水疱性口炎病毒对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用的研究

目的研究水疱性口炎病毒(VSV)对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用。方法用0.1PFU/细胞的VSV分别感染胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 0.1PFU/细胞的VSV与上述3种细胞共同培养48h后,各细胞VSV的产量分别为HUVEC(3.10±0.32)×104、SGC-7901(5.61±0.44)×105、BGC-823(6.32±0.36)×105。MTT结果显示除脐静脉内皮细胞外,其他细胞被大量杀死;TUNEL凋亡检测结果显示胃癌细胞部分凋亡,脐静脉内皮细胞则很少凋亡。结论 VSV对上述胃癌细胞有选择性感染和杀伤作用,能够诱导这些细胞凋亡,对正常细胞则影响不大。     

苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用

目的 研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制。方法 用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用。结果 随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P<0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感。透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡。结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关。     

苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用

目的研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制.方法用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72 h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用.结果随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P＜0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感.透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡.结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关.     

慢病毒介导的双自杀基因对胃癌细胞的杀伤作用

目的探讨慢病毒介导胞嘧啶脱氨酶(CD)和胸苷激酶(TK)融合双自杀基因系统对胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用。方法用重组慢病毒FGW-KDRP-CD/TK体外感染胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜观察其感染效率,Giemsa染色法观察转基因的胃癌细胞形态学变化;用流式细胞术观察细胞周期的变化。RT-PCR法检测受感染细胞CD/TK基因的表达。然后加用前药更昔洛韦(GCV)和/或5-氟胞嘧啶(5-FC)用MTT法检测该体系对胃癌细胞的杀伤作用。结果慢病毒的感染率随病毒滴度的增高而递增。Giemsa染色法显示慢病毒载体对体外培养的胃癌细胞形态无明显影响。流式细胞仪检测慢病毒感染胃癌细胞前后,处于G0-G1,G2-M,S期的细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。经RT-PCR检测发现转基因细胞有目的基因的表达。MTT法检测显示前药GCV和5-FC在一定浓度搭配范围内呈剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,未转染慢病毒的细胞对前药不敏感;联合两种前药对SGC-7901的疗效优于任一单用前药(P<0.05)。联合用药[(0.1+40)、(1+80)、(10+160)、(100+320)]mg/L具有协同作...     

胞嘧啶脱氨酶基因对胃癌细胞的杀伤作用

目的：探讨胞嘧啶脱氨酶基因对胃癌细胞的杀伤作用。方法：应用胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因,通过逆转录病毒载体转入人胃癌细胞Ｍ８５中,经０．４ ｍ ｇ／ｍ ｌ的Ｇ４１８筛选阳性克隆的Ｍ８５细胞产生杀伤作用同时,还对与其共培养的亲代Ｍ８５细胞产生明显的杀伤作用,即“旁观者效应”。进一步将转基因Ｍ８５细胞和未转基因Ｍ８５细胞接种至裸鼠皮下,发现两者成瘤性无明显差异;前药５－ＦＣ对未转基因肿瘤的生长无影响,而对转基因肿瘤的生长明显抑制。结论：本研究为ＣＤ基因治疗胃癌向临床过渡提供了依据。     

人LAK细胞对胃癌细胞的杀伤作用

用人重组白细胞介素—２（ｒＩＬ－２）体外激活健康献血员外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），使之形成淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞，借助中性红摄入法，研究了ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的杀伤作用机制。结果表明：①ＬＡＫ细胞对胃癌细胞具有明显杀伤作用，诱导４天后其活性达峰值；②ＩＬ一２对已诱导的ＬＡＫ细胞杀伤胃癌细胞活性无协同作用；③ＬＡＫ细胞上清液有明显杀瘤活性物质，而ｒＩＬ一２对胃癌细胞无明显毒性作用。提示在ＬＡＫ细胞诱导过程中，淋巴细胞可能自身分泌一些细胞毒因子。     

细小病毒H－1对肿瘤细胞株的杀伤研究

本文利用细胞集落形成测定细胞存活率的方法，检测了仓鼠细小病毒（ＰＶＨ－１）对２株不同分化程度的胃癌细胞的抑制作用。同时收集感染后４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ、１４４ｈ的胃癌细胞，利用电镜观察胃癌细胞的变化。结果表明，ＰＶＨ－１能抑制不同分化程度的胃癌细胞株，其敏感性与胃癌细胞的分化程度有关。     

人体恶性肿瘤内淋巴细胞对癌细胞杀伤作用的研究

［９３０９］人体恶性肿瘤内淋巴细胞对癌细胞杀伤作用的研究成果完成单位华西医科大学附一院主研人员杭振镳魏于全王远萍李光蓉文彬主持鉴定单位四川省卫生厅鉴定日期１９９３年４月获奖情况获１９９３年度四川省科技进步奖三等奖成果简介用电子显微镜观察人体恶性肿瘤细...     

三氧化二砷对胃癌细胞作用的实验研究

为研究三氧化二砷(As_2O_3)对胃痛细胞生长及凋亡的影响,通过MTT、流式细胞仪测定、吖啶橙染色、DNA琼脂糖电泳等方法在体外观察As_2O_3对胃癌细胞株MKN28和KATOⅢ的作用。结果发现As_2O_3对两株细胞均有明显的生长抑制和凋亡诱导作用并有细胞周期特异性,与As_2O_3的作用时间成正比。提示As_2O_3对胃癌细胞的生长抑制作用通过诱导细胞凋亡而发生。     

川芎嗪及联用化疗药物对胃癌细胞杀伤作用的研究

川芎嗪是从中药川芎中提取的生物碱———四甲基吡嗪（Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ,ＴＭＰ）,它具有降压、扩张血管、溶栓作用而广泛用于心脑血管病变。近年发现川芎嗪具有钙离子阻滞作用,而钙离子阻滞剂多有化疗增敏,逆转肿瘤细胞多药耐药作用。基于此我...     

大蒜素协同紫杉醇对肺癌细胞杀伤作用的实验研究

目的探讨大蒜素对人肺癌A549细胞周期的影响及其与周期特异性抗癌药物紫杉醇联合使用的抗肿瘤作用。方法MTT法检测大蒜素对肺癌细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期改变,Annexin V-FITC标记法定量检测细胞凋亡,观察大蒜素与紫杉醇联合使用后药物对细胞毒活性的改变。结果大蒜素可明显抑制A549细胞生长,72h药物半数抑制浓度(IC50)为18.55μg.ml-1;9.30μg.ml-1大蒜素作用A549细胞24 h后,与对照组比较,G0/G1期细胞的百分率明显减少,而G2/M期明显增加(P<0.05),大蒜素与紫杉醇联合使用后,紫杉醇72 hIC50值由单独应用的9.21μg.ml-1下降至1.07μg.ml-1;细胞凋亡率由53.2%增至97.0%。结论大蒜素可将肺癌A549细胞阻滞于G2/M期,大蒜素与紫杉醇联合使用可能具有协同抗肿瘤作用。     

Cbl-b-SiRNA转染淋巴细胞免疫杀伤MFC胃癌细胞的实验研究

目的探讨cbl-b(Casitas B cell lymphoma-b)特异性小干扰RNA转染小鼠淋巴细胞后,能否增强其对MFC胃癌细胞的主动免疫杀伤作用。方法设计筛选cbl-b-SiRNA,小鼠脾脏淋巴细胞体外培养扩增,以脂质体为载体将cbl-b-SiRNA导入淋巴细胞,Real time PCR验证对cbl-b mRNA的表达抑制效率,用CCK-8试剂盒检测转染后的淋巴细胞对MFC胃癌细胞的杀伤作用。结果 cbl-b-SiRNA转染的淋巴细胞较未转染淋巴细胞,对MFC胃癌细胞的杀伤作用明显增强,高达(74.09±1.77)%。其中混合培养48 h的淋巴细胞杀伤率较72h增强。结论通过脂质体法可高效率将cbl-b-SiRNA转入淋巴细胞,且转染后的淋巴细胞对MFC胃癌细胞的主动免疫杀伤作用明显增强。     

大鼠细小病毒H-1株培养方法的建立

目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系(Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞( primary rat embryo cells,RE)培养大鼠细小病毒(Toolan virus,H-1)的方法.方法 将0.8mLH-1病毒接种C6细胞(75T培养瓶,细胞接种量为2×105/mL,培养过夜),待细胞病变CPE达++～+++时,用免疫荧光(FITC)鉴定所培养病毒的抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,用96孔板培养法测定H-1病毒的TCID50.结果H-1在接种到C6细胞的第3～4天,细胞发生明显的病变,CPE可达++++,FITC鉴定呈H-1抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1:320.测序结果表明:该病毒序列与NCBI中H-1序列同源性达99％,确定为H-1病毒.收获的H-1的TCID50为103.2/0.1 mL.结论用大鼠胶质瘤细胞系(C6)可以替代大鼠原代胚细胞(RE)进行大鼠细小病毒的培养.     

溶瘤病毒dl1520体外对肝癌细胞杀伤作用的研究

目的:探讨E1B缺陷溶瘤腺病毒dl1520体外对肝癌细胞Hep3B的杀伤作用。方法:通过细胞病变效应(CPE)观察d l1520对肝癌细胞株的杀伤作用;MTT法测定对肝癌细胞生长抑制作用,并通过空斑法测定病毒增殖,探讨其杀伤机理。结果:d l1520在肝癌细胞株Hep3B中可复制增殖并导致明显细胞病变效应,显著抑制癌细胞的生长。结论:d l1520体外可在肝癌细胞Hep3B中复制并裂解杀伤肿瘤细胞。     

扩增的NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：探讨扩增的自然杀伤（NK）细胞对胃癌细胞的杀伤作用,阐明其作用机制。方法：提取和分离15例胃癌患者外周血单个核细胞（PBMCs）。观察扩增前后NK细胞形态表现,检测扩增前后NK细胞百分比,计算扩增后NK细胞扩增倍数,检测扩增前后NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1以及抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1的表达百分比。结果：扩增前NK细胞呈圆形,细胞体积比较小,细胞呈散在分布,扩增后NK细胞体积明显增大,细胞呈不规则形态。扩增后NK细胞百分比明显高于扩增前（P<0.01）,扩增后NK细胞数是扩增前的（596±152）倍。在效靶比为5∶1时,扩增后NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性明显强于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1表达百分比明显高于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1表达百分比明显低于扩增前（P<0.05）。结论：扩增后NK细胞对胃癌细胞杀伤作用明显强于扩增前,其机制可能与扩增后NK细胞表面活化性受体表达升高和抑制性受体表达降低有关联。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌细胞杀伤作用研究

目的检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌细胞的杀伤作用及其受体在胃癌细胞中的表达情况,评估TRAIL信号在胃癌治疗中的可行性。方法研究选取11株胃癌细胞进行实验,采用实时荧光定量PCR方法检测胃癌细胞中TRAIL相关受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)mRNA表达。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测TRAIL抑制胃癌细胞生长,Annexin V/PI双染色法测定TRAIL诱导细胞凋亡,Western blot检测TRAIL介导Caspase裂解。结果死亡受体DR4、DR5在11株胃癌细胞内普遍高表达,表达水平显著高于诱骗受体DcR1、DcR2。TRAIL对9株胃癌细胞有不同程度的生长抑制作用,SNU-16、NUGC3、NCI-N87和SNU-1灵敏度最高,抑制作用呈时间和剂量依赖性。TRAIL通过诱导细胞凋亡发挥肿瘤杀伤作用,低浓度TRAIL(200 ng/ml)作用24 h后50%以上细胞发生凋亡。Caspase-3、-8、-9和PARP的裂解水平与凋亡程度相关。结论 TRAIL对胃癌细胞具有不同程度的生长抑制和凋亡诱导作用,在胃癌中...