尿素-SDS-PAGE快速测定多肽的相对分子质量

随着电泳技术的不断改进和完善,该技术已成为现代分子生物学实验不可缺少的基本实验技术之一。然而进行小分子多肽的电泳分析时,由于其相对分子质量（Ｍｒ）小,易受电泳条件（电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等）的影响,极易引起条带扩散、不易着色,使分辨率降低,因而直接影响多肽Ｍｒ的测定。现有多肽Ｍｒ的电泳测定法［１,２］操作复杂,且结果也不理想。因此,我们经反复实验,建立了对Ｍｒ为２ ５００－１７ ０００多肽的尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ快速测定法。１材料和方法１．１材料 ＥＣＰ－３０００电泳仪为北京…     

红景天甙对缺氧状态下兔肺动脉平滑肌细胞增殖和c—fos,c— …

目的：研究红景天甙对缺氧（２－３％）状态下兔肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖、ＤＮＡ合成、细胞周期和ｃ－ｆｏｓ、ｘ－ｍｙｃ原癌基因表达的影响。方法：应用细胞培养，四唑盐比色试验（ＭＴＴ），「＾３Ｈ」－胸腺嘧啶核苷（「＾３Ｈ」－ＴｄＲ）掺入、细胞周期测定和斑 交的方法。结果：发现缺氧２４ｈ可直接刺激ＰＡＳＭＣ，使ＭＴＴ之ＯＤ值增加９５％，「＾３Ｈ」－ＴｄＲ的掺入量增加１４０％；在缺氧的ＰＡＳＭＣ培     

Dot—IGSS法检测SLE患者血清中抗肾小球基底膜及肾小管抗？…

方法；本实验采用斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法对５０例ＳＬＥ患者血清中的肾小球基底膜抗体（ＧＢＭ－Ａｂ）及肾小管抗体（Ｔｕｂ－Ａｂ）进行检测。结果：ＧＢＭ－Ａｂ阳性率达６２％，Ｔｕｂ－Ａｂ阳性率达７６％。与患者尿蛋白检查比较，上述自身抗体检出率较高。此外，ＧＢＭ－Ａｂ或Ｔｕｂ－Ａｂ检测阳性患者与肾活检诊为狼疮性肾炎（ＬＮ）相符率达１００％。结论：ＧＢＭ－Ａｂ或Ｔｕｂ－Ａｂ的检出可为临床早期     

Dot—IGSS和Dot—ELISA法检测GBM—Ab和Tub—Ab的比较研究

本实验应用斑点免疫金银染色及斑点酶联免疫吸附试验对５０例ＳＬＥ患者体内的肾小球基底膜抗体及肾小管抗体进行了检测比较。结果表明：Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ法检测ＧＢＭ－Ａｂ和Ｔｕｂ－Ａｂ的阳性率分别是６２％和７６％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测ＧＢＭ－Ａｎ和Ｔｕｂ－Ａｂ的阳性率分别是６８％和７８％。     

系统性红斑狼疮病人外周血单个核细胞NF-κB活性的研究

目的;研究体外培养的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＮＦ－κＢ的活化表达情况及其与ＰＢＭＣ分泌免疫球蛋白,自身抗体的关系。方法：ＮＦ－κＢ活性检测采用电泳迁移率改变法（ＥＭＳＡ）,细胞培养上清免疫球蛋白和抗ｄＳＤＮＡ抗体采用微量ＥＬＩＳＡ测定。结果;发现ＳＬＥ病人外周血ＰＢＭＣ ＮＦ－κＢ活性显著高于正常对照组,与其ＰＢＭＣ培养上清及血清ＩｇＧ和抗ｄｓＤＮＡ抗体含量成正相关     

宋内氏志贺氏菌（Ipa^＋,Oag^—）菌株的构建及表达

直接用转化方法将质粒ｐＨＳ４１０８转入宋内氏Ⅱ相菌Ｓ１Ｒ（Ｉｐａ＾－，Ｏａｇ＾－），构建了菌株Ｓ１Ｒ１０１／ｐＨＳ４１０８。该菌株能表达侵袭性外膜多肽ａ，ｂ，ｃ，ｄ，无Ｏ抗原。本实验又将质粒ｐＨＳ４１０８中的１２．５ｋｂ ＳａｌＩ片段克隆到质粒ｐＢＲ３２２上，构建质粒ｐＪＭ５６，并把它转入Ｓ１Ｒ株内所得的重组菌Ｓ１Ｒ１０２／ｐＪＭ５６能表达多肽ａ，ｃ，ｄ，但不表达多肽ｂ。     

应激活化蛋白激酶与蛋白激酶p38活性测定

应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）和Ｐ＾３２是丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）的主要成员。与应激和某些炎性细胞因子引起的细胞反应有关，参与心血管疾病、细胞凋亡与机体的应激反应。本文主要介绍用免疫沉淀法提取ＳＡＰＫ和ｐ３８，据ＳＡＰＫ和ｐ３８分别可以磷酸化ｃ－Ｊｕｎ和ＡＴＦ－２的原理，采用聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）方法，分别测定ＳＡＰＫ和ｐ３８将＾３２Ｐ参入其特异性底物的量，反映其活性。     

多发性硬化患者者血清TGF—β的检测及其临床意义

目的：探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）在多发性硬化（ＭＳ）发生、发展中的作用。方法：采用酶联免疫吸附ＥＬＩＳＡ方法,对４５例ＭＳ患者血清ＴＧＦ－β１的含量进行了测定。结果：与对照组和ＮＩＮＤ组相比,ＭＳ患者血清ＴＧＦ－β１含量明显下降（Ｐ〈０．０１）;与ＳｔａｂｌｅＭＳ组相比,ＲＲＭＳ组和ＣＰＭＳ组ＴＧＦ－β１含量亦明显下降（Ｐ〈０．０５）;动态观察显示,随着病性的好转,ＴＧＦ－β１含量亦逐     

rhGM—CSF／IL—3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞体外培养的研究

研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白对人骨髓造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ）集落形成的影响，结果表明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３能显著促进ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成，分别与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３单独或联合用药比较，差异有显著性（Ｐ〈０．００１），ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ＝ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成对融合蛋白均有剂量依赖性，培养体系浓度在５￣１０ｎ     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

病毒性肝炎受体导向药物L—HSA—Ara AMP的导向性实验

选用乳糖化人血清白蛋白（Ｌ－ＨＳＡ）为载体，与单磷酸阿糖腺苷（Ａｒａ－ＡＭＰ）交联成乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－Ａｒａ－ＡＭＰ）交联物，观察了＾１２５Ｉ标记的该交联物在小鼠体内的分布，结果，＾１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＨＳＡ及＾１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＨｒａＡＭＰ在肝脏内的含量明显高于其他各脏器，前者在肝脏含量最高为第３ｄ，后者为第１ｄ，在第７ｄ仍有一定浓度，二者次于肝脏含量的组织均为     

腺病毒介导M—CSF和IFN—γ基因联合转染对巨噬细胞抗原提呈功？…

研究观察了Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍφ）的体外抗原提呈能力，并对其机制进行了初步探讨，结果表明，ＩＦＮ－γ基因转染及Ｍ－ＣＳＦ／ＩＦＮ－γ联合基因转染的Ｍφ抗原是呈功能显著增强，联合基因转染组优于单基因转染组（Ｐ〈０．０５），Ｍφ表面Ｉａ、Ｂ７－１、ＩＣＡＭ－１的表达水平有不同程度的提高，这些细胞表面相关发子的高表达可能与基抗原提呈能力增加有关。混合淋巴细胞     

用ARMS／PCR—SSP方法对湖南籍汉族人HLA—A座位多态？…

目的 研究湖南汉族人群ＨＬＡ－Ａ座位等位基因的分布情况，了解ＨＬＡ的民族遗传背景，为ＨＬＡ其它研究提供基础资料。方法 收集连续三代以上湖南籍汉族健康人血样，采用１２ｔｈＷＳ提供的ＡＲＭＳ／ＰＣＲ－ＳＳＰ方法作ＨＬＡ－Ａ座位的ＤＮＡ分型。从基因组ＤＮＡ直接扩增，电泳后９溴乙锭染色液加入琼脂糖中）紫外光下按１２ｔｈＷＳ提供的标准判读结果，指定等位基因特异性。结果 ６６例湖南汉族人群ＨＬＡ－Ａ座位的等位     

α—地中海贫血的基因检测与诊断

α－地中海贫血（α－地贫）是严重危害人类健康的遗传病，其基因背景正不断被揭示，具有遗传异质性。目前检测患及其携带的水平正确正不断提高。随着ＤＮＡ分析技术的不断发展，α－地贫的基因诊断日臻完善，本就α－地贫的基因检测检测的ｇａｐ－ＰＣＲ，Ｍ－ＰＣＲ，ＰＣＲ－ＡＳＯ，ＡＲＭＳ，ＡＣＲＳ，ＤＧＧＥ，ＲＤＢ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等方法进展作一综述。     

N—CWS激活小鼠巨噬细胞抗肿瘤作用的研究

Ｎ－ＣＷＳ在线只鼠体内１００－２００μｇ可明显抑制Ｂ１６黑色素瘤细胞在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内的生长。Ｎ－ＣＷＳ腹腔给药后３天可明显增强小鼠脾脏自然钉伤细胞（ＮＫ）和腹腔巨噬细胞的杀伤活性，认为Ｎ－ＣＷＳ的抑制Ｂ１６黑色素瘤作用与其激活小鼠细胞免疫功能有关。体外实验结果表明，当有ＩＦＮ－γ存在的条件下，Ｎ－ＣＷＳ对小鼠腹腔Ｍψ释放ＮＯ及ＴＮＦ都具有显著促进作用，认为这一作用与Ｎ－ＣＷＳ激活小鼠腹腔Ｍ     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

ＩＬ—６在Ｕ９３７细胞中特异、持续激活ＳＴＡＴ３

目的 探讨ＩＬ－６在Ｕ９３７细胞中产生生物学效应的信号转导基础。方法 检测ＩＬ－６对Ｕ９３７细胞生长与分化的影响。并采用凝胶阻滞电泳法,检测ＩＬ－６在Ｕ９３７细胞中激活核因子的情况。结果 ＩＬ－６可诱导Ｕ９３７细胞向巨噬细胞方向分化。分化的细胞酸性醋酸酯酶（ＡＮＡＥ）活性、硝基蓝四唑（ＮＢＴ）还原能力及ＣＤ５４表达增强,ＳＴＡＴ３可被ＩＬ－６显著激活,其活性呈一定的剂量与时间依赖性;而ＮＦ－ＩＬ６、ＮＦ－kB、ＡＰ－１及其它ＳＴＡＴ家族成员则无明显激活。结论 Ｕ９３７细胞的终分化可能是ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３通路介导的。     

亚急性重型肝炎患者TNF-α和IL-1表达及IL-4对其的调控

目的：分析ＩＬ－４对亚急性重型肝炎（亚重肝）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣＳ）ＴＮＦ－α和ＩＬ－１的调控作用,评价ＩＬ－４在亚重肝治疗中的潜在价值。方法：应用细胞生物学、免疫组化和ＲＴ－ＰＣＲ等方面测定ＰＢＭＣＳ ＴＮＦ－α、ＩＬ－１的表达。结果：亚重肝患者ＰＢＭＣＳ ＴＮＦ－α、ＩＬ－１表达水平均较正常人显著增高血糖素含量和虽然ＩＬ－４ ＭＲＮＡ及蛋白质的表达与正常人比较一差异无但ＩＬ－４ ＭＲ     

细胞因子M—CSF与卵巢癌

巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）的研究是当前细胞生物学领域的热点之一，它是探讨细胞生长调节剂奥秘的一条重要途径，上皮性卵巢癌细胞可自身分泌Ｍ－ＣＳＦ，并促进癌细胞增殖与转移，因此，Ｍ－ＣＳＦ有望成为一有用标记物，有利于卵巢癌的早期诊断，亦为卵巢癌基因治疗提供理论依据。     

α—TCP骨水化产物的生物相容性研究

α－磷酸三钙（α－ＴＣＰ）骨水泥具有水化硬化特性，在特定条件下，其水化产物为羟基磷灰石（ＨＡＰ）。以聚甲基丙烯酸甲酯（ＰＭＭＡ）为对照材料，通过体外实验、动物实验，结合ＳＥＭ观察，表明材料具有优良的生物相容性，在动物体内可继续水化硬化，形成蜂窝状结构；动物骨组织可逐渐长入蜂窝状结构中，形成牢固结合。