丽参注射液对血透相关性低血压患者血管内皮细胞功能的影响

目的：观察丽参注射液对血透相关性低血压患血管内皮细胞功能的调节作用。方法：采用前瞻、对照研究，将50例病人随机分为治疗组和对照组。治疗组予50％葡萄糖注射液＋丽参注射液，对照组予50％葡萄糖注射液静脉注射，观察两组临床疗效，及放免法测定血ET、PGI2、TXB2含量，比色法测定血NO含量。结果：治疗组总有效率较对照组高，差异有显性意义（P＜0.05），复发率较对照组低，差异有非常显性意义（P＜0.01），且治疗组心率及心衰改善较对照组差异有非常显性意义（P＜0.01）。治疗组治后ET、PGI2水平上升，NO、TXB2水平下降，治后与治前差异有非常显性意义（P＜0.01）；对照组治疗前后差异无显性意义（P＞0.05）。结论：益气固脱法可显提高血透相关性低血压的临床疗效，减少复发，改善心血管功能。此作用与其较好调节血管内皮细胞分泌功能而发挥升血压的作用有关。     

血管内皮细胞生长因子及肿瘤血管生成

血管内皮细胞生长因子，又名血管通透性因子，是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，是目前发现的重要的肿瘤血管生成因子之一，其受体ＫＤＲ，ｆｌ具有酪氨酸激酶特征。ＶＥＧＦ的研究发现对阐明肿瘤血这生成机制有重要意义，为抗肿瘤生长及转移开辟了新途径。     

血管内皮细胞生长因子及肿瘤血管生成

血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ），又名血管通透性因子（ＶＰＦ），是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，是目前发现的重要的肿瘤血管生成因子之一，其受体ＫＤＲ、ｆｌｔ具有酪氨酸激酶特征。ＶＥＧＦ的研究发现对阐明肿瘤血管生成机制有重要意义，为抗肿瘤生长及转移开辟了新途径。     

人脑膜瘤血管内皮细胞生长因子表达的临床意义

目的　探讨脑膜瘤血管内皮生长因子 (VEGF)基因表达与血管生成和脑水肿的关系。方法　应用免疫组织化学方法检测 3 5例脑膜瘤组织中VEGF基因表达 ;Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体组织化学染色显示微血管 ,用微血管记数 (MVC)测定血管生成 ;从脑水肿与肿瘤本身的体积之比估计脑水肿程度。结果　 3 5例脑膜瘤VEGF表达率 77% (2 7/3 5 ) ,4例可疑染色 ,其中恶性脑膜瘤和血管母细胞型脑膜瘤呈现高表达 (10 0 % ) ;VEGF表达与脑膜瘤血管生成 ,瘤周脑水肿呈显著正相关 (r =0 .682 3 ,P <0 .0 1;r =0 .765 3 ,P <0 .0 1)。结论　VEGF存在于脑膜瘤组织中 ,在脑膜瘤血管生成和瘤周水肿中发挥重要作用。     

晚期糖基化终末产物对人血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的研究晚期糖基化终末产物(AGEs)对人血管内皮细胞增殖及凋亡的影响,探讨糖尿病难愈创面新生血管化障碍或延迟的机理.方法不同作用时间及浓度AGE修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)与人血管内皮细胞(ECV304)在体外共同培养,用四唑盐(MTT)比色试验和细胞计数检测AGE-HSA对血管内皮细胞的增殖抑制作用,并用台盼蓝排斥试验检测细胞活力.采用FITC Annexin-V及碘化丙碇(PI)染色,用流式细胞仪检测凋亡细胞百分率,同时应用荧光共聚焦显微镜观察凋亡或死亡细胞FITC Annexin-V和PI的荧光染色,并用透射电镜和光镜观察凋亡细胞特异性的形态学改变.结果内皮细胞在12.5、25和50μg/ml AGE-HSA培养条件下,第2天细胞增殖数量与对照组比较无明显差异性,第4天和第6天则显著低于对照组(P＜0.01);而内皮细胞经100或200μg/ml AGE-HSA干预6h,MTT法测其OD值与对照组比较有明显差异(P＜0.01),同时内皮细胞出现特异性的凋亡形态学变化以及FITC Annexin-V阳性和/或PI阳性的细胞逐渐增多,且凋亡或死亡细胞数量随AGE-HSA作用时间及浓度的增加而增多.结论AGE-HSA能抑制内皮细胞增殖,并可以诱导其凋亡,而且与作用时间及浓度相关.提示AGEs可能是引起糖尿病难愈创面中新生血管化障碍或者延迟的机制之一.     

血管内皮细胞生长因子的研究及在组织修复中的应用

目的；综述血管内皮细胞生长因子（VEGF）的基础研究及其在组织修复中的应用。方法：广泛查阅有关VEGF的基础研究文献及其应用于组织修复实验的研究成果。结果：VEGF是对内皮细胞特异的有丝分裂原，也有提高血管通透性的作用，在缺氧条件下作用尤为显著。外源性给予VEGF蛋白或互补脱氧核糖核苷酸，可显著提高皮瓣的成活面积和生存力。结论：VEGF为组织修复重建领域提供了新的治疗性血管生成方法。     

大鼠淋巴管内皮细胞的原代培养及鉴定

恶性肿瘤淋巴结转移与血管内皮细胞生长因子（VEGF）-C／VEGFR-3信号调控通道的关系已在临床病理组织学上被证实，本实验旨在应用管内酶消化法进行大鼠的淋巴管内皮细胞的原代培养，观察它的形态和免疫组织化学特性。     

神经生长因子对人血管内皮细胞增殖作用的研究

目的:研究神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人血管内皮细胞(Human vascular endothelial cell,HEVC)增殖作用的影响。方法:将NGF作用于体外培养的HEVC304,利用酶联免疫反应检测其增殖率,利用免疫组织化学的方法检测对增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达和标记指数。结果:NGF作用组较对照组其细胞增殖率明显增加(P<0.001),NGF中和抗体组其细胞增殖率下降明显(P<0.05)。NGF作用组较对照组能明显增加HEVC对PCNA的表达和PCNA标记指数(P<0.05),NGF中和抗体组其PCNA表达和PCNA标记指数明显减少(P<0.05)。结论:NGF能明显促进HEVC的增殖。     

碘克沙醇对体外血管内皮细胞的影响

目的观察非离子型等渗对比剂碘克沙醇（威视派克）随浓度和时间变化对人血管内皮细胞的活力影响,探讨对比剂毒副作用发生的可能机制。方法人脐静脉血管内皮细胞株置于含不同浓度（4%、10%、20%）非离子型等渗对比剂碘克沙醇培养液中24、48、72 h后,通过噻唑蓝比色法检测细胞增殖活力,用Annexin V/PI双染色法进行细胞凋亡测定,观察不同条件下内皮细胞对对比剂的反应。结果碘克沙醇使血管内皮细胞吸光度下降（P〈0.01）;不同浓度影响不尽相同,而不同作用时间间差异无统计学意义（P〉0.05）。碘克沙醇使血管内皮细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）,不同浓度间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论体外培养环境下非离子型等渗对比剂碘克沙醇随浓度和时间变化会对内皮细胞产生活力影响,并诱导其凋亡。     

非离子型对比剂对人血管内皮细胞活力和凋亡影响的实验研究

目的观察不同浓度非离子型对比剂对人脐静脉血管内皮细胞活力的影响。方法采用MTT实验分析不同浓度非离子对比剂对脐静脉血管内皮细胞的作用,并通过测定细胞凋亡率,探讨对比剂影响细胞的方式及影响程度。结果各处理组内细胞凋亡均明显增高（P〈0.01）;对比剂浓度因素对血管内皮细胞活力影响显著（P〈0.01）。结论体外培养环境下非离子对比剂在一定浓度下会对血管内皮细胞造成活力影响并增加细胞凋亡率;但不同类型非离子型对比剂欧乃派克及威视派克对血管内皮细胞的影响无明显差别。     

大鼠脐血来源单个核细胞诱导为内皮祖细胞的免疫荧光检测

目的脐血（umbilical cord blood,UCB）中含有大量内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,内皮祖细胞（EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞,有分化为血管内皮细胞的能力,为骨组织工程血管化带来新的途径。本实验研究大鼠脐血来源的单个核细胞体外诱导为EPCs的可能性。方法分离大鼠脐血单个核细胞,血管内皮诱导液（添加10％胎牛血清,1％青霉素,1％链霉素,VEGF20ug／L,IGF-12ug／L,bFGF2ug／L,EGF20ug／L）培养分化,于3周、6周进行免疫荧光染色检测贴壁细胞CD34、CD133、Flk-1、vWF表面标志。结果培养三周单个核细胞CD34、CD133、Flk-1、vWF抗体免疫荧光检测均为阳性;六周免疫荧光染色可见CD34、Flk-1、VWF组为阳性,CD133组部分为阳性,阴性对照组未发现阳性细胞。结论大鼠脐血来源的单个核细胞在体外诱导3周可以分化为EPCs,6周部分细胞分化为成熟血管内皮细胞。     

负压创面疗法对Ⅲ/Ⅳ度烧伤患者外周血内皮祖细胞循环数量的影响研究

目的:探讨负压创面疗法(Negative pressure wound therapy,NPWT)对于Ⅲ/Ⅳ度烧伤患者外周血内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)循环数量的影响。方法:本研究纳入了2017年3月-2019年3月在笔者医院烧伤科接受治疗的Ⅲ/Ⅳ度烧伤患者130例,将患者随机分为观察组(n=65)和对照组(n=65),均接受常规治疗,观察组在此基础上接受NPWT治疗,疗程为1周,比较两组患者治疗前后的外周血EPCs数量,并分析影响其变化的因素。结果:治疗后,观察组的外周血EPCs数量明显增加[(85.3±18.1)×10^6 vs(34.1±12.5)×10^6],差异有统计学意义(P<0.05)。而对照组无明显变化[(45.2±19.4)×10^6 vs(34.7±16.8)×10^6],差异无统计学意义(P>0.05)。此外,观察组的治疗后外周血的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)水平和肉芽组织内的VEGF和基质细胞衍生因子-1α(Stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)均显著增加(P<0.05),而对照组没有明显变化(P>0.05)。相关性分析结果显示,外周血EPCs数量与外周血和肉芽组织内的VEGF和SDF-1α水平显著相关(P<0.05)。结论:NPWT可以增加Ⅲ/Ⅳ度烧伤患者外周血EPCs数量,其机制可能与全身性和局部性的VEGF和SDF-1α水平上调相关。     

基于创面新血管生成的郭氏苦柏方对肛瘘术后恢复的影响

目的:探讨基于创面新血管生成的郭氏苦柏方对肛瘘术后恢复的影响。方法:将106 例肛瘘患者随机分为观察组(54 例)和对照组(52 例)。所有患者均行肛瘘切除术,观察组术后用郭氏苦柏方熏洗坐浴,对照组用高锰酸钾外用片稀释后坐浴,观察两组术后第7、14、21 天的创面疼痛评分、愈合率、肉芽评分,术后第7、14 天显微镜下创面毛细血管含量、创面血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并评估肛门功能,观察治愈率及创面愈合时间。结果:观察组术后第7、14 天的疼痛VAS 评分分别为(2.78±0.49)分、(1.79±0.36)分,均低于对照组的(3.07±0.61)分和(2.01±0.41)分;观察组术后第7、14、21 天创面肉芽评分分别为(1.52±0.51)分、(0.98±0.44)分、(0.57±0.23)分,均低于对照组的(1.86±0.68)分、(1.25±0.46)分、(0.76±0.48)分;创面愈合率分别为(25.34±4.68)%、(60.21±7.92)%、(88.39±9.65)%,均高于对照组的(22.89±4.01)%、(54.91±8.33)%、(83.95±8.43)% ;观察组术后第7、14 天镜下创面毛细血管数量分别为32.78±8.72、97.04±11.58,高于对照组的27.69±7.37、89.54±7.03 ;观察组的VEGF阳性表达强度高于对照组(P <0.05);观察组总有效率与对照组相当;治愈患者中,观察组创面愈合时间为(24.72±3.89) d,少于对照组的(27.34±4.25) d。结论:郭氏苦柏方能减轻肛瘘患者术后疼痛,提高创面VEGF 的表达强度,增加创面毛细血管数量,从而加快肉芽生长,促进术后创面愈合,且无明显的不良反应。     

隧道式拖线法对瘘管大鼠Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响

目的：通过对体表瘘管大鼠模型隧道式拖线法治疗,研究在治疗不同时期Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量的变化。方法：采用免疫组化法在隧道式拖线法后第3、5、7、9、14 d和完全愈合时取大鼠局部组织进行Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量测定。结果：治疗组和对照组愈合时间分别为（16.25±1.96）d和（23.75±0.96）d,具有显著性差异。治疗组Ⅰ型胶原表达量在术后第9 d出现明显下降后逐级上升,在第14 d及愈合时治疗组高于对照组和空白组（P〈0.05）,而Ⅲ型胶原表达量在第9 d至第14 d上升,且高于对照组和空白组,具有显著性差异（P〈0.01）。结论：在隧道式拖线法后第9~14 d大鼠的Ⅰ/Ⅲ型胶原表达量比值升高,有助于创面愈合。     

医用伤口修复液对肛瘘术后创面修复的临床疗效

目的观察医用伤口修复液对肛瘘患者术后创面修复的临床疗效。方法将78例行手术治疗的肛瘘患者随机分为2组,试验组39例,予以医用伤口修复液纱条换药,1次/d,至创面愈合;对照组39例,予以无菌凡士林纱布换药,1次/d,至创面愈合。比较2组患者的创面渗液明显减少时间、出血情况,换药时创面疼痛评分及创面愈合时间。结果试验组的创面疼痛评分、创面渗液明显减少时间、创面愈合时间及发生创面出血的比例均短于或低于对照组,其差异均具有统计学意义（P〈0.05）。所有患者均未发生不良反应。结论医用伤口修复液对肛瘘患者术后创面修复具有较好的临床疗效。     

Decellularization and Recellularization of Rat Livers With Hepatocytes and Endothelial Progenitor Cells

Whole‐organ decellularization has been identified as a promising choice for tissue engineering. The aim of the present study was to engineer intact whole rat liver scaffolds and repopulate them with hepatocytes and endothelial progenitor cells (EPCs) in a bioreactor. Decellularized liver scaffolds were obtained by perfusing Triton X‐100 with ammonium hydroxide. The architecture and composition of the original extracellular matrix were preserved, as confirmed by morphologic, histological, and immunolabeling methods. To determine biocompatibility, the scaffold was embedded in the subcutaneous adipose layer of the back of a heterologous animal to observe the infiltration of inflammatory cells. Hepatocytes were reseeded using a parenchymal injection method and cultured by continuous perfusion. EPCs were reseeded using a portal vein infusion method. Morphologic and functional examination showed that the hepatocytes and EPCs grew well in the scaffold. The present study describes an effective method of decellularization and recellularization of rat livers, providing the foundation for liver engineering and the development of bioartificial livers.     

Improved Islet Survival and Funtion With Rat Endothelial Cells In Vitro Co-Culture

Objective

Pancreatic islet transplantation is an emerging therapy for type 1 diabetes. To preserve its function, transplanted islets must be revascularized because arterial and venous connections are disrupted during islet isolation. The current paradigm is that islet revascularization originates from the transplant recipient. This study was designed to test whether the function of isolated islets can be retained by co-culture with thoracic aorta endothelial cells in vitro.

Methods

Sprague-Dawley rats were used in this study. The endothelial cells (ECs) were isolated from the thoracic aorta. The viability of the isolated islets was assessed by acridine orange/propidium iodide (AO/PI) double staining. The islets were either placed in standard cultures (group A) or in co-cultures with ECs (group B). Islet viablity was assessed by an insulin release assay.

Results

The islets in group B exhibited normal morphology with >90% staining positive as detected by AO/PI with 7 days. Insulin release assays showed a significantly higher simulation index (SI) in group B compared with group A (P < .05) except on the first day.

Conclusion

This study suggested that co-cultrue of freshly isolated rat islets with ECs improves postculture survival and islet function in vitro.     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养方法和向血管内皮细胞分化的能力.方法:利用淋巴细胞分离液分离出MSCs,体外扩增,流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达,以含VEGF、bFGF的诱导分化培养液定向诱导传代使细胞向血管内皮细胞分化,流式细胞仪进行内皮细胞特异性标志物鉴定,测定内皮细胞NO的释放量,电镜观测W-P小体.结果:MSCs在体外传代扩增后流式细胞仪检测结果显示CD29表达阳性,CD34、CD45为阴性,分化后的细胞具有内皮细胞的形态学特征并具特异性W-P小体,可表达CD34,而不表达CD45,能释放NO.结论:骨髓间充质干细胞可在体外诱导向内皮细胞方向分化.     

辛伐他汀对骨髓源性内皮祖细胞动员及迁移的影响

目的研究辛伐他汀对兔内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）迁移、动员的影响。方法将2只兔从髂骨抽取骨髓,采用贴壁法,在条件培养基M199中培养EPCs,并用免疫荧光法鉴定CD34、CD133、VEGFR-2。经鉴定的EPCs,在不同浓度辛伐他汀（分别为0.01,0.1,1.0μmol/L）作用下,Transwell实验观察辛伐他汀对EPCs迁移的影响。6只兔随机分为实验组和对照组,每组3只。6只兔颅骨造极限骨缺损模型,实验组和对照组在颅骨缺损处分别植入辛伐他汀复合聚乳酸薄饼或聚乳酸薄饼,术后10天,取外周血,流式细胞仪检测CD34/CD133双阳性细胞表达率,观察辛伐他汀对EPCs动员的效果。结果Transwell实验,辛伐他汀作用于EPCs16小时,0.1μmol/L和1.0μmol/L辛伐他汀组细胞迁移数量OD值（0.097±0.011,0.099±0.019）较0.01μmol/L辛伐他汀组（0.075±0.013）与对照组（0.077±0.014）多,差异有显著性（P〈0.05）。造模术后10天,辛伐他汀组3只兔外周血中CD34^＋/CD133^＋细胞表达率为0.28%,0.84%,0.28%,对照组为0.26%,0.11%,0.09%。结论辛伐他汀可动员EPCs到外周血,可提高骨髓源性EPCs的迁移能力。