E1A激活基因阻遏子在不同表型血管平滑肌细胞中的表达

为探讨血管平滑肌细胞表型转换、分化过程中E1A激活基因阻遏子(CREG)的表达变化及其相关机制，采用PCR扩增的CREG片段插人pGEX-4T-1原核表达载体，纯化的CREG融合蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体；以人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)为模型，[^3H]标记脱氧胸苷掺人法测定去血清培养HITASY细胞DNA合成变化；Western blot观察HITASY细胞在去血清培养过程中SM仅α-actin、calponin的表达，RT-PCR和Western blot分析去血清培养诱导CREG mRNA和蛋白表达变化；免疫组化观察CREG在细胞内的表达及定位。结果成功地构建了载体并得到抗CREG多克隆抗体。去血清培养可使HITASY细胞DNA合成明显降低。随去血清培养时间延长，除SM α-actin和calponin表达逐渐上调之外，CREG mRNA转录活性和蛋白翻译合成亦上调。免疫组化显示去血清培养后，CREG蛋白在细胞内表达并主要位于细胞核周。结论：去血清能促使HITASY细胞由合成表型向收缩表型转换，同时伴CREG mRNA和蛋白表达上调。     

胆红素对被动吸烟大鼠支气管上皮细胞表达ICAM-1的影响

<正>支气管上皮细胞通过表达细胞间黏附分子介导中性粒细胞向炎症气道聚集参与慢性气道炎症。胆红素是一种有效的抗氧化剂。研究证实,胆红素对急性肺损伤的肺组织有较好的保护作用,本研究旨在观察胆红素对被动吸烟大鼠支气管上皮细胞表达ICAM-1的影响。     

前列腺素E1对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察前列腺素E1(PGE1)对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的HK-2细胞随机分为5组:正常对照组、尿酸组(200、400、800μmol·L-1 UA)、尿酸+PGE1组。不同浓度的尿酸刺激HK-2细胞24、48、72 h,用MTT比色法检测细胞活性抑制率;不同浓度尿酸培养HK-2细胞24 h,用Annexin V FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率并检测细胞培养液NAG酶的活性,观察尿酸对HK-2细胞的毒性作用;并加入PGE1干预,探讨其对HK-2细胞的保护作用。结果尿酸作用HK-2细胞24 h后,与对照组比较,细胞凋亡率增加至(56.06±4.937)%(P<0.01),NAG酶释放量增加至(15.23±0.617)U·L-1(P<0.01)。加PGE1组,与同浓度单纯尿酸组比较,在不同时间点细胞活性抑制率均明显降低,凋亡率减少至(41.61±4.149)%(P<0.01);NAG酶释放量减至(11.24±0.468)U·L-1(P<0.01)。结论 1尿酸抑制HK-2细胞增殖和促进凋亡,增加其NAG酶的释放;2 PGE1对尿酸损害HK-2细胞有一定的保护作用。     

IFN-γ刺激对大鼠脑内ICAM-1表达的影响

目的研究探讨IFN-γ诱导建立脑慢性炎症鼠模型中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达。方法 36只SD大鼠随机平均分为3组,观察一组、二组利用100U/mL、200U/mL浓度IFN-γ注射入大鼠侧脑室建立脑慢性炎症模型,对照组SD大鼠侧脑室注射人工脑脊液,分别于21d、24d、27d、30d取SD大鼠脑组织,采用免疫组织化学、印记法定量检测细胞粘附分子ICAM-1蛋白的表达水平。结果观察一组、二组大鼠脑组织细胞ICAM-121d、24d、27d、30d免疫组织化学染色阳性率及表达水平与对照组大鼠脑组织细胞相同时段有所差异,P<0.05,说明差异存在统计学意义。结论脑组织细胞在IFN-γ刺激下表达水平显著增高,与脑血管内皮细胞损伤以及白细胞激活存在密切相关性。     

重组人5型腺病毒在体外对A549细胞的影响

目的探讨重组人5型腺病毒对A549细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等方法检测重组人5型腺病毒对A549细胞生物学特性的影响。结果重组人5型腺病毒在体外对A549细胞有显著的生长抑制作用,且具有时间和浓度依赖性;一定质量浓度的重组人5型腺病能显著降低A549细胞迁徙活性,诱导细胞凋亡,阻滞A549细胞于G0/S期。结论重组人5型腺病在肿瘤的临床治疗中有着重要的作用和广阔的前景。     

裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用

目的 构建Ad-E1A裂解型腺病毒载体,研究其对肝癌细胞的裂解作用.方法 以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,用特异性引物PCR法扩增E1A基因,酶切后连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,用PmeI酶对pAdTrack-CMy-E1A线性化后,与pAdEasy-1共转化在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A;再用PacI酶切对重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-E1A腺病毒子.在QBI-293A细胞中多轮感染后获得高效价的病毒.将Ad-EIA腺病毒感染SMMC-7721,并用MTT和流式细胞仪检测Ad-E1A对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响.结果 获得高滴度的重组裂解型腺病毒Ad-E1A.Ad-E1A感染SMMC-7721后,出现明显的细胞病变.Ad-E1A对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显抑制,48 h后效果明显.Ad-E1A可直接诱导SMMC-7721细胞的凋亡.结论 裂解型腺病毒Ad-E1A构建成功并可以显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并在肝癌细胞中复制造成细胞裂解,诱导肝癌细胞的凋亡.     

人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用

目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。     

稳定表达RASSF1A基因肝癌细胞株的建立

目的建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。方法真核表达载体pcDNA3.1(+)RASSF1A经阳离子脂质体介导转染肝癌细胞株QGY-7703和Hep3B,通过G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定目的基因的表达。结果 (1)QGY-7703,Hep3B细胞株的G418最佳筛选浓度分别为800 μg／ml和400 μg／ml;(2)QGY-7703和Hep3B细胞株各获得2个稳定表达RASSF1A基因的细胞克隆。结论成功建立了稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。     

连翘苷调控细胞因子信号转导抑制因子1对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和氧化应激的影响

目的 研究连翘苷调控细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和氧化应激影响。方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞分为对照组、模型组(肺炎链球菌感染)、实验低、中、高剂量组(在模型组基础上分别给予5、10、20μmol·L^-1连翘苷)、实验高剂量+si-NC组(肺炎链球菌感染,转染siRNA NC、20μmol·L^-1连翘苷处理)、实验高剂量+si-SOCS1组(肺炎链球菌感染,转染siRNA SOCS1、20μmol·L^-1连翘苷处理)。用蛋白质印迹(Western blot)法检测SOCS1蛋白表达;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;用碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期;用Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡;用可见分光光度法检测丙二醛(MDA);用氮蓝四唑(NBT)法检测超氧化物歧化酶(SOD)。结果 对照组、模型组、实验高剂量组、实验高剂量+si-NC组和实验高剂量+si-SOCS1组肺泡上皮细胞SOCS1蛋白表达水平分别为1、0.54±0.04、0.96±0.04、0....     

前列腺素E1对环孢素A血药浓度的影响

目的：探讨前列腺素E1对环孢素A血药浓度的影响。方法：10只家免，采用自身对照法，比较服用前列腺素E1前后环孢素A血药浓度有无差异。结果：10只家兔，服用前列腺素E1前后环孢素A血药浓度差异无显著性（P〉0．05）。结论：前列腺素E1对家兔体内环孢素A血药浓度无显著影响。     

TGF-β1对人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞间质转化的影响

目的 以转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)作用于A549细胞,观察人Ⅱ型肺泡上皮细胞向间质细胞的转化.方法 体外培养A549细胞,用TGF-β1进行干预,通过形态学观察、荧光定量多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、蛋白质印迹法(Western-blot,WB)及免疫组化分析细胞干预前后中E钙蛋白(E-cadherin,E-Cad),I型胶原蛋白(collagen I,Col-I)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)信使核糖核酸(message ribonucleic acid,mRNA)及其蛋白的表达.结果 A549细胞经5 ng/mL TGF-β1作用7 d后细胞形态呈间质细胞的纺锤体形状样改变,与对照组对比,E-Cad mRNA及其蛋白的表达减少,差异有统计学意义(P<0.05);Col-I和FN的mRNA及其蛋白的表达增多,差异有统计学意义(P<0.05).结论 体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞经TGF-β1诱导后具有间质细胞的特征,提示A549细胞发生了间质转分化.     

枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠气道上皮细胞NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的 研究原花青素对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用并探讨其作用机理。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松治疗组（2mg／kg）、原花青素小剂量组（1．2mg／kg）、原花青素中剂量组（6mg／kg）、原花青素大剂量组（30mg／kg），每组10只．用完全弗氏佐剂制造大鼠佐剂性关节炎（AA）模型，大鼠于致炎后第8天给药，观察各组对AA大鼠足肿胀及体重的影响。第24天处死大鼠，剪下致炎足的对侧足爪，剪碎后浸泡于生理盐水2小时，EIA法测浸泡液中PGE2的含量。同时分离大鼠腹腔巨噬细胞，     

LncRNA PVT1靶向miR-130a-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探究LncRNA PVT1靶向miR-130a-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法本研究首先探究PVT1在肺炎链球菌坏死性肺炎肺组织和正常肺组织中的表达情况;然后构建PVT1敲减载体,转染肺泡上皮细胞A549,采用比色MTT测定法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,ELISA检测细胞因子IL-6和TGF-β的表达,qRT-PCR检测肺组织中PVT1的表达,以及A549细胞中PVT1和miR-130a-3p的表达,使用双荧光素酶实验和qRT-PCR试验测定PVT1和miR-130a-3p的靶向调控关系。结果与正常肺组织相比,肺炎链球菌坏死性肺炎肺组织中PVT1表达上调(P<0.05);肺炎链球菌感染可增加肺泡上皮细胞PVT1的表达(P<0.05),敲减PVT1后,可增加肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞A549的增殖(P<0.05),减少A549的凋亡和炎性因子IL-6和TGF-β的表达(P<0.05)。进一步双荧光素酶实验证实PVT1可靶向负调控miR-130a-3p表达(P<0.05)。Anti-miR-130a-3p共转染A549细...     

miR-483-3p靶向APPL1对脂多糖诱导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-483-3p对脂多糖(LPS)诱导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响及可能机制.方法 LPS诱导小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞后,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-483-3p和磷酸酪氨酸衔接蛋白1(APPL1)mRNA表达水平,酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD...     

细胞因子信号转导抑制因子 1对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞 A549损伤的影响

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549损伤的影响.方法 以肺泡上皮细胞A549为研究对象,A549细胞分成正常组、模型组、Vector+模型组、SOCS1+模型组共四组,在细胞中转染pcDNA3.1-SOCS1,给予肺炎链球菌刺激,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOCS1 mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blotting)检测SOCS1蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(C-caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(C-caspase-9)蛋白水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blotting检测胞质和线粒体中细胞色素C(Cytochrome C)蛋白水平.结果 肺炎链球菌刺激后的肺泡上皮细胞A549中SOCS1表达水平下降[正常组SOCS1 mRNA(1.00±0.09),模型组SOCS1 mRNA(0.59±0.07)],细胞存活率降低[正常组(100.00±9.68)％,模型组(63.47±5.20)％],LDH释放率升高[正常组(2.68±0.27)％,模型组(12.30±1.78)％],MDA含量升高[正常组(75.61±5.32)nmol/g,模型组(165.92±13.17)nmol/g],SOD活性降低[正常组(131.47±12.86)×103U/g,模型组(68.41±6.38)×103U/g],细胞凋亡率和细胞中C-caspase-3、C-caspase-9蛋白水平升高,线粒体膜电位下降,胞质中Cytochrome C蛋白水平升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平下降.pcDNA3.1-SOCS1转染后的肺炎链球菌条件下肺泡上皮细胞A549中SOCS1表达水平升高,细胞活性升高,LDH释放率降低,MDA含量下降,SOD活性升高,细胞凋亡率和细胞中C-caspase-3、C-caspase-9蛋白水平降低,线粒体膜电位升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平升高,胞质中Cytochrome C蛋白水平降低.结论 SOCS1减轻肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549损伤.     

大肠癌中ICAM-1基因的表达及其对预后的影响

目的 研究大肠癌中ICAM-1基因的表达，旨在探讨其在大肠癌局部进展中的作用。方法 应用流式细胞术（flow cytometry technique FCM）测定60例大肠癌和15例正常对照组结肠标本的ICAM-1蛋白表达量，蛋白表达量以荧光指数（fluorescent index FI）表示，并将大肠癌根据临床病理分期、癌细胞分化程度、细胞学类型分组比较。其结果用统计软件包SPSS11．5进行统计学处理。结果 大肠癌组ICAM-1基因蛋白的表达量明显高于正常对照组，P〈0．01：转移组大肠癌ICAM-1基因蛋白的表达量明显高于未转移组，P〈0．01：大肠癌中高分化腺癌与低分化腺癌ICAM-1基因蛋白FI值比较差异有显著性，P〈0．01。结论 ICAM-1基因的表达与大肠癌的发生和进展关系密切，值得临床注意。     

七氟醚和丙泊酚气管内全麻对肺泡内ICAM-1及VEGF表达的影响

目的:判定吸入性气管内全麻和全凭静脉麻醉,对肺组织是否有损伤,通过检测BALF中ICAM-1及VEGF的标志物.方法:选择气管内全麻的患者40例,ASA Ⅰ～Ⅱ级.随机分为两组(n=20),(Ⅰ)七氟醚-瑞芬太尼-仙林组20例.(Ⅱ)丙泊酚-瑞芬太尼-仙林组20例.分别于麻醉前(T0)、手术开始后30min(Ti)、拔管后(T2)、采集三组气管内分泌物盥洗液进行检测.结果:①麻醉维持期间细胞粘附因子-1(ICAM-1)的表达Ⅰ组略高于Ⅱ组无显著性差异(P＞0.05),②麻醉维持期间血管内皮因子(VEGF)的表达Ⅰ组略低于Ⅱ组无显著性差异(P＞0.05).结论:七氟醚组和丙泊酚组在全麻维持时气管内分泌物盥洗液ICAM-1,VEGF无明显变化,说明这两种全麻药物对肺组织均无损伤.     

白介素-15对过氧化氢诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察白介素-15(IL-15)对H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及探讨其机制。方法体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(RLE-6TN),分为:(A)正常对照组;(B)IL-15预处理组;(C)H2O2损伤组;(D)IL-15预处理后H2O2损伤组。采用DAPI荧光染色及Annexin V-FITC/PI检测各组细胞凋亡,JC-1染色观察各组线粒体膜电位;RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,H2O2损伤能明显诱导RLE-6TN凋亡,IL-15预处理可明显降低H2O2诱导的细胞凋亡率,使细胞线粒体膜电位下降,Bcl-2 mRNA表达增加,Bax、Caspase-3mRNA表达降低(P<0.05)。结论 IL-15能抑制H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡,其作用机制可能为稳定细胞线粒体膜电位,增强抗凋亡基因Bcl-2,同时,抑制促凋亡基因Bax表达,下调Caspase-3表达。