幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因芯片的制备和应用

目的 建立一种寡核苷酸微阵列检测幽门螺杆菌23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T点突变的方法.方法 根据23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T突变位点设计相应探针,样本经不对称PCR扩增后,其产物与芯片杂交.非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体,测序验证芯片结果,并结合临床最低抑菌浓度实验判断该方法的正确性.结果 寡核苷酸微阵列技术与测序检测幽门螺杆菌23S rRNA基因多态性结果完全一致.经培养及鉴定幽门螺杆菌阳性的54份标本,杂交结果显示A2142位点均为野生型(54/54);A2143G突变率为11.11%(6/54),尚未发现A2143C和A2143T的突变;C2182T突变率为12.96%(7/54),尚未发现C2182A和C2182G的突变,其余均为野生型,上述结果与菌株体外试验MIC结果完全一致.结论 建立一种寡核苷酸微阵列技术检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性的方法,可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养,推动个体化治疗方案的实施.     

舟山群岛渔民幽门螺杆菌克拉霉素耐药菌株23S rRNA全基因生物信息学研究

目的:通过对舟山群岛渔民胃镜检查患者分离胃黏膜幽门螺杆菌(Hp),对Hp克拉霉素的耐药情况和耐药基因进行研究,指导合理使用克拉霉素治疗Hp。方法:取188份胃镜活检标本,Hp培养后对188株Hp临床分离株采用E-test法行克拉霉素药敏试验。对17株克拉霉素耐药和3株敏感的Hp23SrRNA全基因序列和3株标准序列进行比对和生物信息学分析。结果:胃炎患者Hp培养阳性率为26.5%(27/102),溃疡患者培养阳性率为48.7%(38/78),胃癌患者培养阳性率为25.0%(2/8),溃疡患者Hp培养阳性率明显高于胃炎患者和胃癌患者。67例Hp菌株克拉霉素耐药23株,占34.3%(23/67),敏感株44株,占65.7%(44/67)。胃炎患者、溃疡患者和胃癌患者克拉霉素耐药率分别为29.6%(8/27)、36.8%(14/38)和50.0%(1/2)。17株克拉霉素耐药Hp菌株2143位点A>G突变率为29.4%,2182位点C>T突变率为11.8%;新的突变点C588U在6株耐药株中出现,而且该6株菌未见其他已知突变。结论:舟山群岛渔民溃疡患者Hp培养阳性率和克拉霉素耐药率明显高于胃炎患者。本地区分离的克拉...     

幽门螺杆菌对左氧氟沙星、克拉霉素耐药性及基因突变分析

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)对左氧氟沙星、克拉霉素的耐药表型及与耐药相关基因突变(基因型)的相关性,为临床制定Hp个体化根除治疗方案提供实验依据。方法 分别选择2021年6月至12月和2018年8月至2019年3月在南京医科大学附属南京医院就诊的未经治疗的292例和350例Hp阳性患者的胃黏膜组织进行分离培养,用E-test药敏试验法检测左氧氟沙星、克拉霉素的耐药性,用卡方检验分析不同性别、年龄患者耐药表型的差异;用基因测序方法检测耐药相关基因型,并分析与耐药表型的一致性。结果 在左氧氟沙星耐药性研究的292例病例中,有120例(41.10%)表型耐药,不同性别(P=0.031)、年龄(P<0.01)患者间耐药率差异均有统计学意义;耐药相关基因型中有123例(42.12%)突变,与表型的一致性很高(Kappa=0.951,P<0.01),且主要耐药基因gyrA的第87位突变与表型的一致性略高于第91位突变。在克拉霉素耐药性研究的350例病例中,有168例(48.00%)表型耐药,不同性别(P=0.165)、年龄(P=0.192)患者间耐药率差异均无统计学意义;耐药相关基因型...     

基因检测指导耐克拉霉素幽门螺杆菌个体化治疗的研究

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)对克拉霉素的耐药性及其与耐药基因突变检测的一致性,为临床制订个体化Hp根除治疗方案提供依据.方法 将在南京医科大学附属南京医院就诊,接受13 C呼气实验以及胃镜检查的初始未治疗Hp阳性患者284例纳入研究.从纳入研究的病例中随机抽取222例作为试验组进行克拉霉素药敏试验和耐药基因突变检测,其...     

雷贝拉唑与克拉霉素和阿莫西林联用对根除幽门螺杆菌感染的近期疗效

目的：观察雷贝拉唑、克拉霉素、阿莫西林合用对根除幽门螺杆菌（HP）的近期疗效。方法：62例HP阳性的十二指肠球部溃疡病人，随机分2组，治疗组采用雷贝拉唑10mg，第一周每日2次，第2-4周每日1次；阿莫西林1．0每日2次共1周；克拉霉素0．5mg每日2次共1周。对照组采用枸橼酸铋钾220mg每日2次共4周，抗生素使用同治疗组。疗程结束后，复查胃镜观察HP清除及十二指肠溃疡的愈合情况。结果：HP根除率为：治疗组24／26（92．3％），对照组21／25（84％）。结论：雷贝拉唑组能明显缓解十二指肠溃疡的症状，对溃疡有较高的愈合率及HP清除率。     

不同剂量克拉霉素治疗儿童幽门螺旋杆菌感染疗效比较

目的探讨不同剂量克拉霉素联合奥美拉唑、阿莫西林短疗程治疗儿童幽门螺杆菌感染的临床疗效、幽门螺杆菌根除率及不良反应。方法将128例经胃镜检查及幽门螺杆菌脲酶快速诊断试验确诊为幽门螺杆菌感染的患儿随机分为A组（大剂量组）和B组（小剂量组）。大剂量克拉霉素为30mg·kg·d^-1,小剂量克拉霉素为15mg·kg·d^-1,口服。疗程为1w。结果A组有效率为96.8%,B组有效率为92.4%,两组比较差异无显著性（χ^2=1.17,P〉0.05）。幽门螺杆菌根除率A组为93.5%,B组为90.9%,两组比较差异无显著性（χ^2=0.31,P〉0.05）。不良反应发生率A组19.4%、B组6.1%,两组比较有显著性差异（χ^2=5.17,P〈0.05）。结论小剂量克拉霉素、奥美拉唑、阿莫西林三联疗法是根除儿童幽门螺杆菌感染的理想方案,其根除率高、安全性高。     

幽门螺杆菌克拉霉素耐药及患者CYP2C19基因型快速检测指导根除治疗的研究

综合分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)克拉霉素耐药根除治疗感染者的临床效果。选取我院2014年10月~2015年10月拟对14C呼气试验及快速尿素酶试验检测均符合HP感染者32例,按照不同的治疗方法随机分为试验组与对照组,各16例。试验组将提取的胃粘膜组织采用实时定量荧光检测法(Real time,PCR)进行HP耐药根除治疗+患者CYP2C19基因型检测,依据不同的检测结果,制定个体化的HP根除方案;对照组直接采用阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑治疗。试验组的HP根除率为87.5%,对照组的HP根除率为68.75%,试验组的HP根除率显著高于对照组(P0.05);本地区人群的CYP2C19对克拉霉素基因耐药发生率为28.8%,HP的23S rRNA基因位点突变率(即HP对克拉霉素的耐药发生率)为66.7%;根据CYP2C19基因型可分为UM(快代谢型)、IM(中间代谢型)、PM(弱代谢型);试验组的UM、IM、PM的HP根除率分别为55.11%、71.26%、92.32%,UM与PM的HP根除率比较差异较大(P0.05),UM与IM的HP根除率比较差异无统计学意义(P0.05)。试验组的HP根除率比较理想,HP的根除治疗效果较为显著。     

奥美拉唑、阿莫西林、克拉霉素三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效分析

目前已证实幽门螺杆菌(Hp)感染与胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生密切相关,在这些疾病中Hp感染率高,根除Hp治疗可使疾病转归。,我院内科采用阿莫西林,克拉霉素,奥美拉唑组成的三联疗法,对70例十二指肠溃疡患者进行治疗观察,取得了良好效果,现报告如下。1资料与方法1.1病例选择200     

CRC、克拉霉素与呋喃唑酮三联短疗程治疗幽门螺杆菌感染的疗效观察

自1998-10-2002-01以来,我们应用新型化合物枸橼酸铋雷尼替丁(商品名格来士Compound Ranitidine Capsules.CRC)、克拉霉索与呋喃唑酮三联治疗幽门螺杆菌(HP),疗效较好,报告如下。1对象和方法1.1 对象 1998-10-2002-01间我院门诊或住院患儿73例,     

幽门螺杆菌药物敏感性检测及临床应用评价

幽门螺杆菌（H．pylofi.np）与胃肠道疾病发病率密切相关，WHO已经把Hp列为胃癌的Ⅰ类致病因素，其治疗已日益引起人们关注。随着抗生素的广泛使用耐药率越来越高，根除率降低。目前常用的抗生素如甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素都存在不同程度的耐药问题，为进行一步掌握药敏规律，通过体外抗生素敏感试验和临床应用，为治疗Hp感染提供临床依据。     

PC R 检测技术在幽门螺杆菌诊断检测中的应用探讨

目的探寻聚合酶联反应(PCR)检测技术在幽门螺杆菌(H .pylori ,Hp)检测中的应用.方法通过对该院消化内科疑是患胃或十二指肠溃疡、胃或胃窦炎、胃癌患者于胃镜下取其病变部位组织标本,进行 Hp分离培养、PCR体外扩增,患者同时做尿素酶试验、血清学抗体检查,将结果进行比较分析.结果170份病例标本中,分离培养67例、尿素酶试验82例、Hp抗体检查152例、PCR扩增144例阳性.阳性率分别为39.4%、48.2%、89.5%、84.7%.以细菌培养为金标准,则尿素酶试验、抗体检查、PCR灵敏度分别为88.1%、89.5%、98.5%,特异性分别为94.6%、77.4%、81.7%.这4种检测方法中,灵敏度最高的为PCR基因扩增法,其次为抗体检查和尿素酶试验;特异性最高的为尿素酶试验,其次为PCR扩增和抗体检查.结论 PCR试验特异性和灵敏度均较高,可以用作Hp感染的确诊、基因分型、流行病学调查、微量取材等的检查.     

尿幽门螺杆菌抗体测定在幽门螺杆菌感染诊断中的价值

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp)抗体阴性用于排除近期Hp感染的临床价值。方法：Hp感染诊断采用^13C尿素呼气试验、快速尿素酶试验和W－S银染色，Hp抗体测定采用Hp抗体测定层析板。结果：31例Hp感染患10分钟阳性率87．1％（27／31），30分钟阳性率96．7％（30／31），56例无Hp感染患假阳性率19．7％（11／56）。对Hp感染诊断敏感性96．78％，特异性80．3％。对Hp感染阳性组以Hp抗体，^13C尿素呼气试验阳性率最高，Hp感染阴性组以Hp抗体阳性率最高。46例阳性病例中仅1例^13C尿素呼气试验阳性，W－S银染色、快速尿素酶试验均阴性。结论：Hp抗体阴性基本可排除近期有Hp感染，可避免病人作进一步的无益检查。     

幽门螺杆菌尿素酶基因的克隆及表达

目的构建幽门螺杆菌尿素酶基因B亚单位（ureB）的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达。方法以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增尿素酶基因B亚单位,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后连接克隆载体并测序,构建重组原核表达载体。结果成功扩增出1710bp的目的基因,测序结果证实与预期一致,该基因在大肠杆菌表达系统中得到表达。结论在大肠杆菌中成功表达幽门螺杆菌尿素酶基因B亚单位蛋白,为幽门螺杆菌疫苗的研发奠定了基础。     

浙江省湖州地区幽门螺杆菌感染及耐药研究

目的探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在浙江省湖州地区感染和耐药性情况。方法取患者胃黏膜活组织进行Hp增菌、分离培养、挑取菌落涂片镜检、生化反应鉴定;对Hp呈阳性者,采用纸片琼脂扩散法(K-B法)进行药物敏感性检测。结果 902例患者胃黏膜组织标本中检出Hp 354株,阳性率为39.25%(354/902)。胃癌、胃炎、胃溃疡和其他消化道疾病的Hp感染阳性率分别为66.67%(16/24)、40.08%(295/736)、36.58%(30/82)和21.67%(13/60),胃癌较其他疾病Hp感染率差异有统计学意义(P0.05)。男女性别总感染率分别为39.96%和37.64%,Hp感染率男女性别间差异无统计学意义(P0.05),40～50岁属于本地区Hp感染多发年龄段。药物敏感实验阿莫西林、庆大霉素和痢特灵3种药物全部敏感,左氧氟沙星的耐药率为8.19%(29/354),克拉霉素的耐药率为19.21%(68/354),甲硝唑的耐药率为100%(354/354);克拉霉素和甲硝唑双重耐药率为16.95%(60/354),左氧氟沙星和甲硝唑双重耐药率4.24%(15/354),克拉霉素、左氧氟沙星和甲硝唑多重耐药率为1.98%(7/354)。结论 Hp感染与多种胃病关系密切。40～50岁属于Hp感染多发年龄段。在治疗时应注意左氧氟沙星、克拉霉素和甲硝唑等药物耐药性,本地区可以选择阿莫西林、庆大霉素和痢特灵治疗,不宜选用甲硝唑。     

幽门螺杆菌的培养及药物敏感试验分析

目的分析温州地区幽门螺杆菌(Hp)临床分离株对多种常用抗幽门螺杆菌抗生素的药敏和耐药情况。方法收集我院2289例胃病患者的标本,取其胃黏膜活组织进行幽门螺杆菌培养,对培养到的Hp菌采用抗生素药敏试验纸片琼脂扩散法作药物敏感试验。结果Hp培养阳性率依次为消化性溃疡50.00%,活动性胃炎40.77%,胃癌31.87%,萎缩性胃炎17.92%。898例Hp阳性患者的药物敏感试验结果表明左氧氟沙星的耐药率最低,暂未发现耐药株,其次为庆大霉素(1.11%)、克拉霉素(13.14%)、羟氨苄青霉素(13.36%)、呋喃唑酮(32.29%),甲硝唑的耐药率最高(100%)。结论Hp感染与多种胃病关系密切,临床上对Hp感染的患者可选择左氧氟沙星、庆大霉素、克拉霉素、呋喃唑酮及羟氨苄青霉素治疗,不宜选用甲硝唑。     

幽门螺杆菌rdxA基因的DNA序列分析

目的研究(Hp)耐药菌株与敏感菌株之间rdxA基因的DNA差异。方法取胃镜活检标本,微需氧环境培养,收集Hp菌株。进行甲硝唑药敏试验,筛选出12株耐药菌株(MTZR菌株)和9株敏感菌株(MTZS菌株)。从MTZR菌株、MTZS菌株和Hp11637中扩增rdxA基因;将PCR产物进行DNA测序,测序结果采用DNA Star和NCBI Blast分析,探讨临床菌株和标准菌株的DNA序列差异。结果临床分离菌株与Hp标准菌株26695比较rdxA基因同源性,MTZR菌株为93.25%±1.93%;MTZS菌株93.79%±1.14%,P>0.05;Hp MTZR菌株的rdxA基因突变数高于MTZS菌株;Hp MTZR菌株与MTZS菌株之间点突变的形式没有显著性差异,也缺乏明确的突变规律和突变热点,MTZR菌株与MTZS菌株之间的突变形式无统计学意义。结论rdxA基因突变(改变)以点突变为主,rdxA基因点突变与Hp耐药有关,但具体的rdxA点突变形式与耐药表型的关系尚有待进一步研究。     

幽门螺杆菌相关检测对消化性溃疡的诊断价值

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)检测对消化性溃疡(PU)的诊断价值.方法 选取214例PU患者(PU组)、146例慢性浅表性胃炎(CSG)患者(CSG组),以118名健康体检者为对照(对照组).对所有研究对象进行14C尿素酶呼气试验,并采用免疫印迹法检测其Hp抗体血清分型.结果 PU组、CSG组和对照组14C尿素酶呼气试验...     

聚合酶链反应(PCR)检测幽门螺杆菌cag A基因

目的　探讨应用PCR直接测定胃粘膜标本中幽门螺杆菌cagA基因。方法　不需细菌培养 ,直接从胃粘膜标本中提取幽门螺杆菌DNA ,选择合适的引物及条件进行PCR ,通过琼脂糖电泳来确定标本中的cagA基因。结果　每例cagA阳性的标本在 191bp的位置有一条清晰的电泳带。 19例胃溃疡患者中cagA阳性 16例 ,阴性 3例。 15例健康人血清对照 ,cagA阳性 3例 ,阴性 12例。该法敏感性 84 .2 % ,特异性 80 %。同时进行快速尿素酶实验 ,发现 17例阳性标本中PCR方法 16例阳性 (94 .1% ) ,2例快速尿素酶实验阴性标本PCR阴性。二者没有显著差异 (χ2 =0 ,P >0 .0 5 )。结论　应用PCR直接测定胃粘膜标本中幽门螺杆菌cagA基因方法简单 ,快速 ,灵敏度和特异性较高。     

左克胶囊三联疗法根除幽门螺杆菌感染

目的观察左氧氟沙星短程三联疗法根除幽门螺杆菌（Hp）感染的疗效。方法100例Hp阳性患者[A组，男62例，女38例；年龄（59±11）岁；十二指肠球部溃疡（DU）62例，胃溃疡（GU）38例]给予泮托拉唑40mg，po，bid，左氧氟沙星200mg及阿莫西林1000mg，po，bid。另102例Hp阳性患者[B组，男59例，女43例；年龄（57±9）岁；DU58例，GU44例]给予泮托拉唑40mg，克拉霉素500mg及阿莫西林1000mg，po，bid。疗程均为1周。疗程结束后4～6周复查胃镜及Hp。结果A、B两组抗Hp治疗结束后4—6周停用PPI2周后，Hp根除率各为87％、79％（P〉0．05），均无严重不良反应。结论Hp耐药菌株多见，左旋氧氟沙星联合奥美拉唑和阿莫西林是一种安全、疗效高、耐受性好的治疗Hp感染的方案。