Akt信号通路调控miR-193b抑制胃癌细胞增殖

目的研究胃癌相关miR-193b调控胃癌细胞增殖的功能作用,并通过研究其与Akt信号通路的关系探讨miR-193b的调控机制。方法在PTEN基因特异性敲除(PTEN~(-/-))小鼠胃癌组织中,Northern Blot法检测miR-193b的表达变化;在胃上皮正常细胞系GES-1和5种胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、N87、SNU-16中,Real-Time PCR和Western Blot分别检测miR-193b与p Akt、Akt的表达水平;激活或抑制胃癌细胞Akt信号通路,RealTime PCR检测miR-193b表达改变;在胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中过表达miR-193b,检测细胞的增殖变化。结果 miR-193b在Akt异常激活的小鼠胃癌组织中表达显著下调;胃癌细胞中Akt信号通路激活程度与miR-193b表达水平呈负相关,Akt信号通路抑制miR-193b表达;过表达miR-193b抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-193b抑制胃癌细胞增殖并受Akt信号通路负向调节,其表达下调可能参与Akt信号通路调控的细胞增殖与胃癌发生。     

AKIP1在胃癌中的临床意义及生物学功能

目的:研究A激酶相互作用蛋白1(A kinase-interacting protein 1,AKIP1)在胃癌组织中的表达水平及临床意义,并探讨AKIP1在胃癌中的生物学功能。方法:采用qRT-PCR检测AKIP1 mRNA在50例胃癌组织和其配对的癌旁组织中的表达水平,分析AKIP1 mRNA在胃癌组织中的表达水平与患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析AKIP1 mRNA表达对患者预后的影响。采用蛋白质印迹法检测4对新鲜胃癌组织和癌旁组织中AKIP1蛋白的表达。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测AKIP1 mRNA、蛋白质在胃癌细胞系SGC-7901,MKN-45,MGC-803和人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1中的表达;MGC-803经脂质体分别转染AKIP1 siRNA(si-AKIP1)和对照(si-NC)48 h后,采用MTS实验检测各组细胞增殖能力,采用Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,采用Transwell实验检测各组细胞转移能力。结果:qRT-PCR结果显示AKIP1 mRNA在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其高表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05),胃癌组织中AKIP1 mRNA表达高水平的患者生存期较短。蛋白质印迹法结果显示AKIP1蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织。AKIP1mRNA和蛋白在胃癌细胞系SGC-7901,MKN-45,MGC-803中的表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且在MGC-803细胞中的表达最高(P0.05);转染AKIP1 siRNA后,MGC-803细胞增殖、侵袭和转移能力均下降(P0.05)。结论:AKIP1在胃癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与TNM分期、淋巴结转移及不良预后相关,同时干扰AKIP1的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移。AKIP1可以作为胃癌患者预后分子标志物及潜在治疗靶点。     

脂多糖对胃癌细胞mir-146a-5p、mir-335-5p及TLR_(1～10)受体表达的影响

目的研究胃癌细胞在受到脂多糖干预后,TLR_(1~10)受体及上游调控分子mir-335-5p和mir-146a-5p的表达规律。方法 PCR Array筛选结合实时荧光定量PCR检测验证TLR_(1~10)mRNA在不同分化程度胃癌细胞中的表达;实时荧光定量PCR检测不同浓度的脂多糖(终浓度分别为0.1、1.0、10.0、100.0μg/mL)干预胃癌SGC-7901、BGC-823细胞和GES-1细胞12、24、48h后,mir-335-5p、mir-146a-5p及TLR_(1~10)的表达。结果实时荧光定量PCR检测验证表明,除TLR_1、TLR_3、TLR_5外,其余的Toll样受体mRNA在不同分化程度胃癌细胞中的表达相对于正常胃黏膜上皮GES-1细胞出现明显上调;不同浓度的脂多糖干预胃癌SGC-7901、BGC-823细胞和GES-1细胞12、24、48h后,相对于未干预胃癌细胞,mi-335-5p和mir-146a-5p的表达明显下调;在SGC-7901细胞中,除TLR_3、TLR_4外,其他TLR受体在不同浓度脂多糖干预后,均有不同程度的上调表达;在BGC-823细胞中,TLR_1、TLR_4、TLR_6受体仅在高浓度脂多糖干预时,上调表达,其他TLR受体在不同浓度脂多糖干预后,均有不同程度的上调表达;在GES-1细胞,所有TLR_(1~10)在不同浓度脂多糖干预后均有明显上调表达。结论脂多糖干预胃癌细胞,可诱导mir-335-5p、mir-146a-5p下调表达和Toll样受体mRNA上调表达,Toll样受体mRNA上调表达可能与mir-335-5p、mir-146a-5p下调有关。     

MicroRNA-1184在胃癌细胞中的表达及作用

摘要:目的探讨 MicroRNA-1184( miR-1184)在胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为中的作用。方法通过实时荧光定量 PCR检测胃癌组织及人胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-1184的表达水平;通过 CCK-8试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及细胞划痕试验检测胃癌细胞的增殖和迁移能力;通过流式细胞术检测胃癌细胞系的细胞周期及凋亡率的变化;通过Western blot 检测胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因试验检测miR-1184与异柠檬酸脱氢酶3(NAD+)a( IDH3A)的靶向关系。结果与胃癌旁组织及人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-1184在胃癌组织中呈低表达(t=2.54,P<0.05),且在胃癌细胞系BGC-823 和 MGC-803中呈低表达(t= 13.99,P<0.001;t= 14.85,P<0.01)。与对照组相比,转染miR-1184抑制剂可促进胃癌细胞的增殖(t=9.28, P<0.05)、迁移(t=9.24, P<0.001). EMT进程,G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡减少(t=6.57,P<0.01);转染 miR-1184模拟物可抑制胃癌细胞的增殖(t=7.34 ,P<0.001)、迁移(t=9.24,P<0.001)、EMT进程、G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡增加(t= 20.33 ,P<0.000 1) ;miR-1184可与IDH3A靶向结合,其抑制剂可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量增加(t=11.32 ,P<0.001),而其模拟物可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量减少(t=20.91,P<0.0001)。结论miR-1184 在胃癌组织和细胞系中呈低表达,可影响胃癌细胞增殖、迁移EMT进程、细胞周期G,/S期转换及细胞凋亡等生物学行为。     

转录因子7类似物2在胃癌中的表达及其与铂类药物耐药性的关系

目的研究转录因子7类似物2(TCF7L2)基因在胃癌中的表达情况及其与胃癌化疗耐药的关系。方法采用qRT-PCR方法检测15例胃癌及其癌旁组织中TCF7L2的mRNA量,western blot实验检测胃癌细胞株SGC-7901、HSC44、44AS3、N87、MKN45、MGC803与永生化正常胃黏膜上皮细胞GES-1中TCF7L2蛋白表达量。通过基因稳定转染技术构建高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株和SGC-7901/CON(对照组)细胞株,用细胞计数法分别检测两者对顺铂和卡铂的耐药情况。结果 TCF7L2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,在胃癌细胞株中的表达水平也明显高于对照细胞GES-1。高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株对顺铂与卡铂的耐受性明显强于对照细胞株。结论 TCF7L2基因表达与胃癌的发生发展有正相关关系;TCF7L2高表达可能是胃癌对铂类药物化疗耐受的原因之一。     

卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及作用

目的探讨在卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及其作用。方法采用MTT法分析卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910和ES-2对5种化疗药物的敏感性,确定其半数抑制浓度(IC_(50))值;用定量实时PCR(qRT-PCR)方法检测miR-193a-3p;转染miR-193a-3p mimic于最低表达miR-193a-3p的相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中,用qRT-PCR方法检测转染效率;用MTT方法在转染后相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中检测其对上述化疗药物敏感性的差异。结果在相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中miR-193a-3p的表达最低,而在相对多药最耐药的卵巢癌细胞系SKOV-3中miR-193a-3p的表达最高(P0.01);转染miR-193a-3p mimic于相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中后,使其增加对(紫杉醇,卡铂,多西他赛)化疗药物的耐受性(P0.01)。结论卵巢癌细胞多药耐药的调控中可能有miR-193a-3p的参与。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的　探讨下调微小核糖核酸（ miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法　实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测 miR-572,第 10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因 (phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶 2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（ HGC-27, AGS和 SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞 GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株 AGS细胞中加入 miR-572 inhibitor后, CCK8检测细胞活力; Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例; qPCR检测 miR-572, PTEN和 AKT2的表达量。结果　miR-572和 AKT2在胃癌细胞系 HGC-27（6.97±1.62,4.98±1.34）,AGS（7.21±1.32, 5.39±1.14）和 SGC-7901（5.97±1.44,4.02±1.02）中较正常胃黏膜上皮细胞 GES-1表达升高（ 1.00±0.24,1.00±0.21）, PTEN表达降低（ 0.49±0.16,0.39±0.11,0.54±0.33 vs 1.00±0.13）,差异均有统计学意义 (t=2.727~3.197,均 P＜ 0.05);与对照组比较,转染 miR-572 inhibitor后,miR-572和 AKT2在 AGS中表达下调 (P＜ 0.05),PTEN表达上调 (P＜ 0.05); CCK8实验结果显示转染 miR-572 inhibitor后,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞活力降低 (P＜ 0.05);Transwell实验发现,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞的侵袭和迁移能力降低 (P＜ 0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组相比 miR-572抑制剂组细胞的凋亡比例降低 (P＜ 0.05)。结论　下调 miR-572可抑制胃癌细胞的凋亡、侵袭和迁移,其机制可能是通过 PTEN/AKT2信号通路。     

SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其病理学意义

目的:研究胃癌中SLC7A5转录和表达的特点,探讨SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其在胃癌发生、发展中的临床意义。方法:应用免疫组化法检测52对临床采集的胃癌组织及相应的癌旁组织中SLC7A5的表达情况;分析4株胃癌细胞(SGC-7901、MKN-45、MGC-803和CRL-5974)中SLC7A5转录及表达水平与永生化胃黏膜细胞GES-1间的差异;结合临床病理指标,分析SLC7A5在胃癌组织中的表达水平与各项临床病理特征间的相关性;并应用pGU6/GFP/Neo/shRNA-SLC7A5质粒载体转染胃癌SGC-7901细胞,下调SLC7A5表达,通过CCK8检测及流式细胞术检测分析SLC7A5对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响。结果:SLC7A5在胃癌组织和细胞中的表达上调,且其表达水平与胃癌肿瘤的直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期进展显著相关;而下调胃癌SGC-7901细胞SLC7A5表达,可显著减弱胃癌细胞增殖能力,并将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:SLC7A5可促进胃癌细胞增殖,与其肿瘤直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征相关,可作为分子标志物评价胃癌的生物学行为,并可能成为胃癌诊断和防治中的新靶点。     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

cir-ITCH在胃癌患者肿瘤组织中的表达及临床应用

目的检测胃癌患者组织中circ RNA ITCH(cir-ITCH)表达情况并评估其在胃癌诊断中的应用价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测cir-ITCH在胃癌患者癌组织以及胃癌细胞系中的表达水平,分析cir-ITCH表达水平与胃癌患者临床病理参数的相关性。结果 cir-ITCH在胃癌细胞系SGC-7901(0.621±0.036)和MGC-803(0.118±0.003)中的表达水平明显低于胃黏膜上皮细胞GES-1(0.999±0.037),差异具有统计学意义(t分别为7.294和23.58,P均0.01)。88例胃癌患者癌组织中cir-ITCH的表达水平[0.635(0.137,1.506)]较癌旁组织[3.042(0.808,7.972)]明显下调(Z=-5.976,P0.01),且与TNM分期密切相关(r为0.137,P0.05)。结论 cir-ITCH在胃癌组织中表达下调,并与TNM分期密切相关,有望成为潜在的胃癌诊断新分子标志物。     

微小RNA-1291对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA-1291(miR-1291)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 通过公共数据库分析miR-1291在胃癌组织、正常胃组织中的表达。培养人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜上皮细胞GES-1,比较miR-1291表达水平。将miR-1291 mimic、miR-NC、miR-1291 inhibitor、miR inhibitor质粒分别转染至SGC-7901细胞,设为miR-1291组、miR-NC组、miR-1291 inhibitor组、miR inhibitor组。将BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI) mimic质粒、Vector质粒、sh-BAMBI质粒、sh-NC质粒分别转染至SGC-7901细胞中,设为BAMBI组、Vector组、sh-BAMBI组、sh-NC组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1291和BAMBI mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BAMBI、转化生长因子-β(TGF-β)...     

MiR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3在胃癌中的表达及其生物学功能

目的 采用生物信息学及分子生物学手段验证miR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3(STAT3)在胃癌中的表达及其生物学功能.方法 从30例胃癌患者中分离出胃癌组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(WB)法检测胃癌组织和非癌性胃组织中miR-125a-5p及STAT3的表达.细胞转染后,采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.采用Transwell迁移实验检测迁移细胞.通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-125a-5p与STAT3的靶向关系.通过体内裸鼠成瘤实验对miR-125a-5p的肿瘤抑制作用进行验证.结果 胃癌组织中miR-125a-5p表达较非癌性胃组织降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在胃癌细胞系中,与正常上皮细胞相比,miR-125a-5p的表达也下降,差异有统计学意义(P＜0.05).采用miR-125a-5p模拟物转染胃癌细胞,结果表明miR-125a-5p的过表达可以通过靶向作用STAT3抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.裸鼠成瘤实验证实miR-125a-5p过表达能够抑制肿瘤增殖并促进肿瘤细胞凋亡.结论 MiR-125a-5p能够通过抑制STAT3的表达发挥肿瘤抑制作用,这将为临床靶向治疗及早期生物标志物的选择提供可靠的理论依据.     

miR-1288调控骨髓间质干细胞促进胃癌细胞迁移

目的探讨miR-1288在胃癌细胞培养上清诱导后骨髓间质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMMSC)中的表达情况及其调控BMMSC对胃癌细胞迁移能力的影响。方法采用SGC-7901、MGC-803和HGC-27 3种胃癌细胞培养上清分别处理BMMSC,实时荧光定量PCR检测处理前后BMMSC中miR-1288的表达水平。采用寡核苷酸片段NC-mimics和miR-1288-mimics转染BMMSC,Transwell试验检测转染后BMMSC对HGC-27细胞迁移能力的影响。收集胃炎和胃癌组织标本,实时荧光定量PCR检测组织中miR-1288的表达水平。结果经SGC-7901、MGC-803和HGC-27胃癌细胞上清处理后BMMSC中miR-1288的表达水平分别是对照组的(5.91±0.25)倍(t=15.55,P0.01)、(9.69±0.62)倍(t=13.34,P0.01)和(24.29±2.69)倍(t=8.631,P0.01)。miR-1288-mimics转染组迁移细胞数量为(623.3±26.03)个,明显高于NCmimics对照组[(326±32.08)个],差异有统计学意义(t=7.197,P0.01)。胃癌组织中miR-1288的表达水平显著高于胃炎组织(P0.05)。结论胃癌上清诱导后BMMSC和胃癌组织中异常高表达miR-1288,其可参与调控胃癌细胞的迁移。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

胃癌外体（exosome）内miRNA-1的检测分析

目的检测胃癌细胞系来源外体(exosome)及其胃癌组织和血清中exosome内miRNA-1的表达水平并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR分别检测胃癌细胞系来源exosome、胃癌患者组织及血清exosome内miRNA-1的表达水平,分析其与临床资料相关性,并绘制ROC曲线进行效能分析。结果 miRNA-1在人胃癌细胞系MGC-803(6.51±0.41)和SGC-7901(14.81±1.30)中的含量明显高于胃上皮细胞系GES-1(1.05±0.25),差异有统计学意义(t分别为11.26、10.38,P均0.01);而MGC-803、SGC-7901细胞培养上清exosome内miRNA-1的表达水平(49.98±11.77和28.68±4.66)显著高于GES-1来源exosome(1.00±0.02)差异有统计学意义(t分别为4.162、5.942,P均0.01);25对胃癌组织标本中有18例癌组织miRNA-1表达上调,7例表达下调,胃癌组织[1.110(0.070,4.307)]平均表达水平高于癌旁组织[1.149(1.110,2.075)],差异有统计学意义(Z=-1.897,P0.05)。miRNA-1在胃癌患者血清exosome内的表达水平[4.130(0.151,12.720)]较体检健康者血清exosome内表达水平[0.704(0.077,7.243)]明显增高(Z=-2.407,P0.05),且与胃癌的淋巴结转移相关;胃癌患者血清exosome内miRNA-1的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.723 0,95%可信区间(CI)为0.627 0~0.818 7,cut off值为2.39,敏感性为66%,特异性为68%。结论胃癌组织及其胃癌患者血清来源exosome内富含miRNA-1,有望成为新的胃癌诊断标志物。     

miR-345在胃癌中的表达特点及其临床意义

目的探讨miR-345在胃癌中的表达特点及其临床意义。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测人胃黏膜上皮细胞GES-1、3株胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、MKN45)及48例配对的胃癌与癌旁组织中miR-345的表达水平,并对miR-345表达水平与患者临床病理特征、生存预后的关系进行相关性分析,最后通过PicTar和TargetScan软件预测miR-345潜在的重要靶基因。结果与正常组织比较,胃癌细胞系及胃癌组织中miR-345表达明显升高(P<0.05);miR-345的表达与胃癌的分化程度(P=0.005),TNM分期(P=0.003),原发肿瘤的浸润深度(P<0.001)和淋巴结转移(P<0.001)密切相关;过度表达的miR-345预示胃癌患者的术后生存期更短;miR-345潜在的重要靶基因为CDKN1A、BBC3和RUNX3。结论 miR-345与胃癌的发生、发展密切相关,可能成为胃癌诊治和评估预后的潜在生物学指标。     

腺苷对人胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响

目的观察腺苷(adenosine)对人胃癌MGC-803细胞的增殖、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度腺苷(0.01~10 mmol/L)对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。流式细胞仪检测腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)对细胞凋亡的影响。Western blot检测腺苷处理后细胞内凋亡相关蛋白和内质网应激相关蛋白的表达量。结果腺苷能抑制胃癌MGC-803细胞的活力,并且呈现浓度和时间依赖性(P0.05)。腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h后,细胞的总凋亡率显著升高(P0.01)。腺苷可以引起凋亡相关蛋白Caspase-3活化片段的蛋白表达量上调(P0.01)。腺苷能诱导内质网应激(ERS)相关蛋白Caspase-4活化片段、p-JNK、CHOP、GRP78的表达量上调(P0.05)。结论腺苷可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,并且促进凋亡,而内质网应激可能参与了腺苷引起的凋亡。     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。