人β-防御素-2基因治疗大鼠泌尿系感染的实验研究

目的 观察基因重组人β-防御素-2( human beta-defensin-2,hBD2)对大鼠模型大肠埃希菌致泌尿系感染的保护作用. 方法 健康成年雌性SPF级Wistar大鼠56只,随机分为hBD2组与对照组,hBD2组大鼠经逆行膀胱灌注给予脂质体包裹的hBD2重组真核表达载体(pCAGG-hBD2)250μl,对照组同法给予等量空载体(pCAGG),48 h后2组大鼠均膀胱灌注1×108CFU/ml UTI89 200μl,制备大肠埃希菌泌尿系感染大鼠模型,分别于不同时间点处死大鼠获取膀胱组织及尿液进行菌落计数、尿液白细胞计数,观察膀胱组织病理学变化并进行炎症评分. 结果 在感染后24、48、72 h,hBD2组大鼠尿液UTI89菌落计数分别为(6.43±1.04)、(5.66±0.68)、(1.55±1.17) Log10 CFU/ml;膀胱组织UTI89菌落计数分别为(6.07±0.52)、(5.17±1.21)、(1.18±0.84) Log10 CFU/g;尿白细胞计数分别为(25.1±2.9)、(16.4±7.1)、(11.0±3.0)×104 cells/ml;膀胱组织炎症评分(2.21±0.45)、(1.30±0.40)、(1.28±0.28).对照组大鼠尿液UTI89菌落计数分别为(8.85±0.79)、(8.07±1.30)、(7.93±2.89) Log10 CFU/ml;膀胱组织UTI89菌落计数分别为(7.82±1.29)、(7.99±1.71)、(6.73±1.59) Log10 CFU/g;尿白细胞计数分别为(168.0±14.9)、(234.5 ±31.3)、(270.0±22.1)×104 cells/ml;膀胱组织炎症评分(3.30±0.41)、(4.13±0.13)、(4.72±0.24).hBD2组大鼠感染后24,48和72 h尿液及膀胱组织中大肠杆菌菌落计数、尿白细胞计数及组织炎症评分均显著低于对照组,组间差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 基因重组hBD2对大肠埃希菌致泌尿系感染有显著的预防及治疗作用,可能与其杀菌作用和抑制炎症反应有关.     

α-防御素基因和β-防御素基因在外周血白细胞中的不同表达

目的 观察健康人外周血白细胞中α-防御素和β-防御素基因表达的阳性率及外周血白细胞中α-防御素和β-防御素两大家族基因表达的特征，探讨其在感染免疫中的作用。方法51名献血员被随机纳入研究中，在体外用100ng／ml内毒素刺激其外周血白细胞，采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定O、1、3、6、12、24h时白细胞防御素信使RNA(mRNA)的水平，DNA印迹分析和序列测定法证实核苷酸扩增产物的特异性。结果 在无刺激时，所有研究对象的外周血白细胞均检测到α-防御素1-3mRNA的转录，而无阻防御素mRNA的转录。内毒素刺激3h后，88．2％研究对象的外周血可检测到β-防御素1 mRNA的转录，39．2％β-防御素2mRNA表达阳性，并于刺激6h时β-防御素1和2mRNA水平达到峰值，而α-防御素1-3mRNA的水平并无显著性改变。α-防御素1-3基因在外周血白细胞中呈持续性表达。而β防御素1-2呈可诱导性表达，β防御素1和2基因的可诱导性表达存在个体间差异。结论 α-防御素和阻防御素的不同表达特征与其基因调控顺式作用成分不同有关，提示两大类防御素在感染免疫中具有不同的作用。     

人β-防御素-2基因预防感染性结石的实验研究

目的:通过对膀胱感染性结石大鼠膀胱灌注脂质体包裹的人β-防御素-2重组真核表达载体(pCAGG-hBD2),观察人β-防御素-2(hBD2)基因对感染性结石的预防作用。方法:选择健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为实验组与对照组。实验组膀胱灌注pCAGG-hBD2 250μl,对照组经同法给予等量空载体(pCAGG)。2天后,两组均随机处死3只大鼠,利用小动物成像仪观察重组hBD2在SD大鼠膀胱黏膜的表达;转染成功后,两组均膀胱内置入含菌(奇异变形杆菌)聚乙烯管异物,分别于24、48、72小时收集尿液,进行尿液菌落计数、白细胞计数。30天处死全部大鼠获取膀胱组织,观察结石的形成情况及膀胱组织病理学变化。结果:实验组大鼠置入含菌(奇异变形杆菌)聚乙烯管异物24、48、72小时后,尿液中奇异变形杆菌菌落总数、尿白细胞计数均显著低于对照组,组间比较差异均有统计学意义(P0.001);实验组和对照组不同时间大鼠尿液中奇异变形杆菌菌落总数及尿白细胞计数差异有统计学意义。对照组大鼠的尿路组织主要表现为肾输尿管膀胱的炎症改变,膀胱内有感染性结石的形成;实验组大鼠的尿路组织病理学无明显变化,膀胱内无结石生成。结论:重组hBD2基因对奇异变形杆菌致泌尿系感染性结石有预防作用。     

上皮组织抗菌肽--β-防御素

新近发现的β-防御素(HBD)家族,广泛存在于皮肤和粘膜上皮组织中,其功能的失活与病源微生物定植、集落于皮肤和粘膜上皮而导致严重感染关系密切。目前已发现3种HBD:HBD-1、HBD-2和HBD-3。HBD家族具有广谱高效抗菌作用,迄今尚未发现有致病菌株对其有耐药性。     

重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。 方法10只清洁级雄性成年SD大鼠,随机分为防御素组和对照组,每组5只。防御素组大鼠暴露声 门后,气管内滴注5×107PFU／ml重组腺病毒(含有β-防御素-2编码基因)50μl,对照组给予等量对照腺 病毒(不含β-防御素-2编码基因)。48 h后两组气管内滴注6×108CFU／ml绿脓杆菌ATCC27853 200μl, 制备绿脓杆菌感染致ALI模型。气管内滴注绿脓杆菌24 h后处死大鼠,采集肺泡灌洗液,进行绿脓杆 菌菌落数和白细胞计数;观察肺组织病理学变化,并测定肺组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达水 平。结果与对照组比较,防御素组BALF中绿脓杆菌菌落数、白细胞计数、肺组织ICAM-1表达水平 及肺病理组织学评分降低(P<0．05)。结论重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠ALI有一 定的保护作用,可能与其杀菌作用和下调肺组织ICAM-1的表达有关。     

β-防御素上皮组织天然的化学防御屏障

产生抗微生物肽 (antimicrobial peptide)是真核生物宿主防御的一个重要途径。防御素(defensins)是重要的一类抗微生物肽 ,包括四个亚家族 ,即植物防御素、昆虫防御素、α-防御素和β-防御素。其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织 ,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障 ,在组织烧伤等创伤感染中发挥重要作用。本文主要对β-防御素的结构、功能、分布和作为抗生素肽的应用前景进行综述     

吸入高浓度氧对大鼠肺组织β-防御素-2 mRNA表达的影响

目的 探讨吸入高浓度氧对大鼠肺组织β-防御素-2 mRNA(BD-2 mRNA)表达的影响.方法 出生21 d的雄性SD大鼠40只,体重50～60 g,随机分为5组(n=8):对照组(C组)吸入空气72 h;高浓度氧气组(H1组～H4组)分别吸入92%～94%氧气12、24、48和72 h.于吸入空气或氧气结束时取大鼠肺组织,计算湿/干重(W/D)比,观察肺组织病理学结果,行病理学评分;采用荧光定量PCR法和Western b1ot法分别检测肺组织BD-2 mRNA及总NF-κB p65和细胞核NF-κB p65的表达水平,计算NF-κB的活化水平.结果 与C组比较,H3组和H4组肺组织W/D比升高,H1组～H4组病理学评分升高,肺组织BD-2 mRNA表达下调,NF-κB活化水平升高(P＜0.05);H1组～H4组肺组织W/D比、病理学评分逐渐升高,BD-2 mRNA表达逐渐下调,H1组～H3组肺组织NF-κB活化水平逐渐升高,H4组肺组织NF-κB活化水平低于H3组(P＜0.05).结论 吸入高浓度氧可通过下调大鼠肺组织BD-2 mRNA的表达,导致肺损伤,该作用可能与NF-κB信号转导通路无关.     

β-防御素-2在不同通气方式的机械通气相关性肺炎中的表达

目的：观察两种通气模式的大鼠机械通气相关性肺炎（VAP）模型中肺组织β－防御素－2的基因和蛋白质表达水平。方法：48只健康清洁级雄性SD大鼠被随机分成GMV组和PHY＋PEEP组。每只大鼠机械通气24h后，从气管导管中注入铜绿假单胞菌0.2ml复制VAP模型。采用RTRNA和Western blot技术测定实验RBD－2 mRNA和蛋白质表达的变化。结果：GMV组重度肺组织病理变化明显高于PHY＋PEEP组：GMV组中RBD－2基因和蛋白质的表达上调的水平在3h后时段显著低于PHY＋PEEP组（P＜0．05。结论：允许性高碳酸血症加最佳PEEP通气模式对肺Ⅱ型细胞β－防御素－2 mRNA和蛋白表达上调水平的影响小，能预防和减缓机械通气相关性肺炎的发生发展。     

急性肺损伤对肺组织β-防御素-2基因表达的影响

目的 研究急性肺损伤（ALI）对肺组织β-防御素-2基因表达的影响。方法 将60只雄性健康SD大鼠随机分成两组:对照组和急性肺损伤组,每组30只。5％苯巴比妥钠 120mg/kg腹腔注射麻醉,以LPS 200 μg/kg尾静脉注射复制急性肺损伤模型;对照组用等量生理盐水（NS）尾静脉注射。于尾静脉注射LPS或NS后0h、6h、12h、1d、3d、5d时杀死大鼠,剖胸取出肺组织。采用Trizol一步法提取肺组织总RNA,以GAPDH为内参,半定量RT-PCR检测肺组织β-防御素-2基因的表达水平,双脱氧末端终止法测序鉴定PCR产物的特异性。结果 对照组0h时肺组织中β-防御素-2基因表达水平为 0.77± 0.14,各时间点肺组织中β-防御素-2基因表达水平无显著性变化（P>0.05）。ALI组6h时肺组织β-防御素-2基因的表达水平与对照组相比无显著性差异（P>0.05）,而12h、1d、3d、5d时显著增高（P<0.05）。结论 β-防御素-2基因在大鼠肺组织中有组成型表达,ALI上调肺组织中β防御素-2基因的表达。β-防御素-2基因的诱导性表达可能与ALI的发生发展有关。     

β防御素2与小鼠急性尿路感染的相关性

本文研究β防御素2(BD-2)与急性尿路感染的相关性。将18只BALB/c小鼠随机分为3组:正常组、尿路感染(UTI)模型组和阴性对照组,每组6只。正常组不做任何处理,UTI模型组采用大肠杆菌行UTI模型制备,阴性对照组采用等量的无菌0.9%氯化钠代替菌液。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测3组小鼠血液、尿液的BD-2浓度。HE染色观察3组小鼠泌尿系统(肾脏、膀胱和输尿管)的病理学炎症改变。实时定量PCR、免疫组化法评价BD-2在3组小鼠泌尿系统的表达。研究结果显示,UTI模型组小鼠的血液和尿液BD-2浓度明显高于正常组或阴性对照组(均P<0.05)。UTI模型小鼠的肾脏和膀胱炎症评分均要高于正常组(均P<0.05),而3组小鼠输尿管的炎症评分差异无统计学意义。3组小鼠BD-2 mRNA在泌尿系统的表达差异无统计学意义。BD-2蛋白在UTI模型小鼠肾脏和膀胱的表达均高于正常组或阴性对照组(均P<0.05),而3组输尿管中的BD-2表达差异无统计学意义。作者认为,急性UTI时小鼠血液和尿液中BD-2浓度明显升高,小鼠泌尿系统组织(肾脏、膀胱)中BD-2蛋白表达上升,预示BD-2可能参与了急性UTI的发病。     

大鼠肠缺血再灌注时肺组织β-防御素-2 mRNA表达的变化

目的 观察大鼠肠缺血再灌注时肺组织β-防御素-2(BD-2)mRNA表达的变化.方法 72只雄性SD大鼠随机分为2组(n=36):假手术组(S组)和肠缺血再灌注组(II/R组).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制备肠缺血再灌注模型.II/R组阻断SMA 1 h后再灌注,S组仅分离SMA.分别于再灌注即刻(T0),再灌注15(T1)、30(T2)、60 min(T3)、3 h(T4)和6 h(T5)时处死6只大鼠,取肺组织,光镜下观察肺组织病理学结果,计算肺通透性指数(PPI),检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和BD-2 mRNA表达水平.结果 S组肺组织结构未见异常,II/R组出现肺水肿和中性粒细胞浸润.与S组比较,II/R组再灌注各时点PPI升高,BD-2 mRNA表达上调,T0-3时TNF-a含量升高(P＜0.05或0.01).II/R组BD-2 mRNA表达水平与TNF-a含量及PPI的相关系数分别为0.823和-0.615(P＜0.01).结论 大鼠肠缺血再灌注时肺组织BD-2基因表达上调.     

β-防御素--上皮组织天然的化学防御屏障(文献综述)

产生抗微生物肽(antimicrobial peptide)是真核生物宿主防御的一个重要途径.防御素(defensins)是重要的一类抗微生物肽,包括四个亚家族,即植物防御素、昆虫防御素、α-防御素和β-防御素.其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障,在组织烧伤等创伤感染中发挥重要作用.本文主要对β-防御素的结构、功能、分布和作为抗生素肽的应用前景进行综述.     

呼吸机相关性肺炎大鼠肺组织β-防御素-3的表达

目的 观察呼吸机相关性肺炎大鼠肺组织β-防御素-3(BD-3)的表达,探讨呼吸机相关性肺炎的发病机制.方法 清洁级雄性sD大鼠20只,体重240～290 g,随机分为2组(n=10):非呼吸机相关性肺炎组(N组)和呼吸机相关性肺炎组(V组).两组均经口气管插管,N组气管内注入1010> cfu/ml耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌液0.2 ml;V组机械通气4 h时气管内注入等容量耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌液,注入菌液后拔出气管导管.于注入菌液后48 h时处死大鼠,取肺组织,计算肺湿重占体重百分比,行肺组织肉眼下和镜下的病理学评分,测定肺组织细菌计数,记录菌血症的发生情况,免疫组化法测定肺组织BD-3的表达水平.结果 与N组比较,V组肺湿重占体重百分比、肺组织镜下病理学评分、肺组织细菌计数和菌血症发生率升高,肺组织BD-3表达下调(P<0.01).结论 大鼠呼吸机相关性肺炎的发病机制与肺组织BD-3的表达下调有关.     

α-防御素在关节假体周围感染诊断中的作用及应用前景

关节假体周围感染是关节置换术后灾难性的并发症。目前对于关节假体周围感染尚缺乏一种可靠、迅捷、高准确率的诊断方法。美国骨肌系统感染协会(Musculoskeletal Infection Society,MSIS)制定的关节假体周围感染诊断标准获得国内外学者的普遍认可,但其诊断指标相对复杂不便于临床应用。临床上常用血沉、血清CRP、IL-6、降钙素原等实验室指标辅助诊断关节假体周围感染,但这些指标的异常并不完全由关节假体周围感染引起,易受其他炎性因素影响。近年来,滑液生物标志物,尤其是滑液α-防御素对关节假体周围感染的诊断价值逐渐受到重视。本文综合分析目前关于滑液α-防御素的临床研究,就其在关节假体周围感染诊断中的研究现状及临床价值做一综述。     

防御素与肺炎症性疾病

防御素是富含半胱氨酸,带正电的小分子抗微生物肽,具有广谱的抗微生物活性,包括细菌,真菌和一些包膜病毒,在肺的固有免疫中起重要作用。防御素也可以起到趋化因子的作用,这突出了防御素在宿主免疫和炎症反应中的重要作用。防御素或组成性表达或被细菌和炎症介质所诱导。防御素功能的改变可能会导致疾病。     

IL-6在人胆管上皮细胞损伤修复中的作用

目的 探讨IL-6在人胆管上皮细胞(BECs)损伤修复中的作用机制.方法 IL-6按浓度分为5组:0 ng/L组,10 ng/L组,50 ng/L组,100 ng/L组,1000 ng/L组,将不同浓度的IL-6分别干预体外培养的BECs,并检测IL-6对转录激活子3(STAT3)磷酸化和三叶因子3(TFF3)表达的影响;将BECs分为未处理组、STAT3-RNAi组(细胞中转入STAT3 RNAi腺病毒)和Control-RNAi组(细胞中转入空RNAi腺病毒),检测行干扰后,IL-6对TFF3表达的影响;分别用未处理组、STAT3-RNAi组、Control-RNAi组BECs制备体外损伤模型,观察IL-6、TFF3对各组细胞的影响.两组数据间比较采用Student's t检验,多组间比较采用单因素方差或Sidak检验.结果 添加IL-6的50 ng/L组、100 ng/L组、1000 ng/L组磷酸化STAT3( p-STAT3)的表达水平分别为0.240±0.052、0.714 ±0.124、0.327± 0.069,明显强于0 ng/L组的0.033±0.011(q=5.246,17.260,7.451,P＜0.05).TFF3 mRNA及其蛋白表达水平随着IL-6浓度的增高而显著增加(q=12.045,9.889,P ＜0.05);IL-6浓度为1000 ng/L时,TFF3 mRNA及其蛋白表达有所回落.行干扰后,STAT3-RNAi组BECs TFF3蛋白表达水平为0.037±0.005,明显低于Control-RNAi组的0.267±0.038和未处理组的0.301 ±0.042(q=12.135,13.929,P＜0.05).体外损伤模型中,IL-6干预BECs 12 h后,STAT3-RNAi组BECs移行速度为(9.1±1.5)μm/h,慢于Control-RNAi组的(25.1±3.8)μm/h(q=7.737,P＜0.05);而STAT3-RNAi组中加入外源性人重组TFF31 g/L后,BECs移行速度为(39.2±4.7)μm/h,比Control-RNAi组显著提高(q=14.507,P＜0.05).结论 IL-6主要通过激活STAT3,继发上调TFF3表达,从而促进人胆管上皮细胞移行和损伤修复.     

人源性空回肠粘膜防御素-5基因的克隆

目的 克隆人防御素-5基因(HD-5 cDNA)，构建其真核表达质粒载体。方法 从人小肠粘膜中提取总RNA，并分离mRNA，经过逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出HD-5 cDNA，并将其插入经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的真核表达质粒载体pcDNA3．1( )中，构建重组质粒载体pcDNA3．1( )-HD5 cDNA。结果 经过限制性酶切鉴定和测序确定，HD-5 cDNA全长282bp，编码94个氨基酸，由编码信号肽、前片段和成熟肽的3部分序列组成。理论推导的氨基酸序列中，决定HD-5活性的6个半胱氨酸残基和2个保守的精氨酸残基处于正确的位置。结论 成功获得了HD-5 cDNA，构建了含HD-5 cDNA的真核表达质粒载体，为研究重组HD-5的抗菌功能奠定了基础．     

关节液α防御素-1检测在人工关节感染诊断中的应用价值

目的探讨关节液α防御素-1(AD-1)检测在人工关节感染(PJI)诊断中的应用价值。方法选取2013年3月至2015年10月福建省内多家三甲医院骨科45例需行人工关节翻修术患者,男性18例,女性27例,平均年龄(60±14)岁。根据美国肌肉骨骼感染学会(MSIS)诊断标准,纳入标准为全髋及全膝关节置换术后需要进行翻修手术及术后怀疑感染的患者等,排除标准为存在其他身体部位感染病灶等,分为感染组22例,非感染组23例。对45例患者进行关节腔穿刺抽取关节液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测关节液中AD-1的表达水平。通过受试者工作曲线特征(ROC)曲线计算AD-1、关节液白细胞计数(SF-WBC)、多核比(PMN%)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)的敏感性及特异性,χ~2检验计算细菌培养的敏感性及特异性。AD-1与各指标间的敏感性及特异性采用χ~2进行比较分析。结果 AD-1诊断PJI的敏感性为86.4%,特异性为91.2%,曲线下面积为0.95。45例患者合并有系统性炎症疾病的患者占31.1%,感染组抽取关节液前有使用过抗生素治疗的患者59%,但AD-1的表达水平并未受到这两项因素的影响。细菌培养、SF-WBC、PMN%、ESR、CRP的敏感性从80%到90.9%,特异性从56.5%到76%。AD-1诊断PJI的敏感性比细菌培养、PMN%、ESR、CRP高,比SF-WBC低;而AD-1诊断PJI的特异性高于各诊断指标。AD-1诊断PJI的特异性与PMN%、ESR、CRP比较差异有统计学意义(P0.05),而与细菌培养、SF-WBC比较差异无统计学意义(P0.05);AD-1诊断PJI的敏感性与细菌培养、SF-WBC、PMN%、ESR、CRP比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 AD-1诊断PJI具有较高的敏感性及特异性,可作为诊断PJI的一项潜在诊断指标。     

重组β-防御素-2预处理对急性肺损伤大鼠肺组织ICAM-1表达的影响

急性肺损伤(ALI)系创伤、感染等诱因触发的全身炎性反应综合征或代偿性抗炎反应综合征在肺组织的表现,脓毒症是其最主要的诱发因素。β-防御素-2不仅对多种病原     

实验性重症急性胰腺炎对SD大鼠小肠防御素-5基因表达的影响

目的检测实验性重症急性胰腺炎时,SD大鼠小肠防御素-5 mRNA表达的变化,从分子水平上探讨胰腺炎时肠黏膜屏障受损的机制。方法40只SD大鼠随机分成4组,每组10只。模型组(B～E组)改良Aho’s法造模,于造模后第12,24和36小时处死,正常对照组(A组)直接处死。取血送淀粉酶检查,胰腺送病理检查。用Quanty One软件分析PCR产物凝胶图像以检测各组防御素-5 mRNA的表达变化。结果改良Aho’s法导致了SD大鼠重症急性胰腺炎,12 h防御素-5 mRNA表达轻微下调,36 h下调最明显。结论防御素-5的获得性缺陷可能是胰腺炎时发生肠道细菌移位的重要原因之一。