即时定量PCR法和等位基因特异性寡核苷酸PCR法检测肺腺癌EGFR基因第21号外显子L858R突变的对比性研究

自从Lynch等[1]和Paez等[2]发现肺癌细胞中上皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶编码区基因突变以来,研究证明具有EGFR基因第19号外显子(de1746-A750)缺失突变或第21号外显子L858R错义突变的肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼进行分子靶向治疗的有效率高达80%以上,而对于缺乏EGFR突变的患者采用上述治疗则基本无效[3].     

即时定量PCR法和等位基因特异性寡核苷酸PCR法检测肺腺癌EGFR基因第21号外显子L858R突变的对比性研究

自从Lynch等[1]和Paez等[2]发现肺癌细胞中上皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶编码区基因突变以来,研究证明具有EGFR基因第19号外显子(de1746-A750)缺失突变或第21号外显子L858R错义突变的肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼进行分子靶向治疗的有效率高达80%以上,而对于缺乏EGFR突变的患者采用上述治疗则基本无效[3].     

免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比

目的比较免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交(fluorescent in situhybridization,FISH)技术在检测肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因的差异性和一致性,评估IHC在临床上的应用价值。方法应用IHC和FISH技术对332例肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因进行检测,比较两者检测的结果和相关性,并探讨ROS1融合基因与临床病理特征之间的关系。结果 332例肺腺癌中FISH阳性者13例,阴性者319例,ROS1融合基因阳性率为3.9%;ROS1蛋白表达结果:0者312例,1+者2例,2+者5例,3+者13例,ROS1蛋白过表达率为6.0%;经FISH检测312例ROS1蛋白表达为0的标本无ROS1融合基因,2例1+的标本中也无ROS1融合基因;5例2+的标本中有2例ROS1融合基因,13例3+的标本中11例有ROS1融合基因;IHC检测0和1+、2+、3+标本FISH检测阳性符合率分别为0(0/314)、40%(2/5)和84.6%(11/13);IHC检测ROS1蛋白为2+~3+的标本中72.2%(13/18)显示ROS1融合基因,0~1+患者中无1例有ROS1融合基因(Kappa系数=0.831,P0.01);IHC检测ROS1蛋白表达的敏感性和特异性分别100%和98.4%。结论 IHC检测ROS1蛋白表达和FISH检测ROS1融合基因,两种方法有较高的符合率,一致性较好,IHC有较高的敏感性和特异性,可作为临床检测肺腺癌ROS1融合基因的简单而有效的方法。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变的检测及临床病理意义

目的检测非小细胞肺癌患者体细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因第19和21外显子突变情况并探讨其临床病理联系。方法用酚．氯仿法抽提66例NSCLC患者手术标本的基因组DNA,采用PCR技术扩增EGFR基因第19和21号外显子,从正反两个方向对扩增片段进行DNA测序和分析,并寻找EGFR突变与患者115床病理特征之间的联系。结果66例NSCLC患者中有11例（16．7％）存在EGFR杂合性体细胞突变,其中7例为第19外显子缺失突变,4例为第21外显子替代突变。女性患者突变率（9／34,26,5％）高于男性患者突变率（2／32,6．3％）,腺癌患者突变率（10／43,23,3％）高于鳞癌（0／13）和腺鳞癌患者（1／10）,吸烟者与非吸烟者突变率之间差异无统计学意义。伴细支气管肺泡癌成分的腺癌患者EGFR突变率（6／11）,高于无细支气管肺泡癌成分的腺癌患者（4／32,12．5％）。结论EGFR突变率以伴细支气管肺泡癌成分的腺癌和女性较高,更有利于适宜靶向治疗患者的临床筛选。     

先天性软骨发育不全成纤维细胞生长因子受体3基因1138位核苷酸点突变的检测

目的 验证成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3，FGFR3)跨膜区1138位核苷酸为先天性软骨发育不全突变热点及用变性梯度电泳方法筛查的效果。方法 对17例临床诊断为先天性软骨发育不全患者进行基因组DNA聚合酶链反应－限制性酶切片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析，并用变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)进行其它突变位点的筛查。结果 17例患者中14例RFLP检测显示能被Sfc I酶切，提示存在1138位核苷酸G→A的转换，且均为杂合子。17例用Msp I酶切均阴性，提示无G→C的颠换。DGGE方法的筛查中，酶切阳性的14例标本均显示存在杂合型突变。3例PCR－RFLP检测阴性的标本未显示突变位点，提示在该扩增区域确实不存在突变位点。结论 FGFR3跨膜区1138核苷酸G→A的突变是软骨发育不全的主要发病机理，DGGE可作为筛查某一区域基因突变的敏感而可靠的检测手段，尤其是对杂合子的检测。     

糖尿病患者胰岛素基因启动子的突变检测和临床应用

为探讨胰岛素基因启动于突变是否与中国人2型糖尿病相关,随机选择黑龙江省中国汉族2型糖尿病患者89例,应用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测方法检测胰岛素基因启动子突变.结果显示:89例中国人2型糖尿病患者中未发现1例异常泳动变位.结论:胰岛素基因启动子突变可能不是中国人2型糖尿病的重要遗传因素.     

表皮生长因子受体基因不同突变多灶性肺腺癌一例

报道1例52岁女性患者右上肺、右下肺2灶肺癌, 位于同侧, 且细胞形态上基本无差别, 但表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测到2种不同的驱动基因突变, 分别为第20号外显子插入突变和第21号外显子L858R, 在基因层面证实这两个病灶的肿瘤细胞来自不同的基因改变, 一定程度上反映了肺癌分子改变的多样性和复杂性, 对我们认识和诊治肺癌有一定的参考意义。第20号外显子插入突变相关的靶向药近年有较大的进展。     

应用蝎形探针扩增阻滞突变系统检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与病理改变的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检出率,比较蝎形探针扩增阻滞突变系统(scorpions amplifieation refractory mutation system,以下简称Scorpions ARMS)即时荧光PCR和直接测序检测EGFR基因突变的敏感性.方法 应用显微切割术、Scorpions ARMS及直接测序检测82例NSCLC石蜡包埋肿瘤组织以及癌旁正常肺组织中EGFR基因的第18、19、20和2l外显子的突变.结果 Scorpions ARMS检测82例NSCLC中42例的瘤组织中存在EGFR突变,突变检出率为51.2%,其中20例为EGFR第19外显子框架内多核苷酸的缺失,18例为EGFR第21外显子L858R点突变,1例为EGFR第21外显子L861Q点突变,2例为EGFR第20外显子插入突变,另外1例为EGFR第20外显子$7681点突变.而PCR反应后行直接测序,82例标本中仅58例得到可分析的测序结果,其中25例瘤组织中出现EGFR突变,因此82例的突变检出率为30.5%,25例中13例为EGFR第19外显子框架内多核苷酸的缺失,10例为EGFR第21外显子L858R点突变,1例为EGFR第21外显子L861Q点突变,另外1例为EGFR第20外显子$768I点突变.直接测序检测出25例突变模式与Scorpions ARMS检测结果一致.结果 显示Scorpions ARMS具有很高的敏感度,部分直接测序阴性的病例经Scorpions ARMS检测出EGFR突变.结论 EGFR基因的点突变或缺失在中国NSCLC的患者中的检出率明显高于其他国家,以女性、腺癌和细支气管肺泡以及不吸烟患者突变率较高.Scorpions ARMS技术能快速、敏感、准确检测EGFR突变,能为临床冶疗及预后提供重要信息.     

人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因对人喉鳞癌细胞系表皮生长因子受体和基质金属蛋白酶9表达的影响

表皮生长因子受体（EGFR）和基质金属蛋白酶（MMP）9在肿瘤的侵袭和转移发生过程中发挥着重要作用,其表达上调能导致肿瘤的侵袭和转移潜能增强。人乳头状瘤病毒16（HPV16）为喉鳞癌的主要致病因素,其主要转化活性部位在E6和E7开放读码框架。我们采用脂质体转染技术将携带有HPV16-E6／E7DNA的真核表达质粒导入HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系,使其在细胞中表达,研究其对Lscc-02喉鳞癌细胞系EGFR和MMP-9mRNA及蛋白表达的影响,探讨HPV16-E6／E7基因与喉鳞癌演进及预后的关系。[第一段]     

对美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院乳腺癌激素受体免疫组织化学检测指南应用的专家座谈会简介

2010年7月21日,"乳腺癌专家沙龙"在北京召开了有关内分泌治疗标准的座谈会,约30余位临床和病理专家与会,北京大学第一医院外科刘荫华和解放军第三○七医院内科江泽飞二位教授主持了会议.     

对美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院乳腺癌激素受体免疫组织化学检测指南应用的专家座谈会简介

2010年7月21日,乳腺癌专家沙龙在北京召开了有关内分泌治疗标准的座谈会,约30余位临床和病理专家与会,北京大学第一医院外科刘荫华和解放军第三○七医院内科江泽飞二位教授主持了会议.     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织和血清表皮生长因子受体第19、21外显子的检测及其临床特征的分析

 目的： 检测非小细胞肺癌 (non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者血清与肿瘤组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的突变状态,分析两者的一致率及其临床特征,比较2种方法的优劣,探索血清代替组织检测的可行性。方法： 收集中国人群NSCLC患者肿瘤组织和匹配的血清标本共90对,肿瘤组织和血清均用蝎型探针扩增阻滞突变系统(scorpions amplification refractory mutation system,SARMS)和直接测序2种方法检测EGFR基因中第19和21外显子的突变状态,应用2检验和Fisher精确检验分析19和21外显子EGFR突变与患者临床特征的关系,分析在血清和肿瘤组织标本中基因突变的一致性及2种检测方法的灵敏度和特异度。结果： SARMS法检测肿瘤组织和血清标本EGFR突变的检出率分别是46.7% (42/90)和18.9%(17/90),肿瘤组织和血清的突变阳性一致率为16.7%(15/90);而直接测序法检测肿瘤组织和血清标本EGFR突变的检出率分别是30%（27/90）和4.4%(4/90),两者的突变阳性一致率4.4%（4/90）。与测序法相比,SARMS法的灵敏度是35.8%。此外,肿瘤组织的EGFR突变与性别、吸烟史和病理类型有关（P<0.05）,血清EGFR突变与年龄、性别、病理类型和临床分期无明显相关（P>0.05）。结论： 血清的突变检出率仍较组织低,但SARMS法的灵敏度较直接测序法高,肿瘤组织仍为目前确定NSCLC患者EGFR基因突变状态的主要来源和依据。