能与T淋巴细胞活化过程中共刺激信号的异常有关。