极低频电磁场对中脑神经干细胞体外诱导分化的影响

目的:观察极低频电磁场(extremelylowfrequencyelectromagneticfield,EMF)对新生大鼠中脑神经干细胞神经元分化的影响。方法:将新生大鼠中脑神经干细胞分别置于5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场(8mT)中诱导分化,每天上午、下午各一次,15min/次,分别作用1d、5d或10d,并设立相应的对照组。利用神经元特异性标记物MAP2抗体进行免疫荧光染色,计数MAP2阳性细胞的百分比。结果:5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场的干预,神经干细胞(neuralstemcells,NSC)分化比例明显增加。20Hz磁场刺激1d,可增加NSC神经元的比例在连续10d的磁场干预后效果最显著(P<0.01)达到47%±99%。结论:5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场以不同的效应模式促进NSC神经元向的分化,极低频正弦交变磁场可以成为NSC定向分化研究的重要手段之一。     

极低频电磁场对中脑神经干细胞体外诱导分化的影响

目的：观察极低频电磁场（extremely low frequency electromagnetic field，EMF)对新生大鼠中脑神经干细胞神经元分化的影响。方法：将新生大鼠中脑神经干细胞分别置于5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场(8mT)中诱导分化，每天上午、下午各一次，15min／次，分别作用1d、5d或10d，并设立相应的对照组。利用神经元特异性标记物MAR2抗体进行免疫荧光染色，计数MAR2阳性细胞的百分比。结果：5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场的干预，神经干细胞(neural stem cells，NSC)分化比例明显增加。20Hz磁场刺激1d，可增加NSC神经元的比例在连续10d的磁场干预后效果最显著(P&;lt;0．01)达到47％&;#177;99％。结论：5Hz和20Hz极低频正弦交变磁场以不同的效应模式促进NSC神经元向的分化，极低频正弦交变磁场可以成为NSC定向分化研究的重要手段之一.     

工频电磁场对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化的影响

目的　研究 5 0Hz工频电磁场对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化及细胞内环磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响。方法　体外培养小鼠骨髓间充质干细胞 ,取第 3代细胞 ,应用工频电磁场及成骨性诱导剂干预 ,并分别于第 3天和第 5天用MTT法检测其增殖活性 ,用放免法检测细胞内cAMP浓度 ,于第 7天检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果　频率 5 0Hz、强度 2mT的正弦波电磁场能抑制体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖 (P <0 .0 5 ) ,使其ALP活性增高 (P <0 .0 5 ) ,在磁场作用的早期 ( 1～ 3d) ,细胞内的cAMP水平明显增高 (P <0 .0 1) ,继续暴磁至第 5天 ,cAMP水平不再发生变化 (P >0 .0 5 )。结论　 5 0Hz工频电磁场可能通过作用于cAMP 蛋白激酶A信号转导系统 ,从而调控体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖与分化 ,此调控作用可能发生在细胞受电磁场作用的早期。     

甲状旁腺素相关肽对INS-1细胞株增殖的影响

目的:探讨甲状旁腺素相关肽(PTHrP)对大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1胰岛素分泌的促进作用.方法:分别应用不同浓度PTHrP干预INS-1细胞,应用MTT法检测细胞生长活力,然后应用Western blot检测细胞Ki67、PDX-1、Bax及Bcl-2的表达,BrdU免疫荧光检测细胞增殖情况.结果:PTHrP具有农度依赖性的促进INS-1细胞增殖,PTHrP显著上调Ki67、PDX-1及Bcl-2表达,下调Bax表达,PTHrP干预后细胞BrdU表达增高.结论:PTHrP可以促进胰岛β细胞增殖.     

正弦波电磁场对大鼠椎间盘纤维环细胞的生物学影响

目的研究低频正弦波电磁场对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和细胞外基质的生物学影响。 方法体外培养大鼠生长良好的椎间盘纤维环细胞，取生长良好的第3代细胞，随机分为实验组和对照组，实验组采用75 Hz正弦波电磁场的间断刺激，对照组置于同样培养条件下但不暴磁。通过流式细胞术和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞周期和增殖活性，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测椎间盘细胞胶原和蛋白聚糖（aggrecan）的表达情况，Alcian Blue法检测糖胺多糖（sGAG）含量。 结果暴磁刺激初期细胞增殖效果不明显，刺激天数&rt;4 d时能显著促进细胞增殖(P<0.05)，与对照组相比，实验组细胞I、II型胶原、蛋白聚糖的表达水平均显著上调(P<0.05)，GAG含量也增加。 结论正弦波电磁场可以促进纤维环细胞的增殖，上调正常椎间盘细胞外基质I、II型胶原、蛋白聚糖的表达水平和GAG含量，可望为治疗椎间盘退变提供一种新的思路。     

脉冲电磁场诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的 观察脉冲电磁场(PEMFs)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向成骨细胞分化的影响。方法 分离并培养hMSCs，取第3代细胞，分为对照组与处理组，处理组细胞接受频率12Hz、场强1．1mT的PEMFs刺激，每日8h；对照组细胞不接受PEMFs刺激。应用透射电镜观察2组细胞超微结构，采用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观测。结果 细胞培养5～6d即可传代，经PEMFs连续刺激3d后，hMSCs细胞形态发生变化，3周后聚集成细胞钙化结节。透射电镜下观察显示：细胞比较成熟，内质网扩张，其碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组织化学染色和四环素荧光标记均为阳性。结论 hMSCs经特定频率和场强的PEMFs体外刺激后，可向成骨细胞分化，符合成骨细胞的形态学和生物学特性，为体外构建组织工程化骨提供自体种子细胞。     

成骨细胞对造血干细胞增殖、分化影响的研究进展

造血干细胞的增殖和分化直至最后成为成熟的血液细胞释放至外周血的整个过程都离不开骨髓造血微环境 (BM HME)的调节。BMHME是由骨髓基质细胞 (BMSC)构成的。同时 ,BMSC又是成骨细胞的主要来源。也就是说 ,在体内造血细胞和成骨细胞具有非常密切的空间关系。体外长期培养造血干细胞也离不开基质细胞的支持。BMSC为造血细胞提供了保护作用[1 ] 。基质细胞 (包括网状成纤维细胞、巨核细胞、脂肪细胞和内皮细胞 )和造血细胞的直接接触 ,基质细胞产生的细胞外基质和基质细胞合成的细胞因子与各种造血细胞的形成都有关系[2 ,3] 。成骨细…     

富血小板血浆对大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的:观察富血小板血浆对体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响,探讨富血小板血浆促进骨修复的细胞学机制及其有效浓度。方法:实验于2004-09/2006-10在河北医科大学第二医院外科实验室完成。①实验动物:出生24h内的SD乳鼠10只,体质量400～500g的健康雄性SD大鼠10只。②实验方法:取出生24h内的SD乳鼠颅骨进行成骨细胞分离与培养。从健康雄性SD大鼠腹主动脉抽血制备富血小板血浆。将体外培养并扩增的第3代SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞与不同浓度富血小板血浆复合培养。③实验分组:实验分为空白对照、12.5%富血小板血浆组、25%富血小板血浆组和50%富血小板血浆组。④实验评估:通过相差显微镜观察细胞生长情况,培养后1,3,5和7d应用四甲基偶氮唑盐法、碱性磷酸酶活性检测和钙结节染色检测成骨细胞的增殖和分化情况。结果:①各组细胞生长情况:相差显微镜下见富血小板血浆组细胞增殖旺盛,与空白对照组相比,富血小板血浆能明显促进成骨细胞的增殖,其作用随富血小板血浆浓度的增加而增强。其中,50%富血小板血浆组细胞增殖最为显著,且细胞达到汇合的时间也相应缩短。②成骨细胞增殖情况:在各时间段,各种浓度的富血小板血浆组中成骨细胞的增殖活性均高于空白对照组(P<0.05),且与富血小板血浆浓度成正比。50%富血小板血浆对成骨细胞增殖刺激作用最强,3,5和7d时与其他富血小板血浆组相比差异有显著性(P<0.05)。③各组细胞碱性磷酸酶活性检测结果:富血小板血浆组中成骨细胞的碱性磷酸酶活性均高于空白对照组(P<0.05),且与富血小板血浆浓度成正比。以50%富血小板血浆组的成骨细胞碱性磷酸酶活性最高,3,5和7d时均显著高于其他富血小板血浆组(P<0.05)。④钙结节茜素红染色结果:不同浓度的富血小板血浆组的矿化结节数量均显著高于空白对照组(P<0.05),其中50%富血小板血浆组的矿化结节数量最多,显著高于其他浓度的富血小板血浆组(P<0.05)。结论:富血小板血浆能明显促进体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化,其作用效果与富血小板血浆的浓度成正比。     

低频振动对成人成骨细胞增殖分化的影响

目的 探讨低频振动对成人成骨细胞增殖分化的影响。方法 取成人的髂骨松质骨，采用胶原酶－胰蛋白酶联合消化法获得人成骨细胞，进行纯化培养。利用流式细胞仪检测细胞的增殖分化能力。结果 不同频率的低频振动对成骨细胞的影响不同。加载0．5Hz振动可使S期的细胞从10．4％增加到16．12％，增殖指数从20．14增加到28．75；2Hz使S期的细胞降低至8．56％。增殖指数降低到17．68％，而5Hz使细胞增殖指数明显降低（P＜0．05）。结论 适当频率的低频振动能促进成骨细胞增殖分化，对临床应用有积极意义。     

肠道干细胞的研究进展

干细胞具有持久的自我增殖与分化能力，可以产生多种高度分化细胞的未分化细胞。肠道干细胞主要位于肠黏膜上皮Lieberkunn’s隐窝中，潘氏细胞上方，具备干细胞的终生自我更新与分化的基本特征。当受到外界生理或病理的信号作用后，肠道干细胞进行非对称分裂，形成一个原代干细胞和一个分化了定向祖细胞，定向组细胞进一步分化为具有特殊结构和功能的终末分化细胞，如：吸收细胞、杯状细胞、潘氏细胞、M细胞、内分泌细胞等，修复并重建小肠黏膜上皮屏障和消化吸收功能，小肠干细胞的这种潜能对肠道损伤后的修复十分关键。目前，国内肠道疾病常见，肠道黏膜，甚至黏膜下肌层的结构和功能受到破坏，通过干细胞技术和组织工程技术定向诱导肠道干细胞使其分化为特定的细胞以替代功能障碍的细胞或组织缺损，这可能是治疗肠道疾病的有效方法。为此对影响肠道干细胞增殖分化的因素及其干细胞在肠道创伤愈合中的可能作用进行综述。     

不同强度工频电磁场对大鼠前软骨干细胞增殖的影响

摘　要　目的：研究不同强度工频电磁场辐射对大鼠前软骨干细胞增殖的影响 方法：体外分离纯化培养大鼠前软骨干细胞，取第3代前软骨干细胞,置于工频（50Hz）电磁场中进行辐射处理（每天2次，每次45min），根据不同场强（0.10 mT、0.50 mT、1.00 mT和1.50 mT）分为4组 ,同时设1个对照组（不加电磁场干预），采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖和细胞凋亡情况，Western Blot法分析Bcl-2蛋白表达情况。结果：实验48h内细胞增殖水平无明显变化, 工频电磁场干预96h后细胞的增殖水平提高显著 (P <0.05) 。不同强度组工频电磁场辐射均明显促进前软骨干细胞增殖，不同的场强促增殖的效应也不同, 其中1.00 mT组促增殖效果最为显著。同时,各实验组细胞凋亡率均明显降低(P <0.05) , Bcl-2凋亡蛋白的表达显著增强。结论：工频电磁场能显著促进大鼠前软骨干细胞增殖, 并可能通过上调Bcl-2蛋白的表达从而抑制细胞凋亡,均与磁感应强度及作用时间相关，1.00 mT为促进前软骨干细胞增殖的最佳磁感应强度。     

动态负荷力对软骨前体干细胞甲状旁腺激素相关肽的影响及细胞外基质蛋白组研究

目的：探讨在动态负荷压力对体外软骨前体干细胞（PSC）甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）的影响,寻找在细胞外基质呈差异性表达的蛋白质。方法体外培养大鼠软骨PSC,并用磁性细胞分选系统分离纯化,所得PSC行不同强度（30、60、90 mm Hg）和持续时间（2、6、24 h）的压力刺激,设未刺激组为对照组,采用逆转录PCR检测各组细胞的PTHrP水平;随机将软骨前体干细胞分成实验组与对照组,实验组以90 mm Hg强度的压力持续24 h处理软骨前体干细胞,对照组不予处理,提取两组蛋白质行双向电泳,以基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱仪鉴定2组细胞呈差异表达的蛋白质。结果 PSC在动态压力培养环境下,各时间点PTHrP表达水平均明显高于对照组（P＜0.01）;PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而升高;同一时间点,压力越大,PTHrP mRNA表达水平越高。质谱鉴定在压力作用下的实验组与对照组呈差异表达共6种蛋白质,分别为脯氨酰羟化酶α亚单位、丙酮酸激酶、L-乳酸脱氢酶、脯氨酰羟化酶β亚单位、细胞骨架蛋白、烯醇酶。实验组的所有差异性蛋白表达均强于对照组。结论压力能促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞PTHrP的表达,压力作用下软骨细胞外基质有6个关键蛋白呈差异表达,其在软骨改建中可能起重要作用。     

1.0 mT低频交变电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 探讨1.0 mT低频交变电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞活力、增殖及成骨分化的影响。 方法 本研究选用1.0 mT正弦波电磁场进行实验,电磁场频率分别设置为10 Hz,30 Hz,50 Hz和70 Hz。不同频率组大鼠骨髓间充质干细胞每天均接受8 h暴磁处理,培养时间为2周。分别在不同时间点使用Live/Dead试剂盒检测不同频率电磁场对细胞活力的影响;使用DNA定量方法评价细胞增殖水平;使用Von Kossa染色方法检测细胞外基质矿化程度;并使用酶联免疫吸附和免疫组化方法检测各组骨钙素和骨形态发生蛋白-2合成情况。 结果 实验结果显示,50 Hz及70 Hz电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞活力有明显影响;10 Hz电磁场可显著促进细胞增殖;暴磁2周后,发现50 Hz组骨钙素及骨形态发生蛋白合成水平明显高于其它暴磁组;并且50 Hz组中矿化结节数量及密度也较其它组明显增加。 结论 不同频率1.0 mT低频交变电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞活力、增殖及成骨分化方面的影响各不相同,本研究结果为电磁场应用于骨组织再生医学提供更多理论依据。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80％新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0．2％的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。     

缺氧对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：探讨缺氧对体外培养成骨细胞的影响。方法：应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察缺氧对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（ALP）表达及矿化结节形成的影响。结果：缺氧具有抑制成骨细胞增殖，降低ALP活性及矿化结节形成的数量的作用，并随缺氧时间的增加而更加明显。结论：缺氧具有抑制体外培养成骨细胞增殖、分化成熟及延缓矿化的作用。     

The effects of fluoxetine on the human adipose‐derived stem cell proliferation and differentiation

Fluoxetine is one of the most commonly used antidepressants. Fluoxetine could prevent the mesenchymal stem cell differentiation in lung fetus of rat. Moreover, the mesenchymal stem cells are also present in adult tissues. Therefore, in the current study, we aimed to investigate the effects of fluoxetine (FLX) on both proliferation and adipogenic/osteogenic differentiation of human adipose‐derived stem cells (ADSCs). After culturing of human ADSCs, these cells were treated with two concentrations of FLX (10 and 20 μm ). Then, cells were differentiated by adding osteogenic and adipogenic media. The effect of FLX on human ADSCs proliferation was evaluated by MTT assay. Fluoxetine role on adipogenic and osteogenic differentiation of human ADSCs was analyzed by oil red and alizarin red staining and RT‐PCR reaction. According to MTT assay, FLX showed a time‐ and concentration‐dependent proliferation response and eventually decreased human ADSCs proliferation. RT‐PCR analysis indicated that FLX significantly diminished the expression of osteogenesis‐related genes such as RUNX2 and alkaline phosphatase (ALP). Data also revealed a significant reduction in the expression of peroxisome proliferator‐activated receptor γ (PPARγ) and fatty acid‐binding protein (FABP) (specific genes of adipogenic lineage). In addition, FLX decreased mineralized matrix and the amount of lipid droplets in human ADSCs by staining methods. Our observation demonstrated that the effects of FLX may be time‐dependent. This drug possesses an increasing phase in proliferation and survival of human ADSCs (first 24 h) following a decreasing phase (after 48 h). Moreover, FLX could attenuate both osteogenic and adipogenic differentiation of human ADSCs.     

脉冲电磁场对原代大鼠骨髓来源内皮前体细胞生长及分化的影响

目的探讨脉冲电磁场对内皮前体细胞增殖及分化的影响。方法采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓内皮前体细胞，将细胞分为对照组及磁场组。磁场组细胞于培养第5天后给予低频脉冲电磁场干预，直至培养终点。细胞增殖活性采用MTT法测定，用流式细胞仪检测Ⅷ因子相关抗原、NOS，表达阳性细胞。结果从磁场作用第5天开始，磁场组细胞增殖活性明显高于对照组；磁场作用第3天时，磁场组细胞Ⅷ因子相关抗原、NOS，表达阳性细胞数量均明显高于对照组，这种增高趋势持续至培养终点。结论低频脉冲电磁场可促进大鼠骨髓来源内皮前体细胞的增殖及分化。     

工频电磁场对骨髓间充质干细胞增殖、分化及其胞浆内钙离子浓度的影响

目的：研究工频电磁场刺激对骨髓间充质干细胞（MSC）的增殖与分化以及胞浆内钙离子浓度的影响。方法体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，取第4代细胞，应用工频电磁场进行干预。用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其增殖活性，采用碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测ALP活性。应用Fura．2／AM对细胞进行染色，用细胞内双波长钙荧光系统测定细胞胞浆内游离钙离子的浓度。结果50Hz、1．1mT的电磁场对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖作用（P〈0、05），使其ALP活性增高（P〈0．05）。无论是放置在含诱导剂还是不含诱导剂培养基中的细胞，其胞浆内的钙离子浓度在电磁场刺激下都有不同程度的增高。结论50Hz、1.1mT的电磁场可促进MSC增殖，使其向成骨细胞分化。胞浆内钙离子浓度增加可能在细胞的增殖与分化过程中起着重要作用。     

阿魏酸对骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的影响实验研究

目的探讨阿魏酸对骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的影响。方法通过大鼠骨髓基质干细胞（BM—SCs）的成骨诱导与培养进行分组实验,实验分4组：A组（对照组）;B组（成骨诱导组）;C组（阿魏酸组）;D组（联合培养组,阿魏酸联合成骨诱导剂）,观察对比分析各组细胞特征、细胞计数、BMSCs的碱性磷酸酶（ALP）活性和细胞内骨钙素含量测定。结果D组ALP活性最强和细胞内骨钙素含量测定最高,与A组、B组和c组对比,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论阿魏酸联合成骨诱导剂可以有效的促进骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的功能,需要进一步研究阿魏酸的临床应用。