Ⅳ型胶原、MMPs和TIMPs在放射性肺损伤重建中的作用

目的探讨Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）在放射性肺损伤早期重建中的作用。方法用20研Gy^60Coγ射线照射大鼠右胸部，建立放射性肺损伤模型，1、2、4周后分别取材；用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法，从基因表达和蛋白质合成水平结合图像分析对肺组织Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2 mRNA进行定量分析。结果实时定量PCR基因检测：Ⅳ型胶原表达于1周时升高，2周时下降；MMP-2在2周时达高峰，与Ⅳ型胶原成相反变化趋势；MMP-9呈明显的升高、下降、再升高趋势，与Ⅳ型胶原变化趋势相同；TIMP-1表达较低，各时间点之间无明显差异；TIMP-2呈现略升高、降低、升高趋势，与MMP-2表达相反。免疫组化-图像分析：肺组织Ⅳ型胶原含量于1周即明显增加，2周开始下降；MMP-2在2周时下降，随后升高，后期与Ⅳ型胶原呈相反趋势；MMP-9变化趋势同Ⅳ型胶原，但程度明显高于后者；TIMP-1于2周时轻度升高，与MMP-9趋势相反。结论Ⅳ型胶原、MMP-2和MMP-9及其组织抑制物参与放射性肺损伤早期的无效重建过程，MMP-2和MMP-9具有降解Ⅳ型胶原作用；Ⅳ型胶原降解障碍可能与肺纤维化启动有一定关系。     

小鼠放射性肺损伤中细胞间黏附因子-1的表达

目的利用小鼠放射性肺损伤模型，了解细胞间黏附因子-1（ICAM-1）在放射性肺损伤不同阶段中的表达及其意义。方法成年雌性C57BL／6小鼠90只，按随机表分作2组：①对照组（36只）：不做任何处理；②照射组（54只）：全肺单次照射12Gy。于照射后1、24和72h及1、2、4、8、16和24周取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织，分别用HE和Masson染色在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积；免疫组织化学S-P法观察ICAM-1蛋白和白细胞共同抗原（CD45）蛋白表达，用碱水解法测定羟脯氨酸含量和实时定量RT—PCR法检测ICAM-1 mRNA相对含量。结果光镜下，照射组小鼠肺组织较对照组组织学改变和胶原纤维沉积明显，免疫组织化学结果显示，对照组小鼠肺组织中ICAM-1和炎性反应细胞的阳性细胞数均相对较低，照射组的阳性细胞数较之明显增高（P〈0．01）；羟脯氨酸含量的测定结果显示，照射组小鼠肺组织中的羟脯氨酸含量较对照组明显增高（P〈0．05）；实时定量RT-PCR的结果显示，照射组的ICAM-1 mRNA的表达水平较对照组均明显升高（P〈0．01）。结论在放射性肺损伤的过程中，ICAM-1是一重要的细胞因子，不仅介导早期炎性反应细胞的黏附和浸润，还参与后期放射性肺纤维化的形成。     

bFGF、MMPs和TIMPs在肿瘤临床研究中的进展

侵袭生长和转移是恶性肿瘤的特性之一。临床中发现恶性肿瘤患者大多数死于肿瘤的侵袭和转移。研究发现肿瘤的生长、侵袭、转移、预后、复发都与血管生成有关系,肿瘤血管的生成涉及到多种基因的突变和不同细胞因子及受体的表达[1]。     

巨噬细胞金属蛋白酶-12在放射性肺损伤早期组织重建中的作用

目的 探讨巨噬细胞金属蛋白酶(MMP-12)在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用。方法 用20 Gy ⁶⁰Co γ射线对Wistar大鼠进行全胸照射,分别于照后1、2和4周进行肺组织取材,RT-PCR方法检测MMP-12基因表达,酶谱分析法检测MMP-2、MMP-9和MMP-12酶活性,组织特殊染色法检测弹力纤维降解,电镜观察Ⅱ型细胞与肺泡隔间质细胞间的"信息交流(cross talking)"现象,ELISA检测肺泡灌洗液中TGF-β1和TNF-α含量,免疫组化检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 照射后1、2和4周肺组织MMP-12基因表达增加,2~4周MMP-12酶活性增高;照射后1周肺泡基底膜弹力纤维出现降解断裂,4周时最为严重;电镜观察发现肺泡Ⅱ型细胞与间质细胞间发生Cross talking现象,肺泡灌洗液TGF-β1和TNF-α含量与α-SMA免疫组化阳性信号皆随照射后时间延长而增高。结论 照射后肺组织MMP-12表达增加,可能通过降解基底膜弹力纤维启动肺组织重建,导致肺损伤朝着纤维化方向发展。     

雾化吸入γ-干扰素对放射性肺损伤重建的拮抗作用

目的 观察超声雾化吸入γ-干扰素(IFN-γ)对大鼠放射性肺损伤早期组织重建的拮抗作用,并初步探讨其作用机制。方法 将动物分为照射对照组和照射+IFN-γ拮抗组。于照前3d每日雾化吸入IFN-γ,分别于照后10、20和30d肺组织取材,制备石蜡切片,进行苏木素伊红(HE)、天狼猩红和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色;Western blot检测Ⅳ型胶原合成变化;ELISA检测MMP-2、-9和TIMP-1含量变化。结果 照射＋IFN-γ组与照射对照组比较,肺泡隔增宽程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和α-SMA表达明显减少;照射后Ⅳ型胶原表达呈上升趋势,但IFN-γ吸入组较对照组为低;吸入IFN-γ10d可降低MMP-2和TIMP-1表达,而MMP-9表达升高;吸入30d 三者表达均下降。结论 IFN-γ对辐射引起的肺损伤具有明显的治疗作用,其可能的作用机制是IFN-γ降低TIMP-1表达,解除对MMP-9的抑制,进而降解Ⅳ型胶原,拮抗辐射引起的肺损伤后重建。     

氧化应激在放射性肺损伤中的相关研究进展

放射治疗是胸部恶性肿瘤的重要治疗手段。放射性肺损伤是胸部放疗的主要剂量限制因素。射线作用于机体产生大量内源性和外源性活性氧/氮类物质。这些物质通过对DNA、蛋白质及脂膜的直接作用使细胞结构破坏,功能缺失,是早期肺损伤的重要原因。此外,通过一系列细胞、细胞因子的作用,慢性氧化应激逐渐形成,参与细胞通透性增加、组织水肿、细胞外基质纤维蛋白堆积的过程,最终导致放射性纤维化。氧化应激学说为人们更深入地认识放射性肺损伤提供了新的线索和途径,一些抗氧化应激药物也显示了良好的临床应用前景。     

巨噬细胞金属弹力蛋白酶表达在放射性肺损伤形成中的变化特点及意义

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12,又称巨噬细胞金属弹力蛋白酶)表达的动态变化,探讨MMP-12在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(不接受照射),照射后1、2、4周组,每组6只.采用60Co γ射线(20Gy)对大鼠进行全肺照射,按照实验分组分别于照射后1、2、4周行肺组织取材.实时荧光定量FCR法检测MMP-12基因表达;Western blotting分析蛋白的表达变化;酶谱分析检测其酶活性;免疫组化观察MMP-12的组织分布;组织特殊染色法观察弹力纤维降解情况.结果 MMP-12 mRNA表达在照射后1周升高,2周下降,4周达高峰;蛋白表达于2周时明显升高,4周略微下降.MMP-12主要表达在肺泡间隔的巨噬细胞和被激活的成纤维细胞中.随着照射后时间的延长,肺组织损伤程度逐渐加重,肺泡壁与间隔增厚,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,肺泡基底膜内弹力纤维多发性断裂,呈不规则节段性线条散在分布.结论 60Co γ射线可以刺激MMP-12基因和蛋白的表达,说明MMP-12可能在放射性肺损伤早期起着十分重要的作用,推测可能通过降解弹力纤维,破坏基底膜正常结构,从而启动肺组织重建.     

miR-223通过抑制NLRP3防护小鼠急性放射性肺损伤

目的 研究miR-223通过抑制NLRP3对小鼠急性放射性肺损伤的防护。方法 将40只雌性C57BL/6 J小鼠,按随机数表法将小鼠分成4个组：健康对照组、单纯照射组、照射+miR-223组和照射+阴性对照（NC）组,每组10只。其中3个照射组给予15 Gy X射线全肺单次照射,照射+miR-223组和照射+NC组自照射前1 d开始至照射后14 d,隔天尾静脉注射10 nmol miR-223 agomir或agomir-NC。照射后第14 d取肺组织标本,HE染色观察病理变化,免疫组织化学法观察IL-1β和IL-18的定位和表达,实时荧光定量PCR检测miR-223和NLRP3的表达,Western blot检测NLRP3和Caspase-1的表达,ELISA检测肺组织中IL-1β和IL-18的表达。结果 辐射导致小鼠肺组织内miR-223表达下降和NLRP3的表达升高,给予miR-223 agomir可以抑制NLRP3的升高,同时减轻肺部炎症。实验结果显示,与单纯照射组相比,miR-223可以减轻小鼠肺组织的急性炎症反应。使得肺组织中IL-1β和IL-18表达下降（t=10.16、6.00,P<0.05）。肺组织NLRP3 mRNA表达下降（t=3.22,P<0.05）。Western blot结果显示,与单纯照射组相比,照射+miR-223组的NLRP3,Caspase-1蛋白表达下降（t=12.47、4.95,P<0.05）。Elisa结果也表明,在照射+miR-223组中炎症因子IL-1β和IL-18表达下降（t=8.22、8.47,P<0.05）。结论 miR-223通过抑制NLRP3的表达,抑制炎症因子IL-1β和IL-18的分泌,减轻炎症反应,对急性放射性肺损伤具有保护作用。     

剂量体积直方图评价肺癌的放射性肺损伤

放射治疗是肺癌的主要治疗手段之一，但局部控制率和生存率低，提高剂量可望提高局部控制率和生存率，三维适形放疗可适当提高靶区剂量，降低靶区周围正常组织的受照射剂量，从而降低并发症的发生率。剂量体积直方图（DVH）对正常组织的受照射剂量提供一个量化的体积一剂量分布图，根据它能够判断某一治疗计划产生正常组织并发症的可能性（NTCP），即肺放射损伤即急性放射性肺炎和放射性肺纤维化。笔者针对48例非小细胞肺癌患者进行根治性放疗，对其临床观察，同时借助于相关的NTCP模型分析放射性肺损伤情况。     

放射性肺损伤防治的研究进展

放射性肺损伤是胸部肿瘤放疗、骨髓移植预处理、核辐射事故、核武器损伤的常见症状，其发生机理常与活性氧自由基和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)等细胞因子的产生、表达及其信号传导有关，临床上一般表现为早期放射性肺炎和后期放射性肺纤维化两个阶段，由此造成的呼吸衰竭是放射性损伤的主要致死原因之一。放射性肺损伤一旦发生，临床上目前没有令人满意治疗措施，因此，     

强力霉素对恶性肿瘤细胞金属蛋白酶表达和分泌的调节及其意义

目的 :揭示金属蛋白酶表达和分泌与恶性肿瘤侵袭转移的关系 ,并探索强力霉素应用于恶性肿瘤侵袭转移治疗的可能。方法 :用免疫组织化学方法和明胶电泳酶谱法研究强力霉素作用后PC - 3细胞和SAcc83细胞中MMP - 2表达和分泌的变化及其侵袭转移能力的变化。结果 :经强力霉素处理后的PC - 3细胞和SAcc83细胞MMP - 2的表达和分泌明显减少 ,侵袭能力下降 (P <0 .0 1)。结论 :MMP - 2的表达和分泌与恶性肿瘤的侵袭与转移能力有关。强力霉素有可能应用于恶性肿瘤侵袭转移的治疗。     

化疗栓塞对肝细胞癌MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的 探讨MMP-2、TIMP-2在肝细胞癌(HCC)中表达的意义及化疗栓塞对其表达的影响.方法 47例经手术病理证实的原发性肝细胞痛,其中25例单纯手术切除,22例经导管动脉化疗栓塞(TACE)后行Ⅱ期切除,用免疫组化方法检测两组标本MMP-2、TIMP-2蛋白表达.结果 有、无转移或完整包膜的肝细胞癌MMP-2表达差异有统计学意义(χ2=6.518、6.038,P<0.05);与单纯手术组相比,TACE组肝细胞癌MMP-2表达明显降低(χ2=4.854,P<0.05)、TIMP-2表达明显增高(χ2=5.144,P<0.05);MMP-2与TIMP-2表达存在显著负相关(r=-0.392,P<0.05).结论 MMP-2、TIMP-2与HCC的侵袭转移潜能相关,化疗栓塞有助于抑制HCC侵袭与转移潜能.     

MEBO对糖尿病溃疡大鼠创面组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2动态表达的影响

目的 探讨分析湿润烧伤膏（MEBO）对糖尿病溃疡大鼠创面组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）及基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）表达水平的影响。方法 从160只健康雄性SD大鼠中随机选取120只制备大鼠糖尿病模型,其余40只正常喂养;最终选取90只造模成功大鼠随机分为模型组、MEBO组与bFGF组,每组30只,与此同时随机选取未予特殊处理的30只大鼠作为空白组,所有大鼠均做全层皮肤缺损创面,空白组与模型组大鼠创面予以凡士林油纱换药处理、MEBO组大鼠创面予以MEBO药纱换药处理、bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rb-bFGF）药纱换药处理,对比观察各组大鼠干预第4、6、12天时创面愈合率以及MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2与胶原蛋白水平变化情况。结果 （1）干预第4、6、12天,模型组大鼠创面愈合率均明显低于其他各组（P均＜0.05）,空白组大鼠创面愈合率均明显高于其他各组（P均＜0.05）,而MEBO组与bFGF组间无明显差异（P均＞0.05）。（2）干预第4、6、12天,模型组大鼠创面组织中MMP-9及MMP-2 mRNA表达水平均明显高于其他各组（P均＜0.05）,TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达水平均明显低于其他各组（P均＜0.05）;除干预第6天MEBO组大鼠创面组织中TIMP-1 mRNA表达水平明显高于bFGF组（P＜0.05）外,其余各时间点MEBO组与bFGF组大鼠创面组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达水平均无明显差异（P均＞0.05）。（3）干预第4、6、12天,模型组大鼠创面组织中胶原蛋白水平明显低于其他各组（P均＜0.05）;除干预第4天MEBO组大鼠创面组织中胶原蛋白水平明显高于bFGF组（P＜0.05）外,其余各时间点MEBO组与bFGF组大鼠创面组织中胶原蛋白水平均无明显差异（P均＞0.05）。结论 MEBO可通过调控糖尿病溃疡大鼠创面组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达水平改善胶原蛋白过度降解,维持细胞外基质代谢平衡,进而促进创面愈合,调节MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2的比例失衡可能是其促进糖尿病溃疡创面愈合的作用靶点。     

Gx加速度对家兔肺组织基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶抑制剂1水平的影响

目的 通过离体实验的方法,观察-Gx加速度作用对家兔肺脏组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)9和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP）1表达水平的影响,探索-Gx致肺损伤的作用机制。方法 选取1月龄的雄性新西兰家兔20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组动物采用水平加速度试验平台进行-Gx加速度作用,加速度作用峰值3.6 G,持续时间为2 s,每天进行加速度作用20 次,间隔5 min,连续30 d。对照组动物不进行加速度作用,其他处理同实验组。采用免疫组化方法检测各组动物肺组织MMP9和TIMP1蛋白含量变化情况。结果 ①对照组动物肺组织每高倍镜视野MMP9阳性细胞数为（13.7±7.2）,-Gx暴露组动物每高倍镜视野阳性细胞数为（28.3±12.5）,与对照组相比,-Gx暴露组动物肺组织的MMP9表达水平显著增高（P<0.05）;②对照组动物肺组织每高倍镜视野TIMP1阳性细胞数为（17.4±10.2）,-Gx暴露组动物每高倍镜视野阳性细胞数为（8.6±5.9）,与对照组相比,-Gx暴露组动物肺组织的TIMP1表达水平显著降低（P<0.05）。结论 -Gx水平加速度作用可导致家兔肺组织MMP9和TIMP1表达水平的改变,其可能参与了-Gx加速度作用致肺损伤的发生发展过程。     

骨肉瘤环氧化酶2和基质金属蛋白酶9表达与肿瘤微血管密度关系

目的：观察并探讨环氧化酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases-9,MMP-9）在骨肉瘤中的表达规律及与肿瘤微血管密度（microvessel density,MVD）的关系。方法：2002—2007年经手术切除并经病理证实的57例骨肉瘤患者的肿瘤组织,临床分期Ⅰ期15例,Ⅱ期19例,Ⅲ期23例,应用免疫组织化学方法检测骨肉瘤和18例骨软骨瘤组织中COX-2和MMP-9的表达,通过CD34表达检测骨肉瘤微血管密度。结果：骨肉瘤COX．2和MMP-9总阳性率分别为70．2％（40／57）和66．7％（38／57）,显著高于骨软骨瘤。Ⅲ期骨肉瘤COX-2和MMP-9阳性表达率均显著高于Ⅰ期和Ⅱ期骨肉瘤,骨肉瘤COX-2与MMP-9表达分布有相关-致性。Ⅲ期骨肉瘤MVD显著高于I期骨肉瘤和Ⅱ期骨肉瘤。COX-2阳性骨肉瘤MVD显著高于COX-2阴性骨肉瘤;MMP-9阳性骨肉瘤MVD显著高于MMP-9阴性骨肉瘤。结论：骨肉瘤COX-2和MMP-9表达具有-致性,且与骨肉瘤临床分期及肿瘤微血管生成密切相关。     

硫化氢对大鼠舱室内肢体爆炸伤后肺损伤的作用

目的研究外源性硫化氢（H2S）对大鼠舱室内肢体爆炸伤后肺损伤的作用,探讨H2S相关药物在舱室战伤救治中的应用价值。方法80mg二硝基重氮酚（DDNP）纸制点爆源紧贴大鼠左后肢跗关节内侧于舱室内引爆致伤。大鼠随机分为单纯致伤组（E组：n=32）、致伤＋硫氢化钠（NaHS）组（S组：5mg／kgNaHS,ip;n=16）和正常对照组（C组：n=8）。收集大鼠肺组织和血标本。测定大鼠胸部承受冲击波压力,测定肺组织胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）活力和血浆H2S浓度、TNF-α、IL-6、IL-10浓度和肺含水量,观察肺组织病理学变化。结果爆炸致伤后大鼠肺组织CSE活力和血浆H,s浓度显著下降（P〈0．05）,TNF-α、IL-6、IL-10浓度及肺含水量较正常对照大鼠相应值显著升高（P〈0．05或P〈0．01）,肺出血、水肿、炎细胞浸润和肺泡结构破坏明显;而早期给予5mg／kgNaHS后伤鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-10浓度及肺含水量显著降低（P〈0．05,VSE组）,肺出血、水肿和炎细胞浸润程度明显减轻。结论大鼠舱室内肢体爆炸伤可引起严重的肺损伤;而早期适量给予H2S则可明显抑制肺炎性反应水平,减轻爆炸伤后肺损伤。     

PBK和基质金属蛋白酶9在宫颈癌中的表达及对同步放化疗疗效的影响

目的 探讨DNA损伤修复因子PBK（PDZ连接激酶）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在宫颈癌中的表达及对同步放化疗疗效的影响。方法 收集2014年1月至2016年7月共65例宫颈鳞癌根治性同步放化疗患者的病理标本,通过免疫组织化学法检测PBK和MMP-9的表达情况。体外照射采用调强放射治疗,剂量为50 Gy/25次;外照射18次后予以高剂量率后装治疗,30~36 Gy/5~6次,3~4周。外照射开始后给予每周化疗,采用单药顺铂方案,顺铂（DDP）40 mg/m²静脉滴注,连续2~6周。定期随访所有患者,分析患者临床特征、预后与PBK和MMP-9之间的关系。结果 PBK在宫颈癌标本中的阳性表达率为92.3%,MMP-9为69.2%。PBK高表达组的宫颈癌患者总生存率（OS）和疾病无进展生存率（PFS）均明显低于PBK表达低的患者（χ²=4.324、8.068,P<0.05）,MMP-9高表达组患者的PFS明显低于低表达组（χ²=5.134,P<0.05）,PBK和MMP-9联合高表达组的OS和PFS比联合低表达组低（χ²=5.382、9.364,P<0.05）。结论 PBK和MMP-9在宫颈癌组织中的表达存在差异与宫颈癌的预后相关,联合检测PBK和MMP-9的表达水平可能有助于预测宫颈癌同步放化疗后的疗效。     

Effects of endotoxin lung injury on NMR T2 relaxation

The effects of endotoxin injury on lung NMR relaxation times (T₁, CPMG T₂, and Hahn decay constant (Hahn T₂)) were studied in excised unperfused rat lungs. Blinded histologic examination showed no clear-cut separation between endotoxin and control lungs. Morphometric lung tissue volume density and gravimetric lung water content did not differ significantly between the two groups. In contrast, the values of the fast, intermediate, and slow T₂ components, obtained by multiexponential analysis of the CPMG decay curve, increased markedly after endotoxin administration, with minimal overlap between endotoxin and control values. The response of Hahn T₂ was, in general, in the same direction as that of CPMG 7₂; however, Hahn T₂ may be more affected by measurement errors and may be less sensitive to the presence of lung injury. t₁ showed minimal changes after injury. The present data suggest that CPMG 7₂ measurements can consistently detect the presence of lung injury even when conventional histologic, morphometric, and gravimetric studies provide negative or equivocal results, and that the CMPG T₂ method is superior, in this respect, to the Hahn decay method. T₁ does not appear to be sensitive to lung injury in the absence of significant lung water accumulation.     

小鼠感染铜绿假单胞菌后肺组织后TLR2和TLR4基因表达的变化及意义

目的：通过建立小鼠铜绿假单胞菌感染的模型,探讨小鼠感染肺炎衣原体后肺脏组织Toll样受体2和4mRNA表达变化及意义。方法：BALB/c雄性小鼠48只,随机分为实验组和对照组,实验组气管内接种铜绿假单胞菌,对照组接种无菌生理盐水,再分别按预定的处死时间1、3、5、和7 d,取肺脏组织,应用RT-PCR检测肺组织TLR2和TLR4的mRNA表达变化。结果：小鼠感染铜绿假单胞菌后,引起TLR2和TLR4 mRNA表达明显变化。结论：肺铜绿假单胞菌感染与TLR表达的变化密切相关,TLR mRNA的变化增强了机体非特异免疫能力,并随着铜绿假单胞菌感染程度的加重与减轻TLR2和TLR4的mRNA的表达变化上调或下降。